目的:评价下丘脑芳香化酶在七氟烷麻醉致新生大鼠癫痫波中的作用。方法:清洁级健康新生SD大鼠30只，雌雄各半，5日龄，体重10～15 g，采用随机数字表法分为3组( n＝10)：对照组(C组)、七氟烷组(S组)和芳香化酶抑制剂福美司坦＋七氟烷组(F组)。监测新生大鼠皮层脑电图(EEG)，30 min后F组皮下注射福美司坦2 mg/kg，C组和S组皮下注射生理盐水。皮下给药后30 min时S组和F组吸入6%七氟烷麻醉诱导3 min，随后调整为2.1%麻醉维持57 min。记录七氟烷麻醉期间癫痫波总持续时间、单次持续时间和发作次数；EEG记录结束后剖腹，左心室穿刺取血行血气分析及ELISA法检测皮质酮水平；取脑组织，冰块上迅速分离下丘脑，采用PCR法检测下丘脑芳香化酶mRNA、Na ＋-K ＋-2Cl -共同转运体1(NKCC1) mRNA和Na ＋-K ＋共同转运体2(KCC2) mRNA的表达。 结果:C组未见癫痫波。与C组比较，S组和F组皮层癫痫波总持续时间和单次持续时间延长，发作次数增加，血清皮质酮浓度升高，下丘脑芳香化酶mRNA表达上调，NKCC1/KCC2 mRNA比值升高( P<0.05)；与S组比较，F组皮层癫痫波总持续时间和单次持续时间缩短，发作次数减少，血清皮质酮浓度降低，下丘脑芳香化酶mRNA表达下调，NKCC1/KCC2 mRNA比值下降( P<0.05)。 结论:下丘脑芳香化酶表达上调参与了七氟烷麻醉致新生大鼠癫痫波发生的过程。

目的:探讨儿童局灶性皮质发育不良（FCD）Ⅱ型病例的脑病灶中形态异常神经元（dysmorphic neuron）和气球细胞（balloon cell）的阳离子-氯离子共转运体（NKCC1/KCC2）的表达情况，提示可能存在的癫痫发生的形态学基础。方法:收集2017年2月至2019年12月在北京市海淀医院（8例）及首都医科大学宣武医院（12例）癫痫手术后石蜡包埋的脑组织，选择患者年龄在14岁以下的诊断为FCDⅡa型10例、FCD Ⅱb型10例。采用免疫组织化学、免疫组织化学双染的方法，检测1型Na-K-2Cl共转运体（NKCC1）、2型K-Cl协同转运体（KCC2）在FCDⅡa型、FCDⅡb型中的表达情况。对NKCC1在FCDⅡa型的形态异常神经元和正常神经元免疫组织化学染色测定平均吸光度（ IA）值。 结果:（1）正常大脑皮质神经元细胞质表达NKCC1，细胞膜表达KCC2；（2）在FCDⅡa型的形态异常神经元中，NKCC1表达量增加，与正常神经元表达比较 IA值差异有统计学意义（ t′=7.618， P<0.01）。KCC2在形态异常神经元异常表达为细胞质阳性。（3）在FCDⅡb型中NKCC1/KCC2在形态异常神经元的表达与FCDⅡa型相同。气球细胞中NKCC1异常表达为阴性或少许稀疏细胞膜着色，KCC2异常表达为阴性。 结论:形态异常神经元及气球细胞中NKCC1/KCC2的表达模式与成熟神经元表达模式完全不同，其蛋白表达变化可能影响到神经元跨膜氯离子流，从而影响了抑制性神经递质γ-氨基丁酸的作用，导致神经元兴奋性增加，这个过程可能与临床癫痫症状发生相关。

目的:评价右美托咪定减轻七氟烷诱发幼鼠中枢神经毒性作用与钠离子-钾离子-氯离子共转运体1(NKCC1)/钾离子-氯离子共转运体2(KCC2)的关系。方法:健康雄性SD大鼠80只，7日龄，采用随机数字表法分为4组( n＝20)：对照组(C组)、七氟烷麻醉组(S组)、右美托咪定对照组(D组)、七氟烷+右美托咪定组(SD组)。S组置于2.5%七氟烷培养箱6 h构建七氟烷麻醉模型。SD组腹腔注射右美托咪定1.0 μg/kg，随后行七氟烷麻醉。于麻醉结束后24 h时，采用Western blot法检测海马cleaved caspase-3、NKCC1和KCC2的表达水平；于麻醉结束后35 d时，采用Y迷宫实验检测认知功能，采用尼式染色法进行海马CA1区神经元计数。 结果:与C组比较，S组和SD组新异臂停留时间百分比和海马CA1区神经元计数降低，海马cleaved casepase-3和NKCC1表达上调，KCC2表达下调，NKCC1/KCC2比值升高( P<0.05)，D组上述指标差异无统计学意义( P>0.05)；与S组比较，SD组新异臂停留时间百分比和海马CA1区神经元计数升高，海马cleaved casepase-3和NKCC1表达下调，KCC2表达上调，NKCC1/KCC2比值降低( P<0.05)。 结论:右美托咪定减轻七氟烷诱发幼鼠中枢神经毒性的机制可能与维持NKCC1/KCC2表达相对稳定有关。

