目的:探讨沉默信息调节因子1（SIRT1）的氧连乙酰葡萄糖胺（O-GlcNAc）糖基化修饰介导的核因子（NF）-κB信号通路对心肌细胞损伤的调节作用。方法:为了分析O-GlcNAc糖基转移酶（OGT）对SIRT1功能的影响，将H9c2细胞分为正常葡萄糖（NG）组、高糖（HG，30 mmol/L）组、HG+对照小干扰RNA（HG+siNC）组、HG+OGT siRNA（HG+siOGT）组、HG+对照质粒（HG+vector）组、HG+OGT过表达质粒（HG+OGT）组，每组6个复孔。为了分析O-GlcNAc糖基化对SIRT1蛋白功能的影响，将H9c2细胞分为NG组、HG组、HG+二甲基亚砜（HG+DMSO）组、HG+OGT抑制剂（HG+Ac-5SGlcNAc）组和HG+OGA抑制剂（HG+NButGT）组，每组6个复孔。为了分析O-GlcNAc修饰位点突变对SIRT1功能的影响，将H9c2细胞分为NG组、HG组、HG+Vector组、HG+SIRT1 WT组和HG+SIRT1 S549A组，每组6个复孔。采用Western blotting检测细胞中SIRT1蛋白表达和O-GlcNAc糖基化修饰水平，以及NF-κB信号通路表达水平，使用2′，7′-二氯荧光素和脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法（TUNEL）检测试剂盒检测细胞活性氧（ROS）和凋亡水平，采用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测细胞培养上清中炎症因子［白细胞介素（IL）-6、IL-1β和肿瘤坏死因子α（TNF-α）］水平。两组间比较采用 t检验，多组间比较采用单因素方差分析。 结果:与NG组相比，HG组H9c2细胞中SIRT1蛋白降低（ P<0.001），OGT的表达水平升高（ P<0.001），同时H9c2细胞ROS和凋亡水平增加（ P<0.05），NF-κB信号通路介导的炎症反应被激活（ P<0.05）；与HG+siNC组和HG+DMSO组比较，HG+siOGT组和HG+Ac-5SGlcNAc组H9c2细胞中SIRT1的O-GlcNAc修饰水平均降低（ P<0.001），细胞内ROS和凋亡水平降低（ P<0.05），NF-κB信号通路介导的炎症反应被抑制（ P<0.05）；与HG+Vector组和HG+DMSO组比较，HG+OGT组和HG+NButGT组H9c2细胞中SIRT1的O-GlcNAc修饰水平增加（ P<0.05），细胞ROS和凋亡水平增加（ P<0.05），NF-κB信号通路介导的炎症反应被激活（ P<0.05）。与HG+SIRT1 WT组比较，HG+SIRT1 S549A组中H9c2细胞增殖能力降低（ P<0.01），细胞ROS和凋亡水平均增加（ P<0.01），NF-κB信号通路水平增加（ P<0.001）。 结论:高浓度葡萄糖通过增加SIRT1蛋白的O-GlcNAc糖基化修饰水平，抑制SIRT1的蛋白水平和功能，并导致细胞内NF-κB信号通路的激活，增加高糖诱导的细胞炎症反应，促进心肌细胞损伤。

目的:评价蛋白质糖基化(O-GlcNAc)修饰在氧糖剥夺/复氧复糖小鼠神经细胞氧化应激损伤中的作用。方法:标准小鼠海马神经细胞系，以5×10 4个/ml的密度接种于培养板或培养皿，采用随机数字表法分为4组( n＝20)：正常组(N组)、O- (连接) N-乙酰葡糖胺水解酶(OGA)抑制剂Thiamet G组(T组)、氧糖剥夺/复氧复糖组(D/R组)以及Thiamet G+氧糖剥夺/复氧复糖组(T-D/R组)。采用低糖培养基在94%N 2-5%CO 2-1%O 2混合气体培养6 h进行糖氧剥夺，随后更换正常培养基进行复氧复糖12 h。T-D/R组在氧糖剥夺/复氧复糖前4 h时细胞培养液中加入终浓度1 mmol/L的Thiamet G，T组于提取细胞蛋白前4 h换成含终浓度1 mmol/L Thiamet G的培养基。复氧复糖完成后，采用DCFH-DA染色法检测细胞ROS累积量，Jc-1染色法检测线粒体膜电位，免疫荧光法检测O-GlcNAc修饰水平，Western blot法检测核因子E2相关因子2(Nrf2)和c-Jun氨基末端激酶(JNK)、磷酸化JNK(p-JNK)、p53抑癌基因(p53)表达水平。 结果:与N组比较，T组神经细胞O-GlcNAc表达上调，D/R组神经细胞ROS累积量增多，JC-1单体升高，JC-1聚合物降低，Nrf2表达下调，p-JNK、p53表达上调，T-D/R组神经细胞O-GlcNAc表达上调，ROS累积量增多，JC-1单体与JC-1聚合升高，Nrf2表达下调，p-JNK、p53表达上调( P<0.05)。与D/R组比较，T-D/R组神经细胞O-GlcNAc表达上调，ROS累积量减少，JC-1单体降低，JC-1聚合物升高，Nrf2表达上调，p-JNK、p53表达下调( P<0.05)。 结论:小鼠神经细胞氧糖剥夺/复氧复糖时，蛋白质O-GlcNAc修饰作为内源性保护机制水平增强，可减轻氧化应激损伤，机制可能与调控Nrf2介导的JNK通路有关。

