目的:探讨微小RNA-21-5p（miR-21-5p）是否通过激活磷脂酰肌醇3激酶/丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶（PI3K/Akt）信号通路调控Ⅱ型肺泡上皮细胞（AECⅡ）凋亡减轻高氧性急性肺损伤（HALI）。方法:将72只雄性SD大鼠按随机数字表法分为常氧对照组、HALI组、PI3K/Akt信号通路抑制剂LY294002+HALI组（LY+HALI组）、miR-21-5p过表达+LY294002+HALI组（miR-21-5p+LY+HALI组）、miR-21-5p过表达+HALI组（miR-21-5p+HALI组）及二甲基亚砜（DMSO）+ HALI组，每组12只。用95%氧气制备HALI动物模型；常氧对照组动物在常氧状态下正常饲养。制模前3周经气管导管滴入200 μL滴度（1×10 12 TU/mL）的miR-21-5p腺相关病毒载体AAV6-miR-21-5p转染肺组织；DMSO及LY294002均以0.3 mg/kg于制模前1 h经尾静脉给药。制模后48 h，取颈动脉血检测氧合指数（OI）及呼吸指数（RI），采用实时荧光定量反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测miR-21-5p表达；取肺组织，采用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测炎症因子〔肿瘤坏死因子-α（TNF-α）和白细胞介素（IL-6、IL-1β）〕水平，测定肺湿/干质量（W/D）比值，苏木素-伊红（HE）染色后光镜下观察肺组织病理学改变并进行病理学评分。每组取6只大鼠提纯AECⅡ细胞，应用流式细胞仪检测凋亡率，采用蛋白质免疫印迹试验（Western blotting）检测磷酸酶及张力蛋白同源基因（PTEN）和PI3K/Akt信号通路蛋白的表达水平。 结果:与常氧对照组比较，高氧暴露后可见肺泡间隔增厚，大量炎症细胞浸润，RI、炎症因子、肺W/D比值、病理学评分，以及AECⅡ细胞早期凋亡率、PTEN蛋白表达和Akt磷酸化水平均升高，而OI及miR-21-5p表达降低，说明模型制备成功。LY294002预处理后，可进一步加重HALI大鼠肺组织病理损伤，RI、炎症因子、肺W/D比值均较HALI组进一步升高，OI进一步降低，同时可促进AECⅡ细胞凋亡，进一步上调PTEN蛋白表达，并抑制Akt磷酸化；而miR-21-5p预处理可负向调控PTEN，激活PI3K/Akt信号通路，抑制AECⅡ细胞凋亡，减轻HALI，与LY+HALI组比较，炎症因子水平降低〔TNF-α（μg/L）：100.33±3.48比116.55±2.53，IL-6（ng/L）：141.06±3.70比161.31±3.59，IL-1β（μg/L）：90.82±3.69比112.23±2.87，均 P<0.05〕，RI、肺损伤病理学评分、肺W/D比值及AECⅡ细胞早期凋亡率明显降低〔RI：0.81±0.02比1.05±0.07，病理学评分（分）：0.304±0.008比0.359±0.007，肺W/D比值：5.29±0.03比5.52±0.08，细胞凋亡率：（27.20±2.34）%比（34.17±1.49）%，均 P<0.05〕，OI、miR-21-5p表达均明显升高〔OI（mmHg，1 mmHg≈0.133 kPa）：266.71±2.75比230.12±4.04，miR-21-5p（2 -ΔΔCt）：2.21±0.13比0.33±0.03，均 P<0.05〕，且AECⅡ细胞PTEN蛋白表达显著降低（PTEN/GAPDH：0.50±0.06比0.93±0.06， P<0.05），Akt磷酸化明显增加〔磷酸化Akt（p-Akt）蛋白（p-Akt/GAPDH）：0.86±0.05比0.56±0.06， P<0.05〕。 结论:miR-21-5p可能通过负向调控PTEN激活PI3K/Akt信号通路，从而抑制AECⅡ细胞凋亡，减轻HALI。

