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基于Keap1/Nrf2/ARE信号通路探讨丹皮酚改善酒精性肝、脑损伤小鼠氧化应激损伤与炎症的作用机制
编辑人员丨2024/5/11
目的 探讨丹皮酚基于Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白 1(Kelch-like ECH-associated protein 1,Keap1)/核因子 E2 相关因子 2(nuclear factor erythroid 2-related factor 2,Nrf2)/抗氧化反应元件(antioxidant response element,ARE)信号通路改善乙醇刺激所致小鼠肝、脑炎症和氧化应激损伤的作用机制.方法 将 C57BL/6 小鼠随机分为空白组,模型组,水飞蓟宾组(36.8 mg/kg),丹皮酚高、中、低(480、240、120 mg/kg)剂量组,每组 15 只;适应期各组小鼠自由饮用 Liber-DeCarli对照液体饲料,模型复制期空白组小鼠自由饮用 Lieber-DeCarli对照液体饲料,其他组小鼠自由饮用 Lieber-DeCarli乙醇液体饲料并连续灌胃相对应的药液 10d;测定小鼠血脂[三酰甘油(triglyceride,TG)、总胆固醇(total cholesterol,TC)]、肝功能[丙氨酸氨基转移酶(alanine aminotransferase,ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(aspartate aminotransferase,AST)]、炎症因子[白细胞介素(interleukin,IL)-6、IL-1α、IL-1β、肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)-α)]以及氧化应激指标[过氧化氢酶(catalase,CAT)、还原型谷胱甘肽(glutathione,GSH)、超氧化物歧化酶(super oxide dismutase,SOD)、丙二醛(malondialdehyde,MDA)]水平;采用苏木精—伊红染色法、油红 O染色观察各组小鼠肝、脑组织形态变化;采用 Western blot法、免疫荧光法以及 qRT-PCR法检测小鼠肝、脑组织Keap1/Nrf2/ARE信号通路相关蛋白及 mRNA表达水平.结果 与模型组比较,丹皮酚高剂量组小鼠体质量显著增加(P<0.05),血脂(TG、TC)、肝功能(ALT、AST)、炎症因子(IL-6、IL-1α、IL-1β、TNF-α)、氧化应激指标(CAT、GSH、SOD)水平显著升高(P<0.05),MDA含量显著降低(P<0.05);小鼠肝、脑组织 Nrf2、血红素氧合酶-1、醌 NADH脱氢酶 1、谷氨酸—半胱氨酸连接酶催化亚基蛋白及 mRNA表达水平显著升高(P<0.05),Keap1 蛋白及 mRNA表达水平显著降低(P<0.05);丹皮酚高剂量组小鼠肝、脑组织病理状态明显改善.结论 丹皮酚能显著减轻乙醇诱导的小鼠肝、脑炎症和氧化应激损伤,其机制可能是通过调控 Keap1/Nrf2/ARE信号通路实现的.
