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LncRNA HCG18影响鼻咽癌细胞PD-L1表达及CD8+T细胞的杀伤功能研究
编辑人员丨5天前
目的:探究LncRNA HCG18调控CD8+T细胞抗鼻咽癌细胞的功能及机制.方法:qRT-PCR检测鼻咽癌组织及癌旁组织 HCG18表达以及人鼻黏膜上皮细胞 HNEpC和人鼻咽癌细胞系CNE1、CNE2、HONE-1、HNE-2 中 HCG18 表达.CNE1 细胞分为 si-HCG18 组、si-NC 组、si-HCG18+PD-L1组,HNE-2细胞分为 HCG18组、Vector组和 HCG18+sh-PD-L1组,上述各组CNE1细胞和 HNE-2细胞分别与 CD8+T 细胞共孵育 24h(si-HCG18+CD8+T 组、si-NC+CD8+T 组、si-HCG18+PD-L1+CD8+T组、HCG18+CD8+T 组、Vector+CD8+T 组和 HCG18+sh-PD-L1+CD8+T 组),酶联免疫吸附试验(Enzyme Linked Immunosorbent Assay,ELISA)检测共孵育体系中INF-γ、TNF-α、IL-2浓度,细胞毒性试剂 盒检测肿瘤细胞裂解率.Western blot检测PD-L1蛋白表达.双荧光素酶报告基因实验验证HCG18与miR-20b-5p的靶向关系,miR-20b-5p与PD-L1的靶向关系.结果:鼻咽癌组织中HCG18表达显著高于癌旁组织,CNE1、CNE2、HONE-1、HNE-2细胞中HCG18表达均显著高于 HNEpC细胞(P<0.05).si-HCG18组CNE1细胞中PD-L1表达显著低于si-NC 组(P<0.05),HCG18组 HNE-2细胞PD-L1表达显著高于 Vector 组(P<0.05),相比于 si-NC+CD8+T 组,si-HCG18+CD8+T 组共孵育体系中 INF-y、TNF-α、IL-2浓度显著增加(P<0.05),CNE1细胞裂解率显著增加(P<0.05),相比于si-HCG18+CD8+T组,si-HCG18+PD-L1+CD8+T 组共孵育体系中 INF-γ、TNF-α、IL-2 浓度显著降低(P<0.05),CNE1 细胞裂解率显著降低(P<0.05).相比于Vector+CD8+T组,HCG18+CD8+T组共孵育体系中INF-γ、TNF-α、IL-2浓度显著降低(P<0.05),HNE-2细胞裂解率显著降低(P<0.05),相比于HCG18+CD8+T组,HCG18+sh-PD-L1+CD8+T组共孵育体系中INF-γ、TNF-α、IL-2浓度显著增加(P<0.05),HNE-2细胞裂解率显著增加(P<0.05).miR-20b-5p 为 HCG18 靶基因,PD-L1 为 miR-20b-5p 靶基因.结论:HCG18 上调鼻咽癌细胞PD-L1表达并且抑制CD8+T细胞的抗肿瘤活性.
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编辑人员丨5天前
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微创环切术对牙列缺损种植患者炎症反应及牙槽嵴顶骨吸收的影响
编辑人员丨5天前
目的:探讨微创环切术对牙列缺损种植患者炎症反应及牙槽嵴顶骨吸收的影响.方法:选择2021年6月-2023年6月在丽水市中医院接受牙列缺损种植术的患者198例,根据治疗方式分为微创组(n=100)和传统组(n=98).微创组采用微创环切术,传统组采用传统翻瓣术.比较2组患者手术相关指标、炎症因子水平、疼痛介质、牙槽嵴顶骨吸收量、种植体松动情况、生活质量及并发症发生率.采用SPSS 27.0软件包对数据进行统计学分析.结果:微创组手术时间、术后VAS评分、术后疼痛反应时间均显著低于传统组(P<0.05).微创组白细胞介素8(IL-8)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、干扰素γ(INF-γ)、血清淀粉样蛋白A(SAA)、P物质(SP)、降钙素基因相关肽(CGRP)、5羟色胺(5-HT)水平均显著低于传统组(P<0.05).微创组患者牙槽嵴顶骨吸收量显著低于传统组(P<0.05),2组种植体松动度和种植体留存率相比无显著差异(P>0.05).微创组患者OHIP-14量表各维度评分显著低于传统组(P<0.05).微创组与传统组并发症发生率相比无显著差异(P<0.05).结论:微创环切术相比传统翻瓣术,在减少手术时间、降低术后炎症因子和疼痛介质水平、减少牙槽嵴顶骨吸收量及提高口腔健康方面表现更优,可广泛用于牙列缺损种植术中.
