天冬酰胺内肽酶Legumain是半胱氨酸蛋白酶C13家族的新成员，在体内发挥多方面的作用。近年来，研究发现Legumain在多种肿瘤组织中高表达，并通过多种机制促进肿瘤细胞的增殖、肿瘤的侵袭转移和血管生成等。对Legumain的深入研究将有利于阐明恶性肿瘤的发病及进展机制，为肿瘤靶向治疗提供新靶点。

目的 探讨2型糖尿病(T2DM)合并下肢动脉粥样硬化性病变(LEAD)患者血清新蝶呤、豆荚蛋白、Wnt1-诱导的信号通路蛋白1(WISP1)的表达及其临床意义.方法 选取2021年1月至2022年1月哈尔滨市第一医院收治的T2DM患者114例(T2DM组),根据是否合并LEAD分为LEAD组54例和非LEAD组60例;另择同期在本院进行体检的健康志愿者52名(对照组).收集两组对象基线资料和常规生化指标,采用ELISA法测定血清新蝶呤、豆荚蛋白、WISP1水平.采用多因素logistic回归分析T2DM合并LEAD的危险因素,Pearson相关或Spearman秩相关分析血清新蝶呤、豆荚蛋白、WISP1水平与炎症反应指标、糖代谢及脂代谢指标的相关性,ROC曲线分析血清新蝶呤、豆荚蛋白、WISP1单独与联合检测预测T2DM合并LEAD的效能.结果T2DM组血清新蝶呤、豆荚蛋白、WISP1水平均高于对照组(均P＜0.01).与非LEAD组比较,LEAD组年龄更大,T2DM病程更长,吸烟比例和CRP、IL-6、LDL-C、FBG、糖化血红蛋白(HbA1c)、稳态模型评估-胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)、新蝶呤、豆荚蛋白、WISP1水平均升高(均P＜0.05).血清新蝶呤、豆荚蛋白、WISP1水平与CRP、IL-6、LDL-C、FBG、HbA1c、HOMA-IR均呈正相关(均P＜0.05).年龄、T2DM病程、吸烟、CRP、IL-6、LDL-C、HbA1C、HOMA-IR、新蝶呤、豆荚蛋白、WISP1均为T2DM合并LEAD的危险因素(均P＜0.05).血清新蝶呤、豆荚蛋白、WISP1单独与联合检测预测T2DM合并LEAD的AUC分别为0.726、0.765、0.755、0.909,联合检测预测T2DM合并LEAD的AUC均大于各指标单独检测(均P＜0.01).结论 血清新蝶呤、豆荚蛋白、WISP1水平升高与T2DM合并LEAD相关,联合检测3项指标对T2DM是否合并LEAD具有较高的预测效能.

目的 观察大鼠胸主动脉粥样硬化斑块中Legumain的表达,探讨Legumain与动脉粥样硬化的关系.方法 30只健康雄性大鼠,取血后随机分为对照组(n=10)和实验组(n=20).对照组给予普通饮食,实验组给予高脂饮食建立胸主动脉粥样硬化模型.造模12周后取血清和胸主动脉测定Legumain表达.结果 造模12周后,实验组大鼠胸主动脉可见动脉粥样硬化斑块形成;实验组低密度脂蛋白和动脉粥样硬化指数均高于对照组,差别有统计学意义(P＜0.05);实验组血清Legumain高于对照组,差别有统计学意义(P＜0.05);免疫组化、Western-Blot、RT-PCR均显示实验组Legumain高于对照组,差别均有统计学意义(P＜0.05).结论 Legumain在动脉粥样硬化斑块表达增高,Legumain可能参与了动脉粥样硬化及相关的炎症反应.

目的 利用对乳腺癌肿瘤细胞MDA-MB-435内特有酶豆蛋白酶(legumain)敏感的多肽(AANL)连接阿霉素(DOX)构建具有胞内特异性释药功能的纳米递药系统,并对AANL在含有legumain环境下的断裂效率进行研究.方法 将DOX用AANL修饰得到AANL-DOX(AD),再将AD连接至4-arm PEG上,最后将细胞穿膜肽(TAT)连接至4-arm PEG-AD上,制备出TAT-PEG-AD并自组装形成纳米粒(TPAD).核磁表征TAT-PEG-AANL-DOX;粒度分析仪和透射电镜测定纳米粒的粒径及外观形貌;模拟体内、肿瘤微环境和胞内环境通过动态透析法研究legumain对AANL的断裂效率并模拟DOX的药物控释效率;细胞毒性研究TPAD对MDA-MB-435细胞的毒性作用.结果 核磁共振氢谱证实TAT-PEG-AANL-DOX合成成功;测定TPAD的粒径为126.3 nm;透射电镜(TEM)观察纳米粒结构圆整,粒径为80 nm;24 h的累积释药量为82.2％;体外细胞毒性研究表明,TPAD对MDA-MB-435细胞有较好的杀伤作用,其效果接近游离DOX的细胞毒性.结论 利用legumain敏感多肽连接DOX制备具有胞内特异性释药功能的纳米粒,能够有效实现肿瘤细胞内晚期内涵体和溶酶体精准释药,提高抗肿瘤药物的生物利用度,值得进一步研究.