目的:评价七氟烷复合丙泊酚麻醉对轻度认知功能障碍(MCI)大鼠术后海马突触可塑性的影响及其与钾离子-氯离子共转运体2(KCC2)/钠离子-钾离子-氯离子共转运体1(NKCC1)的关系。方法:雄性SD大鼠，16～18月龄，体重440～540 g，采用双侧颈总动脉重度狭窄建立MCI模型。取MCI模型制备成功的大鼠48只，采用随机数字表法分为4组( n＝12)：假手术组(Sham组)、七氟烷麻醉组(S组)、丙泊酚麻醉组(P组)和七氟烷复合丙泊酚麻醉组(SP组)。S组、P组、SP组行胫骨骨折切开复位内固定术，麻醉方法：SP组吸入1.7%七氟烷复合静脉输注丙泊酚20 mg·kg -1·h -1 3 h，S组吸入3%七氟烷3 h，P组静脉输注丙泊酚40 mg·kg -1·h -1 3 h。术后14 d行新异物体实验，计算新异物体识别指数。术后19 d行在体电生理实验，测定长时程增强的场兴奋性突触后电位(fEPSP)幅值，采用Western blot法测定海马KCC2和NKCC1的表达水平，计算KCC2/NKCC1比值。术后30 d行Golgi-Cox染色，计算海马CA1区树突棘密度。 结果:与Sham组比较，S组和P组新异物体识别指数、海马KCC2/NKCC1比值、CA1区突触棘密度和fEPSP幅值降低( P<0.05)，SP组上述各指标差异无统计学意义( P>0.05)；与S组或P组比较，SP组新异物体识别指数、海马KCC2/NKCC1比值、CA1区突触棘密度和fEPSP幅值升高( P<0.05)。 结论:七氟烷复合丙泊酚麻醉不加重MCI大鼠术后认知功能障碍可能与维持海马KCC2/NKCC1平衡，改善海马突触可塑性有关。

脑水肿是神经系统疾病患者最常出现的病理生理状态，导致颅内压增高甚至发生脑疝，最终导致不良预后。渗透性脱水是缓解脑水肿的一线治疗方案，常用脱水剂有甘露醇、高渗盐水(HS)、甘油果糖等。高渗盐水除了因高渗透压导致的脱水作用外，还通过其他机制发挥作用。本文总结了高渗盐水治疗脑水肿的非渗透性分子机制，主要包括下调水通道蛋白-4(AQP4)和离子通道蛋白Na-K-Cl共转运体1(NKCC1)，保护血脑屏障(BBB)完整性，调节小胶质细胞向M2抗炎表型极化，减轻反应性星形胶质细胞激活，减少中性粒细胞的炎性浸润，减轻氧化应激损伤，以及改善凝血纤溶平衡。以上机制为HS的临床应用提供了理论依据。