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编辑人员丨5天前
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人脐带间充质干细胞对重症急性胰腺炎患者树突状细胞成熟、分化的作用及参与炎症调节的机制研究
编辑人员丨5天前
目的:探讨人脐带间充质干细胞(hUC-MSCs)对SAP患者树突状细胞(DCs)成熟、分化的作用及参与炎症调节的机制。方法:采集郑州大学附属郑州中心医院行剖宫产的足月胎儿脐带4~5 cm,原代分离培养hUC-MSCs,采用流式细胞术进行表型鉴定和成脂、成骨染色。采集5例SAP患者外周血20 ml,采用淋巴细胞分离液分离出单核细胞,以粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、IL-4、肿瘤坏死因子(TNF-α)进行诱导培养出DCs,根据培养方式不同分为DCs组、hUC-MSCs+DCs组、hUC-MSCs+DCs+NS398组(NS398为NF-κB下游调控基因COX-2的特异性抑制剂)。应用流式细胞术检测DCs表型,测定细胞培养24 h上清液中的IL-1β、IL-1α、IL-2、IL-6 、IL-10水平。采用蛋白质免疫印迹法检测Toll样受体4(TLR4)、IKKα及NF-κB-p65蛋白表达量。结果:成功培养出hUC-MSCs,其表面标志物CD 90、CD 105、CD 73表达阳性,并可向脂肪细胞、骨细胞分化。随着培养时间延长,DCs由未成熟向成熟分化。与DCs组比较,hUC-MSCs+DCs组的调节性DCs(regDCs)比例增加,其标志物CD 11b显著上调[ (14.26±1.25)%比(4.87±0.58)%],CD 1a 、CD 11c显著下调[(2.81±0.34)%比(13.62±1.52)%、(3.88±0.5)%比(11.8±1.22)%],差异均有统计学意义( P值均<0.05)。培养上清液IL-1β、INF-γ、IL-6表达下调,但差异无统计学意义;而促炎因子IL-1α显著降低[(14.91±2.58)ng/L比(30.19±7.75)ng/L],抑炎因子IL-10显著升高[(17.03±4.69)ng/L比(1.83±0.14)ng/L]。NF-κB-p65、TLR4蛋白表达显著下调(0.74±0.02比0.97±0.01、0.89±0.01比1.72±0.01),IKKα蛋白表达显著上调(1.12±0.01比0.21±0.01),差异均有统计学意义( P值均<0.05)。与DCs组及hUC-MSCs+DCs组比较,hUC-MSCs+DCs+NS398组的NF-κB-p65与TLR4表达量显著下调(0.34±0.01比0.97±0.01、0.74±0.02,0.14±0.01比1.72±0.01、0.89±0.01),而IKKα蛋白表达显著上调(1.68±0.01比0.21±0.01、1.12±0.01),差异均有统计学意义( P值均<0.05)。 结论:hUC-MSCs能够抑制SAP患者DCs成熟、分化,并诱导出CD 11bhigh CD 1alow CD 11clow的regDCs参与免疫调节,其机制可能通过TLR4/IKKα/NF-κB/COX-2途径抑制炎症级联反应,发挥抗炎作用。
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编辑人员丨5天前
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足细胞基因与激素抵抗型肾病综合征的相关性研究进展
编辑人员丨5天前
肾病综合征是以大量蛋白尿、血清低白蛋白血症、水肿、高脂血症为基本特征的临床综合征,大部分患儿在激素治疗下可以获得缓解,但有15%~20%的患儿出现激素抵抗,最终进展为终末期肾病。与激素抵抗型肾病综合征(steroid resistant nephrotic syndrome,SRNS)相关的基因有:编码足细胞狭缝隔膜的NPHS1、NPHS2、CD2AP、TRPC6基因,编码足细胞骨架蛋白的ACTN4、INF2基因,编码足细胞细胞核的WT1基因,编码足细胞线粒体蛋白的COQ2、COQ6基因,编码肾小球基底膜蛋白的LAMB2基因等。这些分子中的一个发生突变就可以引起SRNS,因此SRNS又称为足细胞分子病。
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编辑人员丨5天前
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抗MDA5抗体阳性皮肌炎患者临床特点与预后分析
编辑人员丨5天前
