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硫化氢对大气颗粒物诱导肺泡上皮细胞衰老的影响
编辑人员丨4天前
目的:探究大气颗粒物(PM)能否诱导肺泡上皮细胞的衰老以及硫化氢(H 2S)能否拮抗PM诱导的肺泡上皮细胞衰老。 方法:本研究为实验研究。用不同浓度的PM刺激MLE-12细胞,通过β-半乳糖苷酶染色法检测细胞衰老率;用蛋白质印迹法测定细胞衰老标志蛋白p21;用流式细胞术测定细胞周期反映细胞衰老情况。加入不同浓度的硫氢化钠(NaHS),通过检测细胞衰老逆转情况,测定细胞衰老标志蛋白p21和细胞周期,研究H 2S对PM诱导的肺泡上皮细胞衰老的影响;并通过检测细胞内活性氧(ROS)的产生,研究氧化应激在PM诱导的细胞衰老中的作用,以及H 2S对氧化应激的影响。 结果:不同浓度的PM刺激24、48、72 h后,用50 mg/L PM刺激细胞24 h后β-半乳糖苷酶阳性细胞率最高,占比接近40%,p21表达水平最高。随着PM浓度的增加,更多的细胞周期停滞在G 0-G 1期,S期细胞逐渐减少。经不同浓度的NaHS刺激,100 μmol/L的NaHS刺激细胞后,对细胞衰老逆转效果最明显。与单纯PM刺激相比,β-半乳糖苷酶阳性细胞率、p21的表达水平下降明显,细胞周期逐渐恢复。采用PM(50 mg/L)和NaHS(100 μmol/L)刺激肺泡上皮细胞,与对照组相比,单纯刺激PM组的ROS的产生增加,而加入NaHS后,使得PM刺激导致的ROS表达水平降低。 结论:PM可以诱导肺泡上皮细胞衰老,而H 2S可以拮抗这种改变。
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编辑人员丨4天前
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关节镜手术或髋臼周围截骨术治疗临界型发育性髋关节发育不良
编辑人员丨4天前
目的:探讨髋关节镜手术与髋臼周围截骨术(periacetabular osteotomy,PAO)治疗临界型发育性髋关节发育不良(borderline developmental dysplasia of the hip,BDDH)的临床疗效。方法:回顾性收集2016年7月至2020年6月采用髋关节镜手术或PAO治疗的57例BDDH患者。髋关节镜手术(hip arthroscopy,HA)组32例,男6例、女26例,年龄(34.5±6.4)岁(范围19~47岁);PAO组25例,男5例、女20例,年龄(37.2±6.9)岁(范围21~50岁)。收集并测量患者术前、末次随访时影像学指标,包括外侧中心边缘角(lateral center edge angle,LCEA)、前方中心边缘角(anterior center edge angle,ACEA),外凸指数、T?nnis角、股骨颈前倾角及T?nnis分级。术前、术后6个月、12个月及末次随访时评估两组患者术后髋关节结果评分日常生活能力量表(hip outcome score activity of daily living scale,HOS-ADL)、改良Harris髋关节功能评分(modified Harris hip score,mHSS)、非骨关节炎髋关节评分(non-arthritic hip score,NAHS)。结果:HA组随访时间为(54.2±8.2)个月,PAO组为(55.5±9.4)个月。两组术前LCEA、ACEA、外凸指数、T?nnis角、股骨颈前倾角及T?nnis分级的组间差异均无统计学意义( P>0.05)。HA组术前α角为60.8°±5.8°,与PAO组53.0°±5.9°的差异有统计学意义( t=5.07, P<0.001)。HA组末次随访LCEA、ACEA、外凸指数、T?nnis角、α角分别为20.0°±2.1°、20.0°±2.6°、30.6%±2.3%、10.8°±1.6°、39.8°±5.4°,较术前改善( P<0.05),T?nnis分级与术前相比差异无统计学意义(χ 2=5.72, P=0.057);PAO组术后LCEA、ACEA、外凸指数、T?nnis角分别为33.0°±3.0°、33.3°±4.0°、15.0%±4.0%、2.8°±1.7°,较术前改善( P<0.05),末次随访α角和T?nnis分级与术前差异无统计学意义( P>0.05);两组末次随访LCEA、ACEA、外凸指数、T?nnis角、α角的差异均有统计学意义( P<0.05);T?nnis分级的差异无统计学意义(χ 2=3.02, P=0.996)。两组术前mHHS评分、NAHS评分和HOS-ADL评分差异无统计学意义( P>0.05);术后随访两组评分均较术前提高,差异有统计学意义( P<0.05);HA组术后6、12个月三个评分均高于PAO组,差异有统计学意义( P<0.05),但两组末次随访时的差异均无统计学意义( P>0.05)。 结论:HA或PAO治疗BDDH均能获得较好的早中期临床疗效,HA早期临床疗效优于PAO,中期临床疗效二者相似;PAO可改善BDDH髋臼影像学指标(除α角外),而HA仅可改善α角,但二者均能有效延缓髋关节骨关节炎的影像学进展。
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编辑人员丨4天前