目的:探讨脂多糖（LPS）诱导的O-连接的N-乙酰葡萄糖胺（O-GlcNAc）修饰是否参与内皮细胞炎症信号通路。方法:体外培养人脐静脉内皮细胞（HUVEC），取对数生长期细胞用于实验，分为空白对照组、LPS组（2 000 mg/L的LPS）、O-GlcNAc转移酶（OGT）过表达（OGT-OE）+LPS组（转染OGT-OE质粒+2 000 mg/L的LPS）、蛋白激酶C（PKC）抑制剂+LPS组（10 μmol/L的Go 6983+2 000 mg/L的LPS）、Rho蛋白家族RhoA抑制剂+ LPS组（40 μmol/L盐酸罗红+ 2 000 mg/L的LPS）、磷脂酰肌醇3激酶（PI3K）抑制剂+LPS组（1 μmol/L的SL-2052+2 000 mg/L的LPS）、丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶（Akt）抑制剂+ LPS组（10 μmol/L的PP2+2 000 mg/L的LPS）和小干扰RNA（siRNA）作用的Akt（si-AKT）+LPS组（si-Akt+2 000 mg/L的LPS）。各组细胞经LPS处理24 h后，采用实时荧光定量反转录-聚合酶链反应（RT-qPCR）检测炎症细胞因子〔白细胞介素-6（IL-6）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、细胞间黏附分子-1（ICAM-1）和血管细胞黏附分子-1（VCAM-1）〕的转录水平；采用蛋白质免疫印迹试验（Western blotting）测定OGT、O-GlcNAc、Akt、细胞外信号调节激酶（ERK）、p38丝裂素活化蛋白激酶（p38MAPK）、核转录因子-κB p65（NF-κB p65）和信号转导及转录激活因子3（STAT3）的蛋白表达或磷酸化水平。结果:与空白对照组相比，LPS组细胞中OGT表达及O-GlcNAc修饰水平均降低，并伴随ERK、p38MAPK和STAT3的磷酸化水平升高，且炎症因子的转录水平亦显著升高〔IL-6 mRNA（2 -ΔΔCt）：4.71±0.60比1.03±0.29，TNF-α mRNA（2 -ΔΔCt）：1.89±0.11比1.04±0.35，ICAM-1 mRNA（2 -ΔΔCt）：2.06±0.18比1.02±0.21，VCAM-1 mRNA（2 -ΔΔCt）：2.94±0.57比1.01±0.17，均 P<0.05〕，说明LPS会导致O-GlcNAc修饰水平降低、炎症信号通路激活及炎症因子表达升高。与LPS组相比，OGT-OE+LPS组细胞ERK、p38MAPK、NF-κB p65和STAT3磷酸化水平下降，伴随炎症因子表达显著下降〔IL-6 mRNA（2 -ΔΔCt）：0.12±0.01比0.90±0.17，TNF-α mRNA（2 -ΔΔCt）：0.31±0.01比0.91±0.14，ICAM-1 mRNA（2 -ΔΔCt）：0.64±0.02比1.13±0.16，VCAM-1 mRNA（2 -ΔΔCt）：0.11±0.01比0.93±0.11，均 P<0.05〕，说明OGT水平增高可抑制LPS作用下的内皮细胞炎症信号通路部分激活。与空白对照组比较，LPS组Akt磷酸化水平升高；与LPS组相比，给予PKC抑制剂、RhoA抑制剂、PI3K抑制剂和Akt抑制剂预处理后，OGT表达及O-GlcNAc修饰水平均下调；其中PP2+LPS组IL-6、TNF-α、ICAM-1的转录水平均较LPS组明显下降〔IL-6 mRNA（2 -ΔΔCt）：1.46±0.16比3.55±0.87，TNF-α mRNA（2 -ΔΔCt）：0.98±0.14比1.76±0.10，ICAM-1 mRNA（2 -ΔΔCt）：1.39±0.24比2.04±0.13，均 P<0.05〕，而VCAM-1无明显变化。与LPS组相比，si-Akt+LPS组OGT表达及O-GlcNAc修饰水平均下降，且炎症因子的转录水平亦明显下调〔IL-6 mRNA（2 -ΔΔCt）：0.75±0.03比0.99±0.09，TNF-α mRNA（2 -ΔΔCt）：0.69±0.01比1.10±0.08，ICAM-1 mRNA（2 -ΔΔCt）：0.76±0.01比0.99±0.02，VCAM-1 mRNA（2 -ΔΔCt）：0.93±0.08比1.20±0.21，均 P<0.05〕，说明Akt参与了LPS对OGT的作用过程，并影响了炎症因子表达。 结论:LPS作用下的内皮细胞O-GlcNAc修饰水平下降，促进了炎症信号通路部分激活，主要涉及ERK、p38MAPK和STAT3，并影响了炎症因子表达；Akt可能参与了LPS对O-GlcNAc修饰的抑制作用。

