无POU结构域八聚体核苷酸结合蛋白(non-POU domain-containing octamer-binding protein,NONO),又称为p54nrb,属于高度保守的果蝇行为/人类剪接(drosophila behaviour/human splicing,DBHS)蛋白家族[1].

旁粒及其组分在肿瘤发生和诸多正常的生物学功能中都扮演了重要的角色,但对于其具体的作用机制仍然缺乏了解.在人和小鼠的胚胎干细胞中,旁粒的关键结构组分长链非编码RNANjAT1_v2并不表达,只表达其短变体NEAT1_v1和3种旁粒蛋白组分——NONO、SFPQ和PSPCl,提示这些组分可能具有独立于经典旁粒结构之外的功能.蓝斐课题组依托国家基金委“细胞编程和重编程的表观遗传机制”重大研究计划,在此方向上开展了系统性的研究,并获得了进展:首次发现旁粒蛋白组分Nono和Erk相互作用,共同结合在小鼠胚胎干细胞的双价结构域基因(bivalent genes)的启动子区,并参与Mek/Erk信号途径调控靶基因的待激活状态;研究还发现,Nono缺失的mESC具有更强的自我更新能力,对于胚胎干细胞的体外培养有重要的参考价值.对本领域的最新进展以及复旦大学蓝斐课题组的相关原创性工作进行综述.

NONO(non-POU-domain-containing octamer binding protein)是一种多功能的核蛋白质,作为人类剪切蛋白家族的一员,NONO参与多种生物学事件,如基因转录调控、前体RNA剪接、DNA解螺旋和配对、缺陷RNA核滞留、DNA损伤的修复以及肿瘤发生等过程.尽管NONO参与胞内多种生物过程,但目前,针对NONO生物功能的研究仍处于初级阶段,其相关的临床研究更少.本文就NONO基因的结构及功能研究进展予以综述.

P54叫NonO是一种能够行使多种生物学功能的核蛋白,在人体多种组织和细胞系中广泛表达并具有高度的种间保守性,与多种疾病的发生、发展密切相关.近年来,P54nrb/NonO在多种肿瘤中的作用报道逐渐增多,然而其具体的肿瘤生物学作用和分子机制尚不明确.P54叫NonO在乳腺癌、前列腺癌、结直肠癌、黑色素瘤、鼻咽癌、肺癌、血液系统肿瘤等多种肿瘤中发挥重要作用.

目的:探讨LM P1、COX-2与鼻咽癌恶性生物学行为的相关性.方法:选取本院收治的鼻咽癌患者86例,取鼻咽癌组织及癌旁组织标本,采用western-blot法测定其中LMP1、COX-2蛋白表达量,采用荧光定量PCR法测定其中增殖、侵袭基因mRNA的表达量,进一步采用Pearson检验评估鼻咽癌组织中LM P1、COX-2蛋白表达量与增殖、侵袭基因表达量的相关关系.结果:鼻咽癌组织中LM P1、COX-2蛋白的表达量均显著高于癌旁组织;增殖基因c-Myc、Dub3、Sam68 mRNA的表达量高于癌旁组织;侵袭基因NONO、Glypican-3、DEPDC1、TRIM27 mRNA的表达量高于癌旁组织,PKIP mRNA的表达量低于癌旁组织(P<00.5).鼻咽癌组织中LMP1、COX-2蛋白表达量与增殖、侵袭基因mRNA的表达量直接相关.结论:鼻咽癌组织中存在LM P1、COX-2蛋白高表达,且具体表达量与肿瘤恶性生物学行为直接相关.

目的 探讨Xp11.2易位/TFE3融合基因相关性肾细胞癌中2种罕见基因亚型的临床病理学特征、免疫表型、荧光原位杂交(FISH)的特征性表现及预后.方法 对2009年至2016年南京军区南京总医院收集的10例NONO?TFE3肾细胞癌和4例RBM10?TFE3肾细胞癌,分别进行光镜观察、免疫组织化学EnVision法、FISH检测、逆转录?聚合酶链反应(RT?PCR)及随访.结果 NONO?TFE3肾细胞癌由比例不等的"分泌期子宫内膜样腺体"和片状的上皮样细胞混合组成,与透明细胞乳头状肾细胞癌有形态学交叉.RBM10?TFE3肾细胞癌中大多数出现双相结构,即上皮样细胞构成的腺管状和/或乳头状结构与小细胞区域形成的"假菊形团样"结构混合存在,另可见胞质空泡化、核沟和沙砾体等特点.免疫组织化学结果显示,NONO?TFE3肾细胞癌均中等至强阳性表达TFE3、CD10、肾细胞癌标志物(RCC)和PAX8,CK7、Cathepsin K、Melan A、HMB45、Ksp?cadherin、波形蛋白和CD117均阴性.RBM10?TFE3肾细胞癌强阳性表达TFE3、Cathepsin K、CD10、Ksp?cadherin、P504s、RCC、PAX8和波形蛋白,广谱细胞角蛋白(CKpan)和Melan A所有病例中均灶性阳性,TFEB、HMB45和CK7阴性,Ki?67阳性指数约3％～8％(平均约5％),且不同的组织学区域内免疫组织化学表达情况有所不同:PAX8、P504s、Ksp?cadherin在上皮样细胞区域表达,而在小细胞区域几乎不表达;上皮样细胞区域内Ki?67阳性指数高于小细胞区域.在分子方面,NONO?TFE3肾细胞癌中有6例扩增出融合基因产物,5例为NONO基因的第7号外显子和TFE3基因的第6号外显子融合,1例NONO基因的第9号外显子和TFE3基因的第5号外显子融合;4例RBM10?TFE3肾细胞癌均扩增出融合基因,融合位点为RBM10基因的第5号外显子和TFE3基因的第17号外显子.在FISH检测中,10例NONO?TFE3肾细胞癌均表现为距离固定且间隔较小的分离信号,约等于2个信号宽度;4例RBM10?TFE3肾细胞癌均显示<1个信号宽度的异常信号(融合或者微小分离信号),均可视为阴性结果.共7例NONO?TFE3和4例RBM10?TFE3肾细胞癌获得随访资料,所有患者至今均无病生存.结论NONO?TFE3肾细胞癌和RBM10?TFE3肾细胞癌为2种罕见基因亚型,肿瘤均具有特殊的形态学特征和良好的临床预后,TFE3免疫组织化学阳性表达,但由于利用TFE3分离探针进行FISH检测时表现出模棱两可或假阴性结果,容易造成漏诊或误诊,应值得注意,PCR检测或二代测序可明确基因型.