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Nrf2信号通路在硫化氢抑制脓毒症相关性脑病小鼠脑组织炎症反应中的作用
编辑人员丨4天前
目的:评价核因子E2相关因子2(Nrf2)信号通路在硫化氢(H 2S)抑制脓毒症相关性脑病(SAE)小鼠脑组织炎症反应中的作用。 方法:野生型C57BL/6J小鼠54只,Nrf2 -/-C57BL/6J小鼠36只,体重20~25 g,采用随机数字表法分为5组( n=18):野生型假手术组(野生型Sham组)、野生型SAE组、野生型SAE+NaHS组、Nrf2 -/-SAE组和Nrf2 -/-SAE+NaHS组。采用盲肠结扎穿孔(CLP)法制备小鼠SAE模型,于模型制备成功后3 h时腹腔注射NaHS 50 μmol/kg。于CLP后24 h时处死小鼠取脑组织,观察病理学结果,计数存活神经元,计算神经元存活率,采用Western blot法检测NLRP3的表达,采用ELISA法测定TNF-α、IL-1β和IL-6含量,采用流式细胞术检测Iba-1 +CD86 +、Iba-1 +CD206 +和Iba-1 +细胞百分比。 结果:与野生型Sham组比较,野生型SAE组脑组织NLRP3表达上调,TNF-α、IL-1β、IL-6含量、Iba-1 +CD86 +和Iba-1 +细胞百分比升高,Iba-1 +CD206 +细胞百分比和神经元存活率降低( P<0.05);与野生型SAE组比较,野生型SAE+NaHS组脑组织NLRP3表达下调,TNF-α、IL-1β、IL-6含量、Iba-1 +、Iba-1 +CD86 +细胞百分比和神经元存活率降低,Iba-1 +CD206 +细胞百分比升高( P<0.05);与Nrf2 -/-SAE组比较,Nrf2 -/-SAE+NaHS组小鼠各指标差异无统计学意义( P>0.05);与野生型SAE+NaHS组比较,Nrf2 -/-SAE+NaHS组脑组织NLRP3表达上调,Iba-1 +、Iba-1 +CD86 +细胞百分比和TNF-α、IL-1β、IL-6含量升高,Iba-1 +CD206 +细胞百分比和神经元存活率降低( P<0.05)。 结论:Nrf2信号通路参与了H 2S抑制SAE小鼠脑组织炎症反应的过程。
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编辑人员丨4天前
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一氧化氮在外源性硫化氢抑制大鼠结肠动力中的作用
编辑人员丨4天前
目的:探讨一氧化氮(NO)在外源性硫化氢(H 2S)抑制大鼠结肠动力中的作用。 方法:免疫组化检测H 2S合成酶胱硫醚-γ-裂解酶(CSE)和胱硫醚-β-合成酶(CBS)在成年Wistar大鼠近端结肠的分布;制备近端结肠纵行肌(LM)和环形肌条(CM),通过恒温浴槽实验观察NO相关工具药干预后外源性H 2S供体硫氢化钠(NaHS)对LM和CM收缩活动的影响;通过膜片钳实验检测不同浓度NaHS对平滑肌细胞L型钙通道电流(I Ca,L)的影响。 结果:H 2S合成酶CBS和CSE在近端结肠肌间神经丛、黏膜层及环纵平滑肌细胞均表达。河豚毒素孵育肌条后NaHS以浓度依赖的方式抑制LM和CM自发性收缩活动,LM最大抑制的半数有效浓度(IC 50)为917.6 μmol/L(95% CI:776.3~1 085 μmol/L, n=6),CM的IC 50为730.4 μmol/L(95% CI:592.2~900.8 μmol/L, n=6)。NO供体硝普钠(SNP)预处理肌条后加入NaHS(3×10 -4~6×10 -4mol/L),LM及CM收缩幅度呈现双向变化,其中低浓度NaHS使LM收缩幅度从(0.679±0.181)g增加至(0.840±0.400)g( n=8, P<0.01),使CM收缩幅度从(0.378±0.140)g增加至(1.176.±0.056)g( n=8, P<0.01)。sGC抑制剂可溶性鸟苷酸环化酶抑制剂(sGC)ODQ孵育组NaHS的IC 50高于对照组( P<0.05),而NO合成酶抑制剂L-NNA、NO前体L-精氨酸、环磷酸鸟苷(cGMP)竞争性拮抗剂PET-cGMP预处理肌条前后NaHS的IC 50差异无统计学意义( P>0.05)。NaHS(100 μmol/L)使L型钙通道峰电流密度增加[(-4.29±0.29)比(-3.77±0.27)pA/pF, P<0.01];而NaHS(300 μmol/L)使峰电流降低至(-2.96±0.34)pA/pF( P<0.05),并使电流-电压曲线右移。 结论:外源性H 2S对大鼠结肠动力可能具有双重调节作用,其中对结肠平滑肌的抑制作用不依赖NO;L型钙通道在H 2S对结肠动力的双重调节作用中发挥重要作用。
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编辑人员丨4天前
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Focal adhesion kinase signaling is necessary for the hydrogen sulfide-enhanced proliferation, migration, and invasion of HTR8/SVneo human trophoblasts