Programmed cell death (PCD) is an essential process for development,and shows conserved cytological features in both plants and animals.Caspases are well-known critical components of the PCD machinery in animals.However,currently few typical counterparts have been identified in plants and only several caspase-like proteases are known to be involved in plant PCD,indicating the existence of great challenge for confirming new caspase-like proteases and elucidating the mechanisms regulating plant PCD.Here,we report a novel cysteine protease,NtTPE8,which was extracted from tobacco seeds and confirmed as a new caspase-like protease.Recombinant NtTPE8 exhibited legumain and caspase-like proteolytic activities,both of which could be inhibited by the pan-caspase inhibitor (Z-VAD-FMK).Notably,NtTPE8 possessed several caspase activities and the capacity to cleave the cathepsin H substrate FVR,indicating a unique character of NtTPE8.NtTPE8 was exclusively expressed in the integumentary tapetum and thus,is the first specific molecular marker reported to date for this cell type.Downregulation of NtTPE8 caused seed abortion,via disturbing early embryogenesis,indicating its critical role in embryogenesis and seed development.In conclusion,we identified a novel caspase-like cysteine protease,NtTPE8,exclusively expressed in the integumentary tapetum that is involved in seed development.

豆荚蛋白(legumain)又称天冬酰胺内肽酶(asparaginyl endopeptidase,AEP),是一种溶酶体半胱氨酸蛋白酶,作为一种应激反应蛋白,只在特定条件下表达,在哺乳类动物中具有抗凋亡作用,在炎性反应过程中起抗原呈递作用,能够抑制骨质钙化,同时在转移或浸润的肿瘤相关巨噬细胞内高度表达.近期研究发现,legumain与动脉粥样硬化、ACS、肺动脉高压等多种心血管疾病之间有密切联系.该文就legumain与心血管疾病的研究进展予以综述.

目的 探讨Legumain(LGMN)在胰腺癌组织和细胞中的表达、意义及其下调对胰腺癌AsPC-1细胞增殖和迁移的影响.方法 采用免疫组化SP法检测LGMN蛋白在67例胰腺癌组织及61例癌旁组织中的表达;分析LGMN表达与胰腺癌临床病理特征的关系.采用RT-PCR和Western blot法检测胰腺细胞系中LGMN的表达.通过慢病毒感染下调AsPC-1细胞中LGMN的表达,以未干预的细胞作为空白对照组,转染空白载体细胞为阴性对照组,LGMN敲低细胞为实验组;采用CCK-8法、Transwell实验、Western blot法检测下调LGMN对细胞增殖、迁移以及凋亡相关蛋白的影响.结果 与癌旁组织相比,胰腺癌组织中LGMN高表达率更高,差异有统计学意义(P<0.01);LGMN表达与肿瘤分化程度、淋巴结转移相关(P<0.05),与患者年龄、性别、肿瘤大小等无关(P>0.05).AsPC-1细胞中LGMN mRNA及蛋白表达量均显著高于胰腺正常上皮细胞HPNE,差异有统计学意义(P<0.01);转染慢病毒后,与对照组相比,实验组的吸光度值、细胞迁移数量、BCL-2蛋白表达、BCL-2/Bax的比值降低(P<0.05),Bax升高差异不明显(P>0.05).结论 LGMN在胰腺癌中呈高表达,体外敲低LGMN后能够抑制胰腺癌细胞的增殖和迁移能力,并通过BCL-2/Bax激活凋亡通路诱导细胞凋亡.

目的:探讨血清天冬酰胺内肽酶(legumain,LGMN)与急性大动脉粥样硬化(large-artery atherosclerosis,LAA)型卒中患者早期神经功能恶化(early neurological deterioration,END)间的相关性.方法:前瞻性纳入334例急性LAA型卒中患者,检测其血清LGMN水平.END定义为入院3 d内任意时间点复评美国国立卫生研究院卒中量表(National Institute of Health Stroke Scale,NIHSS)评分较入院时增加≥2分.将患者按照入院后有无发生END进行分组比较,建立Logistic回归模型分析确定END发生的独立危险因素.采用受试者操作特征(receiver operator characteristic,ROC)曲线分析血清LGMN预测患者发生END的价值.结果:334例LAA型卒中患者中有78例(23.4％)发生END,作为END组,余256例为非END组.单因素结果分析显示,END组的LGMN水平、年龄、合并疾病(高血压、糖尿病、高血脂)比例、存在易损斑块的比例、入院收缩压水平、入院NIHSS评分和空腹血糖、糖化血红蛋白、超敏C反应蛋白水平均高于非END组,差异均有统计学意义(P均＜0.05).END患者中,中度狭窄组(7.05 μg/L)及闭塞组(6.80 μg/L)的血清LGMN水平显著低于重度狭窄组(8.66 μg/L)(P＜0.05).多因素Logistic回归分析结果显示,血清LGMN水平升高是患者发生END的独立危险因素[优势比(odds ratio,OR)=1.309,95％置信区间(confidence interval,CI)为1.188～1.441,P＜0.001)],其他危险因素还包括存在易损斑块、入院收缩压高、糖化血红蛋白水平高以及入院NIHSS评分高.ROC曲线分析结果显示,血清LGMN预测END的曲线下面积为0.715(95％CI为0.663～0.763,P＜0.001),此时最佳临界值为6.73 μg/L.结论:LGMN水平升高是急性LAA型卒中患者发生END的独立危险因素,可能可作为预测END的新型生物标志物.