目的:探讨7-脱氢胆固醇还原酶(DHCR7)在上皮性卵巢癌细胞系SKOV3中的表达及其作用机制。方法:聚合酶链反应(PCR)检测DHCR7抑制剂(AY 9944)是否诱导增加SKOV3细胞中DHCR7基因的表达水平。细胞计数试剂盒(CCK-8)、细胞划痕试验检测AY 9944对SKOV3细胞活性及迁移能力的影响。通过蛋白质印迹法(Western blot)探究AY 9944对SKOV3细胞磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)/细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)通路的影响。Graph Pad Prism 8.0.1统计软件进行统计处理。结果:1.AY 9944能够诱导DHCR7基因表达上调( t＝8.485， P<0.05)。2.AY 9944使SKOV3细胞活性明显低于对照组(12 h F＝35.22，24 h F＝20.34，48 h F＝37.56， P<0.05)，细胞迁移能力低于对照组(对照组24 h划痕恢复64.50%，48 h为81.14%，加药组24 h划痕恢复30.08%，48 h时为32.79%， P<0.05)。3.SKOV3细胞中DHCR7表达上调后细胞Akt蛋白水平无明显变化( t＝0.527， P>0.05)，磷酸化Akt(p-Akt)水平低于对照组( t＝4.297， P<0.05)；PI3K水平低于对照组( t＝4.779， P<0.05)，CCND1 mRNA表达水平降低( t＝9.095， P<0.05)，表达低于对照组。 结论:AY 9944抑制SKOV3细胞增殖和迁移能力。AY 9944抑制DHCR7酶活性，同时诱导DHCR7基因的表达，其作用机制可能是AY 9944抑制PI3K/Akt/Cyclin D1信号通路，减少CCND1的表达。

磷脂酰肌醇3激酶δ(phosphoinositide 3-kinase δ,PI3Kδ)过度活化综合征(activated phosphoinositide 3-kinase δ syndrome,APDS)于2013年首次报道.APDS是一种PIK3CD基因或PIK3R1基因突变导致的常染色体显性遗传的原发性免疫缺陷病(primary immunodeficiency disease,PID),临床表现为反复呼吸道感染、非肿瘤性淋巴组织增生、自身免疫性疾病及淋巴瘤等.本文详细介绍了APDS治疗方案,除常规针对免疫缺陷治疗外,如抗菌药物预防、免疫球蛋白替代治疗及造血干细胞移植等,还讨论了针对性更强的哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)抑制剂和PI3Kδ抑制剂.

目的 探讨前列腺癌中PI3K/AKT通路对PHF19 基因表达的调控作用.方法 利用LY294002 和EGF处理PC-3 细胞,随后采用qRT-PCR检测TP63、ΔNp63、PHF19 mRNA的表达;利用ChIPBase、JASPAR数据库预测调控PHF19 基因的转录因子;利用GEPIA 2 数据库分析TP53、TP63 与PHF19 基因mRNA的表达相关性;利用ChIP-qPCR检测ΔNp63蛋白结合PHF19基因启动子的情况.结果 PI3K/AKT通路抑制剂LY294002 可显著抑制PHF19 基因mRNA表达(不同时间处理组相比P＜0.05);PI3K/AKT通路激动剂EGF可显著促进PHF19 mRNA表达(不同时间处理组相比P＜0.05).在前列腺癌组织中TP63 mRNA与PHF19 mRNA表达正相关(r=0.43,P＜0.05).ΔNp63 蛋白可结合PHF19 基因的启动子区域(P＜0.05).LY294002 还可显著抑制TP63、ΔNp63 mRNA的表达(不同时间处理组相比P＜0.05).结论 PI3K/AKT通路可通过转录因子TP63 促进PHF19基因的表达.