目的:探讨抗黑色素瘤分化相关基因5(MDA5)抗体阳性皮肌炎(DM)患者临床特点与预后的关系。方法:回顾分析2021年1月至2022年2月在华中科技大学同济医学院附属同济医院确诊为抗MDA5抗体阳性DM患者15例,根据转归情况分为好转组(9例),死亡组(6例),收集相关临床资料,比较分析临床特点与预后的关系。结果:15例抗MDA5抗体阳性DM患者中,好转组与死亡组年龄、性别差异无统计学意义(均 P>0.05);两组Gottron征、眶周皮疹、溃疡性皮疹、技工手、关节炎、肺间质病变(ILD)发生率差异无统计学意义(均 P>0.05);而死亡组发热、快速进展性间质性肺病(RPILD)的发生率明显高于好转组,差异具有统计学意义(均 P<0.05);两组患者白细胞计数、淋巴细胞计数、肌酸激酶(CK)、乳酸脱氢酶(LDH)、铁蛋白、血沉(ESR)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平差异均无统计学意义(均 P>0.05),而死亡组干扰素-γ(IFN-γ)、白细胞介素-6(IL-6)、超敏C反应蛋白(hsCRP)水平明显高于好转组,差异有统计学意义(均 P<0.05);两组患者淋巴细胞亚群各项指标较参考值均明显下降,但两组间差异无统计学意义(均 P>0.05);两组患者在合并其他肌炎抗体方面差异无统计学意义,检测到其他肌炎抗体最多的为肌炎相关抗体抗Ro-52抗体,好转组7例,死亡组5例。 结论:抗MDA5抗体阳性DM患者入院时INF-γ、IL-6及hsCRP明显升高,病程中合并发热、RPILD的患者提示预后较差。
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编辑人员丨5天前
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肿瘤相关免疫功能评价指标的增龄研究
编辑人员丨5天前
目的:探讨随年龄变化的人体免疫功能评价指标变化特点,为建立肿瘤免疫治疗疗效评价体系提供科学依据。方法:纳入并收集2019年1—12月北京医院进行常规体检的478例健康人的血液标本,建立临床信息库,根据年龄分为青年组(<40岁,257例)和老年组(≥70岁,221例),比较两组健康人外周血中与肿瘤免疫密切相关基因的表达量、血浆中的细胞因子、T细胞增殖能力和T细胞及自然杀伤(NK)细胞杀伤能力等细胞功能的差异。结果:实时定量荧光PCR检测肿瘤免疫相关基因:程序性死亡受体-1( PD1)、补体C3( C3)、补体C4( C4)、高敏C-反应蛋白( HsCRP)、肿瘤坏死因子-α( TNFα)、干扰素-γ( INF- γ)、白细胞素6( IL-6)、白细胞介素8( IL-8)、细胞毒T淋巴细胞相关抗原4( CTLA-4)、核转录因子( NF- κB)、促进红细胞存活的长链基因间非编码性RNA( lincRNA- EPS)、髓样调节Bim诱导死亡的长链非编码RNA( lncRNA- Morrbid)、环氧合酶2的长链基因间非编码性RNA( lincRNA- Cox2)、树突状细胞中特异性高表达的长链非编码RNA( Lnc- DC)和环状RNA-7( ciRS-7)的表达情况,结果显示与青年组相比,老年组免疫相关基因 C4的mRNA表达水平下降[青年组(1.01±0.18)比老年组(0.64±0.13), P=0.047],其他基因差异无统计学意义( P>0.05)。酶联免疫吸附试验(ELISA)检测肿瘤免疫相关的蛋白:其中IL-6[青年组(249.30±100.02)ng/L比老年组(283.00±94.98)ng/L, P=0.021]、HsCRP[青年组(2543.00±1111.89)ng/L比老年组(3056.00±1056.61)ng/L, P=0.002]、INF-γ[青年组(362.40±383.67)ng/L比老年组(500.40±502.27)ng/L, P=0.0470]和TNF-α[青年组(20.74±29.47)ng/L比老年组(33.09±48.91)ng/L, P=0.0416]在老年组表达水平升高,C4[青年组(449.50±51.17)ng/L比老年组(407.10±59.78)ng/L, P<0.0001]在老年组表达水平低于青年组。T淋巴细胞增殖实验显示同等条件下老年组CD3 + T淋巴细胞可增殖4代,而青年组的T细胞可增殖5代。NK细胞对肿瘤细胞的杀伤实验显示老年组的NK细胞促使对应的靶细胞A549释放LDH的水平低于青年组( P<0.05),而不同年龄段之间的T细胞对肿瘤细胞的杀伤功能差异无统计学意义( P>0.05)。 结论:随着年龄的增长,人外周血IL-6、HsCRP、INF-γ和TNF-α水平升高,C4水平明显降低,T细胞增殖能力减弱,NK细胞杀伤肿瘤细胞的能力减弱。
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编辑人员丨5天前