目的 探究乌苯美司胶囊联合放疗对宫颈癌患者的治疗效果及对预后的影响.方法 选取我院收治的宫颈癌患者60例,完全随机法分为放疗治疗组、乌苯联合组各30例.放疗治疗组患者进行放疗治疗,乌苯联合组患者使用乌苯美司胶囊联合放疗治疗.黏液法检测人端粒酶逆转录酶(human telomerase reverse transcriptase,hTERT)、人乳头瘤病毒(human papilloma virus,HPV)水平;RT-PCR法检测活化的蛋白激酶C受体1(receptor for activated C kinasel,RACK1)、微小 RNA-198(microrna-198,miR-198)、微小 RNA-329-3p(microrna-329-3p,miR-329-3p)、Ⅱ 类反式激活因子(class Ⅱ transactivators,CⅡ TA)、溶酶体巯基还原酶(lysosomal thiol reductase,GILT)、天冬酰胺内肽酶(legumain,LGMN)水平;对比2组患者生活质量;酶联免疫吸附法检测血清糖链抗原724(carbohydrate antigen 724,CA724)、癌胚抗原(carcinoembryonic antigen,CEA)、鳞状细胞癌相关抗原(squamous cell carcinoma associated antigen,SCC-Ag)水平;评价临床疗效、不良反应及生存情况.结果 与放疗治疗组相比,乌苯联合组 HPV、hTERT、RACK1、miR-198、CⅡTA、GILT、FACT-G评分、FACT-Cx评分、CA724、CEA、SCC-Ag水平较低,miR-329-3p、LGMN表达水平较高(P＜0.05).与放疗治疗组相比,乌苯联合组治疗总有效率、中位生存期、生存率均较高(P＜0.05).结论 乌苯美司胶囊联合放疗治疗能够改善患者RACK1、miR-198、miR-329-3p表达及肿瘤标志物水平,促进患者身体恢复,患者生存周期较长,治疗效果较为理想.

目的 制备Legumain酶和线粒体双级靶向去氢骆驼蓬碱(HM)脂质体(KA@HM-LPS),并对其制剂学特性、体外抗肿瘤作用及生物相容性进行初步评价.方法 首先,筛选KA@HM-LPS的制备方法和均质化方法,并对制备的脂质体进行表征.其次,分别测定KA@HM-LPS的血清稳定性、体外释放率、溶血百分数,以及空白脂质体作用下的细胞存活率.最后,分别测定KA@HM-LPS作用下的细胞存活率、线粒体靶向性和对肝癌细胞迁移和侵袭的抑制作用.结果 选择薄膜分散法制备KA@HM-LPS,其包封率为(90.50±0.62)％;选择挤出法作为KA@HM-LPS的均质化方法.所制备的KA@HM-LPS粒径、多分散系数、Zeta电位分别为(211.40±11.67)nm、0.316±0.014和(-14.20±0.49)mV.在37℃、10％胎牛血清中,12 h后KA@HM-LPS的粒径基本稳定;KA@HM-LPS在20％血浆中的体外释放曲线符合Weibull分布,具有缓释效果;当HM质量浓度为160μg/mL时,KA@HM-LPS的溶血百分数为(4.23±0.19)％,远小于游离HM,具有安全性.当空白脂质体的质量浓度达400μg/mL时,LO2细胞的存活率为(94.40±6.12)％,载体生物相容性较好.体外细胞实验结果显示,KA@HM-LPS对Legumain酶过表达的肝癌细胞LGMN+-SK-Hep-1的抑制作用显著高于对正常肝癌细胞SK-Hep-1的抑制作用;且与SK-Hep-1细胞相比,LGMN+-SK-Hep-1细胞对载体的摄取效率更高;KA@HM-LPS可以更明显地抑制LGMN+-SK-Hep-1细胞的迁移和侵袭.结论 成功制备KA@HM-LPS;该脂质体可以有效抑制Legumain酶过表达的肝癌细胞的迁移和侵袭,并提高HM的血液相容性.