PI3Kδ过度活化综合征[activated phosphoinositide 3-kinase-δ(PI3Kδ)syndrome,APDS]是一种罕见的常染色体显性遗传原发性免疫缺陷病(primary immunodeficiency disease,PID).世界范围内最大宗病例报道了53例患者,基本完整描述了本病的临床表现.PI3Kδ过度活化导致的PI3K-AKT-mTOR通路功能增强为临床采用雷帕霉素(mTOR抑制剂)和特异性的p110δ小分子抑制剂靶向治疗提供了经典范例.现就APDS发病机制、临床表现、靶向治疗等最新进展进行综述,以提高我国儿科医师对本病的认识,并帮助大家理解如何在APDS中实践精准医学.

目的:探讨磷脂酰肌醇3-激酶δ亚型 (phosphatidylinositol 3-kinase delta, PI3Kδ) 抑制剂PI-3065对免疫健全小鼠体内乳腺癌生长的抑制作用及其可能的分子机制, 并初步了解其不良反应.方法:对免疫健全的乳腺癌移植瘤小鼠给予大剂量PI-3065 (75 mg/kg) 治疗, 观察小鼠内脏变化.调整剂量并随机分为低剂量组 (18.75 mg/kg) 、高剂量组 (37.5 mg/kg) 和溶剂处理对照组, 每日灌胃给药, 每周测量肿瘤体积2次.HE染色法检测小鼠体内各实质脏器和肿瘤组织的病理学变化.免疫组织化学法检测肿瘤组织中CD8+T细胞的含量.CellTrace.Violet细胞增殖试剂盒和FCM法分别检测CD8+T细胞增殖活性和细胞表型的变化.结果:75 mg/kg PI-3065可造成小鼠肝脏肿大 (P＜0.01) .调整PI-3065剂量后, 37.5 mg/kg剂量组小鼠体内肿瘤生长受到明显抑制 (P＜0.05), 而小鼠饮食、精神、活动、排泄和体质量 (P＞0.05) 无明显变化, 各脏器组织均未发现明显病变, 而肿瘤组织中CD8+T细胞浸润水平明显上调 (P＜0.01) .PI-3065不影响CD8+T细胞增殖 (P＞0.05), 但可以下调细胞中程序性死亡分子1 (programmed death-1, PD-1) 、T细胞免疫球蛋白黏蛋白3 (T cell immunoglobulin and mucin-3, TIM-3) 和淋巴细胞活化基因3 (lymphocyte-activation gene-3, LAG-3) 的表达 (P值均＜0.05), 抑制CD8+T细胞衰竭.结论:大剂量PI-3065会造成肝脏肿大, 而适当剂量的PI-3065处理可抑制小鼠体内乳腺癌移植瘤的生长;其机制与抑制CD8+T细胞衰竭并上调肿瘤中CD8+T细胞浸润水平有关.

目的:构建基于朴素贝叶斯的磷脂酰肌醇3-激酶(phosphatidylinositol 3-kinase,PI3K)家族抑制剂预测模型,进行PI3K抑制剂的活性预测和药物虚拟筛选.方法:首次收集结构多样性的PI3K家族4个亚型靶标(PI3Kα,PI3Kβ,PI3Kγ,PI3Kδ)的抑制剂和非抑制剂共6 175个,以分子指纹为描述符,采用朴素贝叶斯机器学习方法,建立112个分类预测模型.结果:对建立模型的预测结果进行系统比较,找出最优模型.针对PI3Kα,PI3Kβ,PI3Kγ,PI3Kδ的4个靶标,最优模型对测试集的预测准确度(Q)分别为0.774,0.804,0.816,0.673,最优模型对应测试集的AUC值均＞0.82.结论:这些最优模型可用于PI3K抑制剂的活性预测、虚拟筛选及靶向富集库的构建,可供他人进行先导化合物的优化或设计更好的PI3K抑制剂.