编辑人员丨4天前
Objective::Hydrogen sulfide (H 2S) has been elucidated that it promotes migration and invasion in human placenta trophoblasts. However, the signaling pathway underlying H 2S-based regulation of trophoblasts remains unknown. Hence, we investigated the potential effect of sodium hydrosulfide (NaHS), an exogenous H 2S donor, on extravillous trophoblasts. Methods::The Cell Counting Kit-8 was used to detect the proliferative activity of trophoblasts and to screen the optimal concentration of NaHS. The migration and invasion of HTR8/SVneo cells were measured by Transwell assays. Gene expression was determined by quantitative real-time PCR analysis. Protein expression was determined by western blot.Results::We found that NaHS could promote the proliferation, migration, and invasion of HTR8/SVneo cells. The phosphorylation of focal adhesion kinase (FAK), Src, and extracellular signal-regulated kinase (ERK) were activated by NaHS. Moreover, NaHS also upregulated the expression of matrix metalloproteinase-2 (MMP-2) and MMP-9, downregulated the expression of E-cadherin in HTR8/SVneo cells. The application of NaHS could increase the expression of cystathionine-β-synthase.Conclusion::Both FAK-Src signaling and the upstream signaling cascade of ERK activation play a significant important role in NaHS-induced proliferation, migration, and invasion via upregulating activity of MMP-2, MMP-9, and downregulating E-cadherin in HTR8/SVneo cells. These novel findings may provide a strong foundation for the clinical application of H 2S donor drugs.
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编辑人员丨4天前
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外源性硫化氢对人胃黏膜细胞GES-1增殖的影响
编辑人员丨5天前
目的:探究硫化氢(Hydrogen sulfide,H 2S)对人胃黏膜细胞GES-1(gastric mucosal epithelial,GES-1)增殖的影响。 方法:将不同浓度(0,25,100,400,800和1600 μmol/L)的硫氢化钠(NaHS)分别作用于胃黏膜GES-1细胞24、48和72 h并按此分组,噻唑蓝[3-(4,5-Dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide, MTT]法检测各组细胞的增殖水平,酶联免疫吸附实验(enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)检测细胞内H 2S的含量。 结果:MTT结果显示,浓度为800 μmol/L的NaHS作用胃黏膜细胞GES-1 24 、48、72 h时,增殖率分别为(97.67±5.03)%、(77.66±3.51)%、(63.00±2.00)%。浓度为1600 μmol/L的NaHS作用胃黏膜细胞GES-1 24、48、72 h时,增殖率分别为(89.67±7.51)%、(70.00±4.00)%、(54.00±2.00)%。