不含POU结构域的八聚体核苷酸结合蛋白(non-POU domain-containing octamer-binding protein,NONO)也称54 kD核RNA/DNA结合蛋白(54 kD Nuclear RNA-and DNA-binding protein,p54nrb),是一种能与DNA和RNA结合的多功能核蛋白,参与多种细胞生物活动,包括转录调节、DNA修复、RNA核保留复制、细胞增殖调控以及形成亚核结构paraspeckle等.当NONO蛋白表达异常时,是否会导致肿瘤的发生呢？现研究表明在多数肿瘤中NONO蛋白表达异常.与鼻咽癌、前列腺癌、膀胱癌、乳头状肾细胞癌、大肠癌、恶性黑色素瘤以及白血病等多种肿瘤发生发展密切相关.本综述就NONO蛋白结构、功能以及在肿瘤发生、发展中的作用予以综述.

目的:探索创伤性脑损伤(TBI)后小鼠海马和皮层区不含POU结构的八聚体结合蛋白(NONO)表达变化.方法:重物打击法制作TBI小鼠模型,分为假手术组和TBI组,根据创伤后的时间TBI组又分为伤后6h、24h、3d和7d.Real time RT-PCR检测脑组织NONO mRNA表达,Westem Blot和免疫组化检测脑组织NONO蛋白表达.结果:NONO在小鼠大脑皮层和海马区有较强表达,TBI后海马区NONO表达水平显著降低.结论:NONO在皮层和海马区均有表达,但是TBI后只有海马区NONO表达发生显著变化,实验结果为进一步研究NONO在TBI中的作用机制提供了基础.

目的 探索可以特异性识别高转移胃癌细胞(HGC-27)的核酸适配体LW-25的靶标蛋白.方法 合成已知的可以特异性识别HGC-27而不识别无转移能力的胃腺癌细胞的LW-25.首先,通过胰蛋白酶消化细胞来确定核酸适配体结合的靶标类型是蛋白质,然后通过裂解细胞提取出蛋白质.用核酸适配体介导的亲和富集实验富集出LW-25所结合的蛋白,经电泳分离后,找到潜在靶标蛋白所在的差异条带.最后利用质谱技术分析差异条带内的蛋白质,通过分析比对质谱结果得到潜在的靶标蛋白.结果 十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶(SDS-PAGE)找到差异条带,经质谱分析,不含POU结构域的八聚核苷酸结合蛋白(p54nrb/NONO)在核酸适配体LW-25样品组中量极高,在文库对照样品组中蛋白量很少,在琼脂糖凝胶珠样品组中几乎没有,因此判定NONO是最明显的差异蛋白.结论 NONO是LW-25潜在的靶标蛋白并很可能是引起胃癌转移的重要蛋白.

目的 探讨伴有色素分化的Xp11易位性肿瘤(Xp11 neoplasm with melanocytic differentiation)的临床病理特征、免疫表型、分子特征及预后.方法 收集解放军东部战区总医院南京大学医学院附属金陵医院2008年5月至2018年5月诊断的21例伴有色素分化的Xp11易位性肿瘤,进行光镜观察,行免疫组织化学、荧光原位杂交、TFE3相关融合基因扩增研究,并随访.结果 患者男性7例,女性14例.发病年龄4~57岁,平均年龄32.8岁.发病部位:肾脏11例,盆腔3例,胰腺、腹膜后、肾上腺、小肠、前列腺、宫颈及阑尾各1例.组织学上,肿瘤由丰富的纤维血管网分隔呈巢状或腺泡状结构,缺乏乳头状结构,肿瘤细胞呈上皮样,胞质透明至嗜酸,核仁可见,缺乏梭形细胞及脂肪成分.大多数病例中(16/21)出现黑色素沉着.21例均强阳性表达TFE3和Cathepsin K.18例色素性标记HMB45/Melan A中等至强阳性表达,3例HMB45/Melan A灶性阳性.所有病例均不表达平滑肌肌动蛋白、结蛋白、广谱细胞角蛋白、S-100蛋白和PAX8.荧光原位杂交检测:TFE3分离探针显示21例均存在异常TFE3分离信号;TFE3相关融合探针显示16例SFPQ-TFE3融合信号,2例NONO-TFE3融合信号,1例ASPL-TFE3融合信号,1例MED15-TFE3融合信号,另1例未测得融合基因信号.逆转录聚合酶链式反应:9例扩增出SFPQ-TFE3融合基因,1例扩增出NONO-TFE3融合基因,1例扩增出MED15-TFE3融合基因.15例获得随访资料,随访时间12~74个月,6例死亡,3例复发转移,6例无病生存.结论 伴有色素分化的Xp11易位性肿瘤具有独特的形态学特征、免疫表型及分子改变,具有侵袭性的生物学行为,属于恶性的间叶源性肿瘤,应与Xp11易位性肾癌及血管周上皮样细胞肿瘤区分开来,同时密切随访.