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幼年型粒单核细胞白血病7例临床分析
编辑人员丨5天前
目的:分析幼年型粒单核细胞白血病(JMML)的临床特征,探讨该病的诊治特点。方法:回顾性分析新乡医学院第一附属医院2015年4月至2020年2月收治的JMML患儿7例的临床资料,随访不同治疗方案的临床疗效。结果:7例JMML患儿中位诊断年龄8个月4 d;发热是主要就诊原因,多伴肝脾肿大。外周血白细胞中位值36.1×10 9/L,单核细胞中位值4.5×10 9/L,血红蛋白中位值88 g/L,血小板中位值47×10 9/L。6例外周血涂片可见髓系幼稚细胞。染色体检查:1例为-7单体,6例为正常核型。6例胎儿血红蛋白增高。基因检测4例:1例PTPN11+NF1突变,2例N-RAS突变,1例K-RAS突变。3例放弃治疗,3例接受低强度化疗,均因合并感染死亡;1例接受异基因造血干细胞移植,随访14个月仍无事件生存。 结论:JMML发病年龄小,临床特异性差,基因检测有助于早期诊断,低强度化疗可延长生存期但不能改善预后,感染为主要死亡原因,造血干细胞移植是唯一可能治愈该病的方法。
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编辑人员丨5天前
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伴JAK3基因突变的普通变异型免疫缺陷病1例
编辑人员丨5天前
患者,男,20岁,因"反复瘀斑3个月"于2020年10月就诊于我院。患者于入院前3个月无明显诱因出现皮肤多处瘀斑,可自行消退,未在意。此后反复发作,2个月前就诊于外院,血常规:WBC 8.41×10 9/L,HGB 162 g/L,PLT 5×10 9/L,免疫球蛋白IgG 4.57 g/L(正常参考值7~16 g/L),IgA 0.38 g/L(正常参考值0.7~4.0 g/L),IgM 0.36 g/L(正常参考值0.4~2.3 g/L),完善骨髓穿刺等检查诊断"免疫性血小板减少症",给予重组人促血小板生成素(TPO)15 000 U/d联合艾曲泊帕25 mg/d口服,2周后血小板计数升至160×10 9/L,此后以艾曲泊帕25 mg/d维持治疗。2020年10月瘀斑再发而入住我院。起病以来无发热,否认肝病史和特殊家族史。入院后复查血常规:WBC 7.05×10 9/L,HGB 157 g/L,PLT 6×10 9/L。网织血小板31%,球蛋白20.2 g/L,IgG 5.15 g/L,IgA 0.54 g/L,IgM 0.38 g/L,肝炎病毒学、甲状腺功能、风湿免疫相关抗体、淋巴细胞亚群、调节性T细胞(Treg)比例均无异常。流式细胞术检测血浆T细胞相关细胞因子(IL-2、IL-4、IL-6、IL-10、TNF-α、INF-γ和IL-17A)浓度无异常。肺CT和腹部彩超无异常。骨髓细胞形态学检查:增生活跃,粒系、红系、淋巴系形态和比例未见异常,全片见巨核细胞1515个,颗粒巨核细胞为主,未见产板巨核细胞,提示巨核细胞成熟障碍。染色体核型46,XY[4]。追问病史,患者自幼体弱,10岁前几乎每月均发生"感冒或发热",患者近3年多次血生化检查示球蛋白14~18 g/L(正常参考值20~40 g/L)。患者父母均无免疫球蛋白和血常规异常。
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编辑人员丨5天前
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基于TCGA数据库构建肝细胞癌双硫死亡相关基因(DRGs)预后风险模型及评价
编辑人员丨2024/4/27
目的 基于癌症基因组图谱(the cancer genome atlas,TCGA)数据库构建肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)双硫死亡相关基因(disulfidptosis-related genes,DRGs)预后风险模型及评价.方法 通过生物信息学方法分析TCGA数据库中 371 例HCC样本及 50 例癌旁样本中 15 个DRGs的表达情况,并进行基因本体(gene ontology,GO)功能注释和京都基因和基因组百科全书(Kyoto encyclopedia of genes and genomes,KEGG)富集分析、Kaplan-Meier(KM)生存分析;通过单因素COX回归分析筛选出有统计学意义的DRGs,通过LASSO回归分析及多因素COX回归分析筛选出关键DRGs构建预后风险模型,并根据风险评分将HCC患者分为高风险组和低风险组,制作KM生存曲线和时间依赖的受试者工作特征(receiver operator characteristic,ROC)曲线进行验证评价.