目的 观察富氢水对小鼠星形胶质细胞氧化应激损伤的保护作用及对磷酸肌醇3激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)信号通路的影响.方法 体外培养小鼠星形胶质细胞,取对数生长期细胞进行实验.① 实验一:取部分细胞,用1.25、2.50、5.00、10.00 μmol/L过氧化氢(H2O2)作用细胞20 min,以确定H2O2诱导星形胶质细胞损伤所需的适宜浓度;用25、50、100、200 μmol/L富氢水分别培养3、6、9、12 h,以确定富氢水预处理的最佳浓度及时间;用50 μmol/L富氢水与PI3K/Akt信号通路抑制剂渥曼青霉素200 nmol/L或400 nmol/L共同培养,以确定渥曼青霉素最佳抑制浓度.采用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测星形胶质细胞存活率.② 实验二:取部分细胞,按随机数字表法分为空白对照组、H2O2损伤组、富氢水预处理组(HW+H2O2组)、富氢水与渥曼青霉素共培养预处理组(HW+WM+H2O2组).采用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测PI3K、Akt的mRNA表达,用蛋白质免疫印迹试验(Western Blot)检测PI3K、Akt、磷酸化Akt(p-Akt)的蛋白表达.结果 ① 实验一:以空白对照组细胞存活率为100%.细胞存活率随H2O2浓度的增加而逐渐降低,2.50 μmol/L的H2O2作用20 min细胞存活率降至50%左右,故以此浓度建立细胞损伤模型.细胞存活率随富氢水预处理浓度升高、作用时间延长呈先升高后降低趋势,50 μmol/L富氢水预处理9 h时细胞存活率最高,故以此建立富氢水预保护模型.200 nmol/L或400 nmol/L渥曼青霉素与富氢水共同培养后,细胞活性得到抑制,200 nmol/L的渥曼青霉素干预后细胞存活率与H2O2损伤组差异无统计学意义,故以此建立星形胶质细胞抑制模型.② 实验二:与空白对照组比较,H2O2损伤组PI3K、Akt的mRNA表达及PI3K、Akt、p-Akt的蛋白表达均明显降低.与H2O2损伤组比较,HW+H2O2组PI3K、Akt的mRNA表达及PI3K、Akt、p-Akt的蛋白表达均明显升高〔PI3K mRNA(2-ΔΔCT):0.843±0.019比0.631±0.038,Akt mRNA(2-ΔΔCT):0.591±0.025比0.558±0.037,PI3K/β-actin :1.277±0.008比0.757±0.004,Akt/β-actin :1.308±0.015比0.682±0.006,p-Akt/β-actin :1.210±0.005比0.614±0.005,均P＜0.05〕.HW+WM+H2O2组PI3K、Akt的mRNA表达分别为0.784±0.159和0.556±0.037,PI3K、Akt、p-Akt的蛋白表达分别为0.715±0.006、0.686±0.005和0.606±0.004,均明显低于HW+H2O2组(均P＜0.05),而与H2O2损伤组比较差异无统计学意义(均P＞0.05).结论 富氢水通过激活PI3K/Akt信号通路介导小鼠星形胶质细胞而发挥抗氧化的生物学功能.

duvelisib (Duv)为口服磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)δ/γ双重抑制剂.2018年9月24日,美国食品和药物管理局批准Duv用于已经接受过至少两次前期疗法的复发/难治性(R/R)慢性淋巴细胞白血病(CLL)/小淋巴细胞淋巴瘤(SLL)和滤泡性淋巴瘤(FL)成年患者.Duv单药疗法在R/R CLL/SLL、FL患者中均显示出积极疗效.与奥法木单抗相比,Duv能显著改善R/R CLL/SLL患者的平均无进展生存期及总缓解率,17p基因缺失/TP53基因突变患者也同样受益.Duv最常见的不良反应包括腹泻或结肠炎、中性粒细胞减少、皮疹、肺炎和贫血等.