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编辑人员丨2024/5/11
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热补针法对类风湿关节炎寒证家兔膝关节滑膜Keap1-Nrf2/ARE/HO-1信号通路的影响
编辑人员丨2023/9/16
目的:观察热补针法对类风湿关节炎(RA)寒证家兔膝关节滑膜组织Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白-1(Keap1)-核因子E2相关因子2(Nrf2)/抗氧化元件(ARE)/血红素加氧酶(HO-1)信号转导通路的影响,从氧化应激角度探讨热补针法治疗RA的机制.方法:新西兰兔随机分为正常组、模型组、平补平泻组、捻转补法组、热补针法组,每组6只.通过卵蛋白诱导联合低温冷冻法复制RA寒证模型.平补平泻组、捻转补法组、热补针法组分别于双侧"足三里"施以平补平泻法、捻转补法及热补针法,每次30 min,1次/d,治疗7 d.治疗后观察各组家兔的一般情况;测定各组家兔膝关节周径、痛阈值;彩色超声诊断仪观察家兔膝关节滑膜变化并进行影像评级;HE染色观察各组家兔膝关节滑膜组织病理形态并评分;荧量定量PCR法检测各组家兔膝关节滑膜组织Keap1、Nrf2、HO-1、谷胱甘肽氧化酶(GSH-PX)1 mRNA表达水平;Western blot法检测各组家兔膝关节滑膜组织HO-1蛋白表达量.结果:正常组家兔摄食、饮水正常,活动灵敏,精神状态良好;模型组家兔肢体蜷缩,精神萎靡,脱毛严重,活动量小,饮食、饮水量少,皮肤青紫,双后腿蜷曲跛行,触之躲避行为明显.针刺后,各针刺组家兔较模型组一般情况均好转、活动量增大.与正常组比较,模型组家兔膝关节周径明显增大(P<0.05);与模型组比较,各针刺组膝关节周径缩小(P<0.05).与正常组比较,模型组家兔的膝关节病理积分,滑膜组织Nrf2 mRNA、HO-1 mRNA及蛋白表达升高(P<0.05),滑膜组织Keap1、GSH-PX1 mRNA表达量和痛阈降低(P<0.05).与模型组比较,各针刺组痛阈,滑膜组织Nrf2、GSH-PX1、HO-1 mRNA及HO-1蛋白表达升高(P<0.05),膝关节周径、病理积分及滑膜组织Keap1 mRNA表达量降低(P<0.05).热补针法组痛阈,Nrf2、GSH-PX1、HO-1 mRNA及HO-1蛋白表达高于平补平泻组和捻转补法组(P<0.05),膝关节病理积分及滑膜Keap1 mRNA表达量低于平补平泻组和捻转补法组(P<0.05).结论:热补针法可能通过调控 Keap1-Nrf2/ARE/HO-1信号转导通路提高机体抗氧化应激能力,是其治疗RA的机制之一.
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编辑人员丨2023/9/16
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基于Nrf2/ARE信号通路探讨当归-川芎含药血清对H2O2致PC12细胞氧化损伤的保护作用
编辑人员丨2023/8/5
目的:研究当归-川芎含药血清(Angelicae Sinensis Radix-Chuanxiong Rhizoma medicated serum,ASRCRS)对过氧化氢(H2O2)诱导高分化大鼠肾上腺嗜铬瘤细胞(PC12细胞)氧化损伤的保护作用及其分子机制.方法:采用H2O2体外诱导PC12细胞氧化损伤,并以终体积分数为15%的ASRCRS低、中、高剂量组进行干预.采用噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞存活率;荧光倒置显微镜观察细胞形态;试剂盒检测细胞上清液乳酸脱氢酶(LDH),丙二醛(MDA)含量和细胞内超氧化物歧化酶(SOD)活力及活性氧(ROS)分布水平;Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡情况;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测核转录因子E2相关因子2(Nrf2),Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白-1(Keap1),血红素加氧酶-1(HO-1),SOD1蛋白的表达水平.结果:选择300 μmol·L-1 H2O2刺激24 h作为氧化损伤造模的条件.与正常组比较,H2O2模型组细胞形态异常,细胞存活率显著降低(P<0.01);LDH,MDA含量升高(P<0.01),SOD活力降低,ROS在细胞内分布增加;Nrf2,HO-1,SOD1蛋白表达水平均明显下调(P<0.05,P<0.01),Keap1蛋白表达水平明显上调(P<0.01).与模型组比较,ASRCRS不同剂量组均能改善细胞形态,提高细胞存活率,抑制细胞凋亡;显著提高SOD酶活力(P<0.01),抑制LDH的释放(P<0.01)和ROS的生成,降低MDA含量(P<0.01);明显上调Nrf2,HO-1,SOD1蛋白表达水平(P<0.05,P<0.01),显著下调Keap1蛋白表达水平(P<0.01).结论:当归-川芎含药血清可能是通过上调Nrf2的蛋白表达,激活Nrf2/抗氧化反应元件(ARE)信号通路,增强细胞抗氧化损伤能力,抑制细胞凋亡,从而发挥保护H2O2损伤的PC12细胞的作用.
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编辑人员丨2023/8/5