结果 与癌旁样本相比,HCC样本 15 个DRGs中FLNA,MYH9,TLN1,ACTB,MYL6,CAPZB,DSTN,ACTN4,SLC7A11,INF2,CD2AP,PDLIM1 和FLNB均表达上调,且差异具有统计学意义(t=1 793~6 310,均P<0.001);经GO功能注释和KEGG富集分析显示,DRGs主要与肌动蛋白细胞骨架和细胞黏附相关的生物过程或途径密切相关.经KM生存分析结果显示,SLC7A11,INF2,CD2AP,MYL6,ACTB高表达组生存率低于低表达组[HR=1.46(1.03~2.07)~1.93(1.36~2.75),均P<0.05].通过单因素COX回归分析、LASSO分析及多因素COX回归分析构建预后风险模型riskscore=(0.247×SLC7A11)+(0.289×INF2)+(0.076×CD2AP)+(0.06×MYL6);计算样本的风险评分,风险评分越高,预后不良的HCC患者人数越多;KM生存分析显示高风险组的总生存率比低风险组低;1,3,5 年的AUC值分别为 0.709,0.661 和 0.648;通过多因素COX回归分析表明SLC7A11[HR=1.832(1.274~2.636),P=0.001]是独立的预后危险因素.结论 四个DRGs构建的预后风险模型在预测HCC患者预后情况有一定的作用.
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编辑人员丨2024/4/27
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基于网络药理学和实验验证探讨加味小柴胡汤治疗咳嗽变异性哮喘的分子机制
编辑人员丨2024/4/13
目的 通过网络药理学、分子对接和实验验证对加味小柴胡汤治疗咳嗽变异性哮喘的主要活性成分及潜在作用机制进行探讨.方法 应用网络药理学预测加味小柴胡汤治疗咳嗽变异性哮喘可能的作用机制,并通过分子对接预测活性成分的结合位点.构建哮喘大鼠模型,将 60只大鼠随机分为正常组、模型组、地塞米松片组[0.5 mg/(kg·d)]、加味小柴胡汤组[5 g/(kg·d)],每组 15只.正常组、模型组给予生理盐水2mL灌胃,每日灌胃2次.给药4周后取大鼠血清及肺组织,ELISA法检测血清白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、白细胞介素-13(interleukin-13,IL-13)、免疫球蛋白E(immunoglobulin E,IgE)、干扰素-γ(interferon-γ,INF-γ)水平,West-ern blot法检测肺组织丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)、GATA结合蛋白-3(GATA-binding protein-3,GATA-3)表达水平.结果 网络药理学共筛选出加味小柴胡汤有效成分1 483种,作用靶点274个,咳嗽变异性哮喘相关靶点7 509个,其交集靶点 204个.GO和KEGG富集分析主要涉及信号转导、炎症反应、细胞凋亡等一系列的生物学反应过程,主要参与表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)、丝裂原活化蛋白激酶 1(mitogen-activated protein kinase 1,MAPK1)、丝裂原活化蛋白激酶 3(mitogen-activated protein kinase 3,MAPK3)、RELA癌基因(RELA proto-oncogene,RELA)、细胞肿瘤抗原p53(cellular tumor antigen P53,TP53)、细胞性骨髓细胞瘤病病毒癌(myelocytomatosis virus carcinoma,MYC)和蛋白激酶Cα(protein kinase Cα,PRKCA)等靶点的调控.分子对接结果 表明,筛选得到的主要活性成分与靶点有较强的结合力.与正常组比较,模型组大鼠肺组织中IL-6、IL-13、IgE、MAPK、GATA-3 升高(P<0.05),INF-γ降低(P<0.05).与模型组比较,地塞米松片组及加味小柴胡汤组IL-6、IL-13、IgE、MAPK、GATA-3 降低(P<0.05),INF-γ升高(P<0.05).与地塞米松片组比较,加味小柴胡汤组大鼠IL-6、IL-13、IgE降低(P<0.05),INF-γ升高(P<0.05).结论 加味小柴胡汤对咳嗽变异性哮喘具有治疗作用,其作用机制可能与EGFR、MAPK1、MAPK3、RELA、TP53、MYC和PRKCA靶点有关.
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编辑人员丨2024/4/13