目的:分析Ⅰ型Bartter综合征患儿SLC12A1基因变异的功能特性，探索分子伴侣类药物4-苯丁酸钠对SLC12A1基因变异体的纠正作用。方法:回顾性分析2017至2018年南京医科大学附属儿童医院收治的3例Ⅰ型Bartter综合征患儿的临床表现、生长发育情况、实验室检查结果及SLC12A1基因变异情况等，在人胚胎肾293细胞（HEK293）中分别过表达野生型和变异型SLC12A1基因，运用蛋白免疫印迹法检测各组Na +-K +-2Cl -共同转运体（NKCC2）的表达水平，免疫荧光技术检测NKCC2的亚细胞定位，同时用分子伴侣类药物4-苯丁酸钠处理转染SLC12A1基因变异体的细胞，运用非配对 t检验比较处理前后药物对变异体的纠正作用。 结果:3例患儿中男2例、女1例，分别为3.0、4.0、1.2岁。均表现为早产，母亲孕期羊水多，生后出现低氯性碱中毒，伴低钾、低钠血症等。一代测序结果显示3例患儿为SLC12A1基因纯合或复合杂合型变异。在HEK293细胞中发现3种变异体NKCC2（p.L463S、p.L479V和p.507-510del）膜蛋白表达均低于野生型（0.718±0.039、0.287±0.081、0.025±0.156比1.001±0.028， t=5.92、8.35、30.49，均 P<0.01），p.L479V和p.507-510del总蛋白表达均低于野生型（0.630±0.032、0.043±0.003比1.000±0.111， t=3.21、8.65，均 P<0.05）。4-苯丁酸钠处理组p.L463S、p.L479V成熟型蛋白表达水平均高于未处理组（0.459±0.018比1.123±0.024、0.053±0.012比1.256±0.037， t=2.75、18.35，均 P<0.05）。免疫荧光实验示p.L479V和p.507-510del 2种变异体滞留于细胞质内，且4-PBA可以促进p.L479V变异体转运到细胞膜上。 结论:SLC12A1基因3种变异体导致蛋白表达或定位异常，4-苯丁酸钠可在一定程度上纠正Ⅰ型Bartter综合征患儿SLC12A1基因变异体的表达和定位缺陷，可能为临床治疗Ⅰ型Bartter综合征提供新的治疗靶点。

目的:探讨海马钠钾氯共转运体1(Na +-K ＋-2C1 - cotransporter, NKCC1）在七氟醚致新生大鼠神经行为学损伤中的作用。 方法:出生6 d的雄性SD大鼠36只，按随机数字表法分为3组（每组12只）：对照组（C组）、七氟醚组（S组）、七氟醚+布美他尼组（SB组）。C组吸入30%O 2 6 h, S组和SB组吸入2.1％七氟醚+30%O 2 6 h, SB组在七氟醚吸入前15 min腹腔注射布美他尼1.82 mg/kg. 4周后，大鼠行高架十字迷宫实验和前脉冲抑制（prepulse inhibition, PPI）实验。行为学测试结束后1周取海马组织，采用实时荧光定量PCR和Western blot方法分别检测NKCC1 mRNA水平和蛋白含量。 结果:高架十字迷宫实验中，3组大鼠总运动距离差异无统计学意义（ P>0.05）。与C组比较，S组开放臂停留时间缩短，PP3和PP6对应的PPI指数（PPI%）降低（ P<0.05）；海马NKCC1 mRNA水平和蛋白含量增加（ P<0.05）；与S组比较，SB组开放臂停留时间延长，PP3和PP6对应的PPI％增加，海马NKCC1 mRNA水平和蛋白含量减少（ P<0.05）。 结论:七氟醚可致新生大鼠神经行为学损伤，其机制可能与NKCC1有关。

目的:探讨布美他尼对多次七氟烷麻醉后新生大鼠NKCC1、KCC2 mRNA表达变化及成年后焦虑状态的影响。方法:81只新生5 d雄性SD大鼠，随机分为3组(每组 n＝27)。对照组(C组)：正常笼内喂养，不接受麻醉；多次七氟烷麻醉组(MS组)：出生后第5天，第7天，第9天分别接受每天七氟烷麻醉2 h；布美他尼＋七氟烷组(B组)：每次麻醉前30 min接受腹腔注射1.82 mg/kg布美他尼。其中，C组和MS组动物在麻醉前30 min接受皮下注射同等剂量的二甲基亚砜皮下注射，以排除溶媒引起的影响。麻醉苏醒观察30 min后，继续笼内正常母乳喂养。第9天麻醉结束即刻每组取6只动物，动脉血气针左心室穿刺取血进行血气分析；麻醉苏醒后30 min，每组取6只动物断头处死后留取脑组织下丘脑部分，利用RT-PCR技术检测IL-6 mRNA、NKCC1 mRNA和KCC2 mRNA的表达。每组其余15只大鼠继续笼内饲养至60 d进行高架十字迷宫(elevated plus maze，EPM)检测。 结果:与C组比较，MS组下丘脑IL-6 mRNA和NKCC1 mRNA表达上调[IL-6：(1.000±0.207)，(1.782±0.231)； t＝6.899， P<0.01；NKCC1：(1.000±0.255)，(1.639±0.290)； t＝3.518， P<0.01]、KCC2 mRNA表达下调[(1.000±0.140)，(0.733±0.115)； t＝3.017， P<0.001]、NKCC1/KCC2 mRNA比值增高[(1.000±0.276)，(2.054±0.521)； t＝5.078， P<0.001]，差异有统计学意义。与MS组比较，B组下丘脑IL-6 mRNA和NKCC1mRNA表达下调[IL-6：(1.147±0.140)； t＝5.635， P<0.01；NKCC1：(1.038±0.385)； t＝3.310， P＝0.01]、KCC2 mRNA表达上调[(0.988±0.194)； t＝2.880， P<0.05]、NKCC1/KCC2 mRNA比值降低[(1.027±0.200); t＝4.950， P<0.001]，差异有统计学意义。EPM行为学实验显示，与C组比较，MS组大鼠开放臂停留时间明显缩短[(18.4±10.1)s，(4.3±3.1)s； P<0.01]；与MS组比较，B组开放臂停留时间明显延长[(16.6±7.6)s， P<0.05]。 结论:布美他尼可以减轻多次七氟烷麻醉后新生大鼠NKCC1表达上调、KCC2表达下调及成年后的焦虑状态。

