目的:探索N-甲基亚硝基脲(MNU)诱导膀胱癌大鼠模型中PI3K/AKT/mTOR信号通路与肿瘤组织凋亡的机制。方法:选取6~7周龄SD大鼠30只，随机分为对照组、造模组及抑制剂组，每组10只。造模组和抑制剂组使用MNU诱导膀胱癌大鼠模型，抑制剂组给予PI3K抑制剂，对照组和造模组给予等量的生理盐水。观察三组大鼠的膀胱形态学，对膀胱组织进行TUNEL染色，采用免疫印迹法(Western blot)检测组织中p-AKT、mTOR、Bcl-2、Bax蛋白的表达。结果:抑制剂组的大体标本肿瘤体积和肿瘤数量均较造模组改善；TUNEL染色结果显示，抑制剂组的阳性细胞评分高于对照组和造模组，差异均有统计学意义(均 P<0.05)；Western blot法检测结果显示，抑制剂组的p-AKT、p-mTOR蛋白表达含量较其他两组显著下降，差异均有统计学意义(均 P<0.01)；抑制剂组的Bcl-2/Bax比率较其他两组显著下降，差异均有统计学意义(均 P<0.01)。 结论:MNU诱导膀胱癌大鼠模型中肿瘤组织的凋亡可能与调节PI3K/AKT/mTOR信号通路有关。

目的 评价布美他尼杂质N-亚硝基布美他尼的体内致突变风险和肝细胞DNA损伤风险.方法 SD大鼠随机分为6组,分别为:溶媒对照组(溶媒为0.5%羧甲基纤维素钠),N-亚硝胺布美他尼100、300、1 000 mg·kg-1 剂量组,阳性对照组1[N-乙基-N-亚硝基脲(ENU),40 mg·kg-1]、阳性对照组 2[甲磺酸乙酯(EMS),200 mg·kg-1].2 个阳性对照组均为每组 6 只动物,其余每组 12 只动物.大鼠连续14 d经口灌胃给予受试物N-亚硝胺布美他尼.首次给药后约14 d和约 28 d后采集外周血用于Pig-a基因突变率检测,末次给药后约 3 h取肝细胞开展彗星试验.结果 试验期间给予N-亚硝基布美他尼未导致异常临床症状和动物体重及摄食量改变.100、300、1 000 mg·kg-1 剂量组动物肝细胞平均tail%DNA值(平均数/中位数)分别为2.90±0.38/2.34±0.46、3.58±0.27/2.87±0.51、3.45±0.59/2.21±1.44,与溶媒对照组相应数值相比未见差异,且无明显剂量效应相关性.首次给药后14 d,100、300、1 000 mg·kg-1 剂量组动物平均RBCCD59-和RETCD59-百万分之发生率(RBCCD59-百万分之发生率/RETCD59-百万分之发生率)分别为2.9±1.6/1.2±0.8、2.8±2.4/1.3±1.5、2.4±1.0/1.3±1.5;首次给药后28 d,100、300、1 000 mg·kg-1 剂量组动物RBCCD59-百万分之发生率/RETCD59-百万分之发生率分别为5.1±1.5/2.2±0.6、4.3±1.5/3.5±3.6、4.8±2.4/2.5±2.7.上述数值与相同时间点溶媒对照组相比均未见差异,且经统计学分析未见剂量效应相关性.结论 连续经口给予N-亚硝基布美他尼 14 d,SD大鼠的最大耐受量高于1 000 mg·kg-1,未检出外周血基因突变风险和肝细胞DNA损伤风险.研究数据可为药品中遗传毒性杂质的合理监管和含N-亚硝基杂质药物的安全使用提供数据支持.

目的 探讨N-甲基-N-亚硝基脲(MNU)诱导SD大鼠下焦湿热证尿血——膀胱癌(BC)模型的造模过程和成模率.方法 通过膀胱灌注MNU的方法在造模前、造模中、造模后共计 6 个时间点进行分批次样品采集,并对膀胱组织进行HE染色以了解膀胱原位癌的形成及发展过程.结果 实验过程顺利,在操作过程中大鼠未出现明显尿路损伤现象.通过本造模手法模型组大鼠膀胱内有明显的上皮增生、破损及大面积肿瘤形成和尿血现象.结论 MNU可以成功诱导SD大鼠下焦湿热证尿血模型(膀胱癌),且成模明显,死亡率低,实验数据可为膀胱癌模型的建立、改良和应用提供一定的参考.

