目的:探讨7-脱氢胆固醇还原酶(DHCR7)在上皮性卵巢癌细胞系SKOV3中的表达及其作用机制。方法:聚合酶链反应(PCR)检测DHCR7抑制剂(AY 9944)是否诱导增加SKOV3细胞中DHCR7基因的表达水平。细胞计数试剂盒(CCK-8)、细胞划痕试验检测AY 9944对SKOV3细胞活性及迁移能力的影响。通过蛋白质印迹法(Western blot)探究AY 9944对SKOV3细胞磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)/细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)通路的影响。Graph Pad Prism 8.0.1统计软件进行统计处理。结果:1.AY 9944能够诱导DHCR7基因表达上调( t＝8.485， P<0.05)。2.AY 9944使SKOV3细胞活性明显低于对照组(12 h F＝35.22，24 h F＝20.34，48 h F＝37.56， P<0.05)，细胞迁移能力低于对照组(对照组24 h划痕恢复64.50%，48 h为81.14%，加药组24 h划痕恢复30.08%，48 h时为32.79%， P<0.05)。3.SKOV3细胞中DHCR7表达上调后细胞Akt蛋白水平无明显变化( t＝0.527， P>0.05)，磷酸化Akt(p-Akt)水平低于对照组( t＝4.297， P<0.05)；PI3K水平低于对照组( t＝4.779， P<0.05)，CCND1 mRNA表达水平降低( t＝9.095， P<0.05)，表达低于对照组。 结论:AY 9944抑制SKOV3细胞增殖和迁移能力。AY 9944抑制DHCR7酶活性，同时诱导DHCR7基因的表达，其作用机制可能是AY 9944抑制PI3K/Akt/Cyclin D1信号通路，减少CCND1的表达。

目的:利用生物信息学方法从EB病毒再激活的鼻咽癌细胞系基因表达谱中筛选差异表达基因,并分析它们之间的互相作用关系.方法:利用edgR包等相关软件从基因表达谱中筛选差异表达的基因,分析它们之间的互相作用关系,并对其进行在线GO分析、KEGG富集分析及蛋白互作分析.结果:共筛选出4496个差异表达基因,包括1954个上调基因和2542个下调基因.GO分析结果显示,差异表达基因在生物过程(BP)中显著富集,包括病毒应答、Ⅰ型干扰素信号通路、γ干扰素介导的信号传导途径、病毒防御反应、胆固醇生物合成过程、氧化还原过程、类异戊二烯生物合成过程、类固醇代谢过程、脂质代谢过程和花生四烯酸代谢过程;在分子功能(MF)中,包括丝氨酸型内肽酶活性、蛋白同二聚化活性、醛脱氢酶(NAD)活性、氧气结合、3-氯烯丙基醛脱氢酶活性、血红素结合、谷胱甘肽转移酶活性、氧化还原酶活性、铁离子结合和药物结合;在细胞组分(CC)中,包括胞外体、细胞质、细胞器膜、基底外侧质膜、胞外空间、内质网膜、内质网、过氧化物酶体、线粒体、顶端质膜.KEGG通路分析显示,差异表达基因在代谢途径、抗生素生物合成、萜类骨架生物合成、化学致癌作用、丙型肝炎、胆汁分泌、细胞色素P450代谢外源性物质、氨基酸生物合成、类固醇生物合成、精氨酸和脯氨酸代谢等信号通路中显著富集.在蛋白互作分析网络中筛选出10个节点度最高的核心基因MAPK3、IRF7、IRF9、IFI6、TRIM22、IFI27、OAS2、TRIM31、HLA-F和MX1.结论:通过基因芯片对比筛选,EB病毒经化学物质再激活后引起宿主细胞多个基因表达发生变化,为相关临床研究提供了重要的信息基础.