目的:评价丙泊酚复合七氟烷麻醉对轻度认知功能障碍(MCI)大鼠海马GABA A受体(GABA AR)α 1/α 2亚基稳态的影响。 方法:清洁级健康雄性SD大鼠，16～18月龄，体重450～550 g，采用结扎双侧颈总动脉的方法建立MCI模型。造模后30 d时采用Morris水迷宫实验筛选造模成功的MCI大鼠。取造模成功的MCI大鼠72只，采用随机数字表法分为4组( n＝18)：假手术组(Sham组)、七氟烷麻醉组(S组)、丙泊酚麻醉组(P组)和丙泊酚复合七氟烷麻醉组(SP组)。 S组吸入3%七氟烷3 h；P组静脉输注丙泊酚40 mg·kg -1·h -13 h；SP组吸入1.7%七氟烷，同时静脉输注丙泊酚20 mg·kg －1·h －13 h。S组、P组和SP组行胫骨骨折切开复位内固定术。术后14 d时行Y迷宫实验测试认知功能；采用Western blot法测定海马钾离子-氯离子共转运体2(KCC2)、钠钾氯协同转运蛋白1(NKCC1)、GABA ARα 1和GABA ARα 2的表达水平。 结果:与Sham组比较，S组和P组N臂停留时间百分比降低，海马KCC2和GABA ARα 1表达下调，NKCC1和GABA ARα 2表达上调( P<0.05)，SP组上述各指标差异无统计学意义( P>0.05)；与S组或P组比较，SP组N臂停留时间百分比升高，海马KCC2和GABA ARα 1表达上调，NKCC1和GABA ARα 2表达下调( P<0.05)。 结论:丙泊酚复合七氟烷麻醉不加重MCI大鼠术后认知功能障碍的机制可能与其维持海马GABA ARα 1/α 2亚基稳态有关。

The solute carrier family 12(SLC12)of cation-chloride cotransporters(CCCs)comprises potassium chlo-ride cotransporters(KCCs,e.g.KCC1,KCC2,KCC3,and KCC4)-mediated Cl-extrusion,and sodium po-tassium chloride cotransporters(N[K]CCs,NKCC1,NKCC2,and NCC)-mediated Cl-loading.The CCCs play vital roles in cell volume regulation and ion homeostasis.Gain-of-function or loss-of-function of these ion transporters can cause diseases in many tissues.In recent years,there have been considerable ad-vances in our understanding of CCCs'control mechanisms in cell volume regulations,with many tech-niques developed in studying the functions and activities of CCCs.Classic approaches to directly measure CCC activity involve assays that measure the transport of potassium substitutes through the CCCs.These techniques include the ammonium pulse technique,radioactive or nonradioactive rubidium ion uptake-assay,and thallium ion-uptake assay.CCCs'activity can also be indirectly observed by measuring y-aminobutyric acid(GABA)activity with patch-clamp electrophysiology and intracellular chloride con-centration with sensitive microelectrodes,radiotracer 36Cl-,and fluorescent dyes.Other techniques include directly looking at kinase regulatory sites phosphorylation,flame photometry,22Na+uptake assay,structural biology,molecular modeling,and high-throughput drug screening.This review sum-marizes the role of CCCs in genetic disorders and cell volume regulation,current methods applied in studying CCCs biology,and compounds developed that directly or indirectly target the CCCs for disease treatments.