ELISA结果显示,当浓度为800 μmol/L的NaHS作用胃黏膜细胞GES-1 24、48和72 h时,GES-1产生的H 2S浓度分别分别为(8.73±0.44)、(13.22±0.86)、(17.31±1.05)μmol/L。当浓度为1600 μmol/L的NaHS作用胃黏膜细胞GES-1 24 、48、72 h时,GES-1产生的H 2S浓度分别为(13.15±0.46)、(19.01±0.28)、(22.68±0.65)μmol/L。统计分析显示,当浓度为800 μmol/L和1600 μmol/L的NaHS作用胃黏膜细胞GES-1时,48 h作用组和72 h作用组与24 h作用组比较,胃黏膜细胞GES-1增殖均降低,差异均具有统计学意义( P值均<0.05);胃黏膜细胞GES-1产生的H 2S浓度明显增高,差异均具有统计学意义( P值均<0.05)。此外,细胞的增殖与NaHS浓度呈负相关( r = -0.558, P<0.05),细胞产生的H 2S浓度与NaHS浓度呈正相关( r=0.868, P<0.05),且细胞的增殖与细胞产生的H 2S浓度具有负相关( r =-0.863, P<0.05)。 结论:浓度为800 μmol/L和1600 μmol/L的NaHS能诱导GES-1细胞产生H 2S,抑制GES-1细胞增殖,且呈浓度依赖性。
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编辑人员丨5天前
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髋关节镜技术治疗不同分型髋关节撞击综合征的近期疗效分析
编辑人员丨5天前
目的:探讨髋关节镜技术治疗不同分型髋关节撞击综合征(FAI)的近期疗效。方法:回顾性分析2016年1月至2018年12月期间南部战区总医院骨科医院收治的85例FAI患者资料。男52例,女33例;年龄为19~59岁,平均36.9岁。根据髋臼和股骨近端解剖形态分型:凸轮型26例,钳夹型16例,混合型43例。常规行髋关节镜手术,切除增生滑膜,凸轮型患者均行股骨头颈成形术,钳夹型患者切除过度覆盖的髋臼、行盂唇缝合术,混合型患者切除过度覆盖的髋臼、盂唇缝合后行股骨头颈成形术。术后1年使用改良Harris髋关节评分(mHHS)、非骨关节炎髋关节评分(NAHS)和髋关节结果评分日常生活能力量表(HOS-ADL)对患髋功能进行评定,并应用CT测量α角和中心边缘角。结果:85例患者术后获12~48个月(平均21个月)随访。术后1年所有患者的mHHS评分、NAHS评分、HOS-ADL评分分别由术前的(63.1±7.9)、(62.5±7.5)、(62.3±7.9)分提高至(83.4±8.7)、(82.9±8.2)、(83.6±8.8)分,差异均有统计学意义( P<0.05)。凸轮型、钳夹型和混合型患者术后1年mHHS评分、NAHS评分、HOS-ADL评分较术前显著提高,差异均有统计学意义( P<0.05)。术后1年凸轮型、混合型患者的α角分别由术前67.3°±5.2°、64.2°±5.2°减少至50.3°±2.9°、49.6°±2.8°,钳夹型、混合型患者的中心边缘角分别由术前52.9°±4.6°、50.9°±3.6°减少至33.1°±4.5°、31.3°±4.3°,差异均有统计学意义( P< 0.05)。 结论:髋关节镜技术能够有效治疗凸轮型、钳夹型和混合型FAI,近期疗效良好。
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编辑人员丨5天前
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PAG双向调控NaHS诱导胃黏膜GES-1细胞凋亡
编辑人员丨5天前
目的:探讨H 2S诱导胃黏膜细胞(gastric mucosal epithelial cells,GES-1)凋亡的作用机制。 方法:在不同浓度的H 2S合成酶胱硫醚-γ-裂解酶(cystathionine-γ-lyase,CSE)抑制剂炔丙基甘氨酸(propargylglycine,PAG)的作用下,外源性H 2S供体NaHS(400 μmol/L)作用于胃黏膜细胞GES-1。通过AnnexinV-PE/7-AAD双标染色法利用MUSE细胞状态分析仪检测细胞凋亡率,蛋白质印迹检测Caspase-3表达。 结果:与对照组比较,NaHS组GES-1细胞凋亡率增高( P<0.001)、Caspase-3激活( P<0.001);与NaHS组比较,NaHS-PAG 100 μmol/L组的早期凋亡率降低( P<0.001),Caspase-3断裂带(相对分子质量约为17×10 3)表达降低( P<0.001);而NaHS-PAG 500 μmol/L组及NaHS-PAG 1 000 μmol/L组细胞晚期凋亡率都增高( P均<0.001),Caspase-3断裂带表达都增加( P= 0.003、 P<0.001),差异有统计学意义。 结论:PAG双向调控NaHS诱导胃黏膜细胞GES-1凋亡。
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编辑人员丨5天前