目的:观察N-甲基-N-亚硝基脲(MNU)诱导的小鼠视网膜外层变性损伤的细胞电生理特征和超微结构变化.方法:实验研究.通过腹腔注射PBS和MNU,将C57/BL小鼠60只随机分为对照组和MNU造模组.运用膜片钳电生理技术,观察位于外丛状层的双极细胞的电生理活动.用透射电子显微镜观察视网膜的超微结构.结果:膜片钳结果显示,给MNU后7d,ON型双极细胞(ON-BC)对药物氨基(环丙基)(4-膦酰苯基)乙酸电生理反应完全消失,而OFF型双极细胞(OFF-BC)对药物α-氨基-3-羟基-5-甲基-4-异恶唑丙酸的刺激仍有电生理反应.给MNU后2d,位于光感受器细胞外节(OS)的盘膜结构变薄.给MNU后5d,OS消失,位于光感受器细胞内节(IS)的线粒体等细胞器严重肿胀.给MNU后10d,IOS消失,光感受器细胞的核层变薄,核呈不同程度的浓染.下游的双极细胞核周间隙增宽,在双极细胞胞浆中有大量的自噬体.结论:MNU对ON型信号通路的损伤,比对OFF型信号通路的损伤要严重一些.MNU导致的视网膜损伤主要位于外侧(包括外核层和外丛状层).MNU致光感受器细胞损伤的机制是凋亡.

目的:探究卷烟烟气对他莫西芬在大鼠乳腺癌中抗癌作用的影响.方法:利用N-甲基-N-亚硝基脲单次腹腔注射建立大鼠乳腺癌模型,设定他莫西芬单次给药和多次给药两个大组,大组中分别设立空气组、烟气组和空白溶剂对照组.通过ELISA试验和免疫组化方法分别测定大鼠血清和肿瘤组织中8-羟基脱氧鸟苷(8-OHdG)的含量,同时用ELISA测定肿瘤组织中抗细胞核增殖抗原(PCNA)的含量.结果:成功诱导构建了大鼠乳腺癌模型;他莫西芬能显著降低血清和肿瘤组织中8-羟基脱氧鸟苷的含量并抑制肿瘤组织中PCNA的表达;而合并烟气给药会相对升高8-羟基脱氧鸟苷和PCNA的表达.结论:烟气会减弱他莫西芬在大鼠乳腺癌中的抗增殖能力.

目的 建立绿色荧光蛋白(GFP)骨髓移植小鼠模型及N-甲基亚硝基脲(MNU)化学诱导前列腺癌小鼠模型.方法 以不同剂量的137Cs照射C57BL/6小鼠,照射后移植入C57BL/6全骨髓细胞,观察移植小鼠体重、生存期、存活率及外周血白细胞等情况,得出在剂量率为0.708 Gy/min时的最佳照射剂量.以最佳照射剂量照射C57BL/6小鼠,移植GFP小鼠骨髓细胞建立小鼠GFP骨髓移植模型,并通过流式细胞技术对模型进行验证.对C57BL/6进行MNU前列腺原位注射联合丙酸睾酮皮下/腹腔注射化学诱导,用苏木素-伊红(HE)染色法观察前列腺癌的发生发展情况,验证化学诱导前列腺癌小鼠模型.结果 在137Cs剂量率为0.708 Gy/min时,8.5 Gy是C57BL/6骨髓移植模型建立的最佳剂量,嵌合小鼠在骨髓移植4周后外周血非红系细胞GFP阳性比例为(85.3±7.2)％,28周后嵌合鼠骨髓细胞中非红系细胞GFP阳性比例为(95.2±2.5)％,MNU化学诱导小鼠前列腺癌发生率为78％(39/50),且前列腺组织病理学变化与人类有较好的相似性.结论 成功构建了GFP骨髓移植小鼠模型及MNU化学诱导前列腺癌小鼠模型.

背景与目的:复发高级别胶质瘤目前尚无标准治疗.该研究旨在评估贝伐单抗联合亚硝基脲类药物治疗复发高级别胶质瘤的疗效和安全性,并探索预测疗效的分子标志物.方法:本研究为一项单臂Ⅱ期临床试验(编号NCT02698280),入组复发高级别胶质瘤[世界卫生组织(World Health Organization, WHO)Ⅲ~Ⅳ级]患者.每6周为1个疗程,患者每3周接受1次贝伐单抗5 mg/kg静脉滴注,每6周静脉滴注亚硝基脲1次,每次90 mg/m2.每6周根据神经肿瘤临床疗效评价(response assessment in neuro-oncology, RANO)标准评价疗效.主要疗效指标为无进展生存期(progression-free survival,PFS)、6个月无进展生存率(progression-free survival at 6 months,PFS-6)及影像学评价,次要疗效指标为总生存期(overall survival, OS),并观察不良反应.统计O6-甲基鸟嘌呤DNA甲基转移酶(O6-methylguanine-DNA methyltransferase, MGMT)启动子甲基化、异柠檬酸脱氢酶(isocitrate dehydrogenase,IDH)及端粒酶逆转录酶(telomerase reverse transcriptase,TERT)启动子等分子病理状态对疗效的指示作用.结果:共入组23例患者,最终可分析的患者有20例.中位随访时间为8.2个月(3.2~23.1个月),PFS-6达25%,中位PFS为3.7个月(95%CI:1.85~5.55).根据RANO标准,6例患者部分缓解,9例患者疾病稳定,5例患者对治疗无反应,直接评价为疾病进展,客观缓解率(objective response rate,ORR)为30%.中位OS为9.2个月(95%CI:7.27~11.13).不良反应大部分为常见不良反应事件评价标准(The Common Terminology Criteria for Adverse Events,CTCAE) 1~2级,血小板下降、高血压及乏力多见.可分析组织的分子病理结果显示,TERTp野生型患者(n=11)的PFS较TERTp突变型( n=7)更长(6.0个月vs 1.9个月,P=0.02),MGMT启动子甲基化( n=10)较非甲基化 患者的ORR(n=8)具有更好的趋势(30.0% vs 12.5%,P=0.18),TERTp野生型(n=11)较TERTp突变型(n=7)患者的ORR具有更好的趋势(36.3% vs 14.2%,P=0.32).结论:贝伐单抗联合亚硝基脲类药物治疗复发高级别胶质瘤有效且安全;TERT启动子野生型提示更长的PFS.MGMT启动子甲基化和TERT启动子野生型的ORR趋于更好.