在多发性硬化症患者的中枢神经系统中,脱髓鞘的轴突难以有效复髓鞘是治疗疾病的主要障碍,而髓鞘再生失败的瓶颈问题是少突胶质细胞前体细胞(OPC)不能分化为成熟的少突胶质细胞.复髓鞘是继脱髓鞘后自然发生的再生反应,包括OPC的激活、迁移和分化;具有保护神经轴突、进而避免神经元变性坏死的作用.近年来在体脱髓鞘模型研究发现,二甲双胍、氯马斯汀能有效加强复髓鞘,鉴定了髓鞘转录因子1样蛋白(Myt1L)、N-甲基-D-天门冬氨酸(NMDA)受体、星形细胞连接蛋白43(Cx43)、G蛋白偶联受体17(GPR17)、κ阿片受体(KOR)、甾醇14α-脱甲基化酶(CYP51)、脱氢胆固醇还原酶14(TM7 SF2)和3-β-羟基类固醇-8,7-异构酶(EBP)等促进OPC分化的潜在药物靶点.本文基于对复髓鞘机制的理解,讨论了促进OPC分化和增强复髓鞘的研究进展,这些进展为进一步研发治疗多发性硬化症的新方法提供了思路.

Smith-Lemli-Opitz综合征(SLOS)是一种与先天性胆固醇合成障碍相关的常染色体隐性遗传病,该病主要因编码3β-脱氢胆固醇-Δ7还原酶(DHCR7)的基因发生突变,而致使患者产生胆固醇水平明显降低、前体物质7-脱氢胆固醇(7-DHC)大量积聚的特征性生化表现.SLOS患者的临床表现多样,包括但不仅限于发育畸形、行为异常、视觉功能障碍、皮肤光敏性改变以及免疫功能缺陷等,而其所涉及的致病分子机制也一直是研究者们关注的重点.本文对近年来SLOS综合征致病的分子机制研究进展进行综述,以期为今后制订更为有效的SLOS治疗方案提供思路,同时有助于理解正常胆固醇水平对机体稳态维持的重要生理意义.

目的 采用生物信息学技术研究7-脱氢胆固醇还原酶(DHCR7)在膀胱癌中的表达及其与临床预后的关系等.方法 采用TCGA、GEO数据库分析膀胱癌与正常膀胱组织中DHCR7基因的表达,利用Hu-man Protein Atlas数据库验证DHCR7蛋白在膀胱癌组织中的表达,通过Kaplan Meier法分析DHCR7基因表达水平与膀胱癌患者预后及生存情况之间的关系;应用GeneMANIA数据库构建蛋白质互作网络(PPI),并通过GEPIA2分析互作基因在膀胱癌中的相关性;依据DHCR7基因mRNA相对表达水平,应用GSEA 4.1.0软件对TCGA数据进行分层基因富集分析.结果 膀胱癌组织中DHCR7基因mRNA相对表达水平明显高于癌旁组织及正常膀胱组织,差异有统计学意义(P<0.05);不同肿瘤分期、分级、分子分型膀胱癌组织中DHCR7基因mRNA相对表达水平比较,差异有统计学意义(P<0.05);与DHCR7低表达组相比,DHCR7高表达组的总生存期、肿瘤特异性生存期、无进展生存期更低,差异有统计学意义(P<0.05);PPI及基因富集分析显示DHCR7基因功能主要与胆固醇稳态、MTORC1通路等有关.结论 DHCR7基因在膀胱癌中高表达,与临床不良预后密切相关,DHCR7基因可能通过多种机制参与肿瘤发展过程,有望成为膀胱癌干预治疗、预后评估新的靶点.

目的:将胆固醇生物转化成7α-羟基-4-胆甾烯-3-酮.方法:PCR扩增中华大蟾蜍来源的3β羟基类固醇脱氢酶基因(Bg-HSD3B7)、细胞色素P450还原酶基因(Bg-CPR)、大鼠来源的细胞色素P450酶基因(Rn-CYP7A1),生物信息学网站ExPASy、TMHMM预测理化性质,采用不同的构建组合方式构建工程菌;以胆固醇为底物进行全细胞催化,高效液相色谱检测是否产生7-α羟基胆固醇中间产物和7α-羟基-4-胆甾烯-3-酮终产物.结果:克隆并以单顺反子方式构建到pETM6载体,获得带有3个基因Rn-CYP7A1、Bg-CPR、Bg-HSD3B7的大肠杆菌工程菌BL21(DE3),该工程菌可以全细胞催化方式将胆固醇转化生成7α-羟基-4-胆甾烯-3-酮,且没有中间产物.结论:克隆得到中华大蟾蜍来源的Bg-HSD3B7基因、Bg-CPR基因、大鼠来源的Rn-CYP7A1基因,构建了具有全细胞催化功能的工程大肠杆菌,可以催化胆固醇转化生成7α-羟基-4-胆甾烯-3-酮.