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硫化氢对创伤性脑损伤小鼠的神经保护作用研究
编辑人员丨5天前
目的:探究硫化氢(hydrogen sulfide,H 2S)通过改善神经炎症反应对创伤性脑损伤(traumatic brain injury,TBI)小鼠神经保护作用的影响。 方法:将27只雄性C57BL/6小鼠随机分为3组,假手术组(Sham组),模型组(TBI+Nacl组)和硫化氢的供体NaHS给药组(TBI+NaHS组),每组各9只。采用重锤坠落法构建中度TBI模型。干湿法测量脑含水量评估脑水肿情况,改良小鼠神经功能缺损评分(modified Neurological Severity Score,mNSS)和转棒实验评估小鼠的神经运动功能,免疫荧光染色检测小胶质细胞和星形胶质细胞的反应活性以及髓鞘丢失情况。结果:TBI后1天,与Sham组相比,TBI模型组脑含水量明显增多[(85.62±2.35)%比(77.91±1.86)%, P=0.0237)]。与TBI组相比,TBI+NaHS组脑含水量降低[(78.69±0.17)%比(85.62±2.35)%, P=0.0338)]。TBI后第1,3和7天,与TBI组相比,TBI+NaHS组小鼠mNSS分值逐渐降低( P第1天=0.0002; P第3天=0.0019; P第7天=0.0019)。匀速转棒实验中,与TBI组相比,TBI+NaHS组小鼠第1天和第7天转棒停留时间增加( P第1天<0.0001; P第7天=0.0347)。匀加速转棒实验中,与TBI组相比,TBI+NaHS组小鼠第1天,3天和7天转棒停留时间明显增加( P第1天=0.0001; P第3天=0.0007; P第7天<0.0001)。TBI后7天,与TBI组相比,TBI+NaHS降低了小胶质细胞标志物离子钙结合衔接分子1(ionized calcium binding adapter molecule,IBA1)和星形细胞标志物胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)的表达( PIBA1=0.0172; PGFAP=0.0006),同时NaHS增加了髓鞘碱性蛋白(myelin basic protein,MBP)水平( P=0.002)。 结论:H 2S可通过降低胶质细胞的免疫活性,减少神经炎症的发生和提高髓鞘的完整性,进而改善TBI小鼠的神经运动功能。
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编辑人员丨5天前
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硫化氢减轻血红素诱导海马神经元铁死亡的体外研究
编辑人员丨5天前
目的:探究硫化氢(H 2S)对血红素诱导的小鼠海马神经元铁死亡的作用。 方法:取小鼠海马神经元细胞株HT-22,将其分为空白对照组和不同浓度(50、75、100、125 μmol/L)的血红素组。血红素组细胞与血红素共培养24 h构建损伤模型。取HT-22细胞,将其分为75 μmol/L血红素组和75 μmol/L血红素+不同浓度(50、100、200 μmol/L)硫氢化钠(NaHS)组,后者与血红素和NaHS共培养24 h。采用CCK-8法检测各组细胞的存活率,蛋白质免疫印迹(WB)法测定溶质载体家族7成员11(SLC7A11)和谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)的表达量;采用钙黄绿素/碘化丙啶(Calcein-AM/PI)双荧光染色法检测活细胞和死细胞,活性氧荧光探针(DCFH-DA)检测活性氧含量,透射电镜观察细胞的超微结构,亚铁离子(Fe 2+)荧光探针检测Fe 2+含量,免疫荧光染色法检测GPX4的表达。 结果:CCK-8和WB结果显示,与空白对照组比较,不同浓度血红素组HT-22细胞的存活率下降、SLC7A11和GPX4的表达水平降低,且均随着血红素浓度的升高呈明显的下降趋势。差异均有统计学意义(均 P<0.05)。CCK-8结果显示,75 μmol/L血红素+不同浓度(50、100、200 μmol/L)NaHS组较75 μmol/L血红素组的细胞存活率均有不同程度增加。与75 μmol/L血红素组比较,Calcein-AM/PI双荧光染色结果显示,75 μmol/L血红素+100 μmol/L NaHS组的PI阳性细胞减少;活性氧和Fe 2+检测结果显示,75 μmol/L血红素+100 μmol/L NaHS组的活性氧及Fe 2+水平下降;WB和免疫荧光染色法结果显示,75 μmol/L血红素+100 μmol/L NaHS组的SCL7A11、GPX4蛋白表达增加。上述数据差异均有统计学意义(均 P<0.05);透射电镜显示,75 μmol/L血红素+100 μmol/L NaHS组的线粒体皱缩、嵴减少等细胞铁死亡特征性改变较75 μmol/L血红素组减少。 结论:H 2S通过降低血红素诱导的氧化应激损伤及铁离子累积,提高血红素损伤的HT-22细胞的SLC7A11、GPX4活性,减轻铁死亡,发挥细胞保护作用。
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编辑人员丨5天前