目的 探讨补精益视片调控N-甲基-N-亚硝基脲(N-methyl-N-nitrosourea MNU)诱导的大鼠感光细胞钙蛋白酶活性以及钙蛋白酶(calpain)活性对凋亡和自噬之间调控机制的研究.方法 用MUN建立大鼠视网膜感光细胞凋亡模型,运用免疫组化检测半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)、calpain,蛋白免疫印迹法(western Blot)检测微管相关蛋白轻链3(LC3),观察补精益视片灌胃后大鼠视网膜感光细胞中Caspase-3、calpain、LC3蛋白表达和变化.结果 采用浆阳评分标准:Capase-3得分:模型组＞维A组＞中药组＞正常组;calpain得分:模型组≈维A组＞中药组＞正常组;LC3蛋白:中药组较其它组LC3蛋白表达上升,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 补精益视片可抑制钙蛋白酶的活性,恢复感光细胞自噬而抑制感光细胞凋亡,从而促进感光细胞的存活.

目的 构建N-甲基亚硝基脲(MNU)诱导的兔原位膀胱癌模型,探讨利用磁共振成像技术(MRI)对膀胱癌模型进行无创诊断的价值.方法 取27只新西兰白兔(雄性,体重2.5 kg),实验组18只,对照组9只.实验组兔定期膀胱灌注MNU,每次10 mg,2周1次,共4次.对照组兔同时膀胱灌注生理盐水,每次5ml.分别于第8、10、12周末进行MRI扫描检测,检测后取膀胱组织进行病理检查.结果 实验组死亡1只,其余动物均成活至检测时间点.对照组各时间点MRI扫描兔膀胱内未见异常信号影,病理未见癌.实验组8周末,MRI扫描5只兔膀胱内均未见异常信号,病理检查5只可见慢性炎性改变,未见明确癌.实验组10周末,MRI扫描5只兔膀胱可见不同程度的异常信号,病理检查6只兔为非肌层浸润性尿路上皮癌,肿瘤成瘤率为100％.实验组12周末,MRI扫描6只兔膀胱壁不规则增厚,病理提示6只均为肌层浸润性尿路上皮癌,肿瘤成瘤率为100％,两组成瘤率差异有统计学意义(P＜0.05).MRI诊断的准确性、敏感性、特异性分别为83.3％、85.7％、80.0％.结论 MNU膀胱灌注诱导兔原位膀胱癌模型方法简便、可靠,MRI扫描结果与病理学检测结果一致,可作为该模型的无创鉴定方法.

目的 建立操作简便、重复性好的结直肠癌大鼠热创伤应激模型,用于研究围术期手术应激对肿瘤生长及肿瘤微环境的影响.方法 健康雄性SD大鼠72只,采用随机数字表法分为正常对照组、癌症模型组和热创伤应激组3组,每组24只.癌症模型组和热创伤应激组用N-甲基-N-亚硝基脲(MNU)化学诱导法灌肠16周,建立MNU诱导的结直肠癌模型.16周后热创伤应激组大鼠分别以特制的阻热黄铜模板加热后进行热创伤刺激,并分别于热创伤刺激后0、6、12和24h各随机取6只大鼠取血和采集结直肠组织;正常对照组和癌症模型组也根据热创伤应激组处理时间各随机取6只大鼠取血和采集结直肠组织.采用ELISA法检测大鼠血清促肾上腺皮质激素(ACTH)、IL-6、IL-10、皮质酮水平,采用Western blot法检测结直肠组织细胞周期蛋白(Cyclin) D1和髓样细胞白血病-1(Mcl-1)蛋白水平.结果 热创伤应激组大鼠血清ACTH、IL-6、IL-10、皮质酮水平较正常对照组和癌症模型组均升高,且热创伤应激组创伤应激后6、12、24h血清ACTH、IL-6、IL-10、皮质酮水平较应激后0h均升高,差异均有统计学意义(均P＜0.05).热创伤应激组4个时间点Cyclin D1和Mcl-1蛋白表达水平较正常对照组0h和癌症模型组0h均升高,且热创伤应激组创伤应激后6、12、24h Cyclin D1和Mcl-1蛋白表达水平较应激后0h均升高,差异均有统计学意义(均P＜0.05).结论 结直肠癌大鼠热创伤应激模型具有操作简便、重复性好等优点;热创伤应激可激活IL-6诱导结直肠癌大鼠肿瘤增殖,该模型可用于围术期手术创伤对肿瘤微环境影响的机制研究.