目的:探讨N-乙酰半乳糖氨基转移酶7(GALNT7)对前列腺癌细胞迁移、侵袭和增殖的作用及分子机制。方法:选取2019年1月至2022年1月在天津市第五中心医院和延边大学附属医院泌尿外科行前列腺手术的30例前列腺癌患者的癌组织为研究对象，采用免疫组织化学染色、蛋白质免疫印迹(Western blot)和实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测前列腺癌组织GALNT7的表达水平。通过细胞计数试剂盒(CCK-8)法、5-溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)掺入实验、划痕实验检测细胞迁移、侵袭和增殖能力；采用VVA凝集素pull-down实验和Western blot检测GALNT7对表皮生长因子受体(EGFR)磷酸化、O-GlcNAc糖基化修饰的影响，及EGFR/磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)信号通路的表达水平。组间差异采用配对 t检验或方差分析(ANOVA)。 结果:前列腺癌组织中GALNT7蛋白和RNA表达水平(7.86±1.64、9.49±2.34)明显高于癌旁组织(0.98±0.25、0.99±0.33)，差异有统计学意义( t＝13.080、11.390， P<0.05)。CCK-8法检测结果显示Ad-GALNT7组细胞增殖能力显著高于Ad-GFP组(1.14±0.35比0.76±0.19， t＝8.287， P<0.05)。Ad-GALNT7组BrdU阳性比例明显高于Ad-GFP组(42.36±5.19比14.68±3.12， t＝6.091， P<0.05)。划痕实验证明Ad-GALNT7组前列腺癌细胞的迁移侵袭能力明显高于Ad-GFP组(84.80±3.96比58.34±2.19， t＝11.860， P<0.05)。Western blot结果显示，si-GALNT7组EGFR磷酸化显著低于si-GFP组(1.03±0.26比2.68±0.57， t＝3.693， P<0.05)。VVA凝集素pull-down实验，发现si-GALNT7组EGFR O-GlcNAc糖基化修饰水平显著低于si-GFP组(0.55±0.13比1.00±0.27， t＝4.570， P<0.05)。 结论:GALNT7在前列腺癌中表达显著增加，并通过O-GlcNAc糖基化修饰EGFR，激活EGFR/PI3K/Akt信号通路，促进前列腺癌细胞的迁移、侵袭和增殖。

氧连接的 N-乙酰葡糖胺（ O-linked β- N-acetylglucosamine, O-GlcNAc）修饰是一种在细胞中广泛存在的蛋白质翻译后修饰方式，在相关酶的作用下，将 N-乙酰氨基葡萄糖可逆地连接于丝氨酸/苏氨酸末端。缺血性疾病损伤是由于组织血流灌注不足导致局部组织或细胞发生缺氧损伤的现象，其转归受到 O-GlcNAc修饰的影响。文章通过综述 O-GlcNAc修饰在缺血性疾病损伤中通过介导线粒体分裂、细胞凋亡、内质网应激、细胞能量代谢、自噬及氧化应激现象，从而预防和缓解缺血、缺氧对细胞的损伤，旨在探索 O-GlcNAc修饰在缺血性损伤疾病中发挥的保护作用，并为后续临床上预防和降低缺血性疾病损伤提供新的治疗思路。

目的:评估O-N-乙酰葡糖胺（O-N-acetyl-glucosamine, O-GlcNAc）糖基化修饰转移酶（O-GlcNAc transferase, OGT）介导的受体相互作用蛋白（receptor interacting protein kinase, RIPK) 3糖基化在七氟醚后处理减轻离体大鼠心肌缺血再灌注（ischemia reperfusion, IR）损伤中的作用。方法:取Langendorff离体灌注模型制备成功的大鼠心脏45个，采用随机数字表法分为5组（每组9个）：假手术组（SHAM组）、IR组、七氟醚后处理组（SPC组）、SPC+溶剂组[SPC+二甲基亚砜（dimethyl sulfoxide, DMSO）组]和SPC+OGT抑制剂组（SPC+OSMI-1组）。建模完成后各组均平稳30 min，之后SHAM组给予K-H液持续灌注150 min，其余各组大鼠心脏均经历停止灌注30 min后恢复灌注2 h的过程；SPC组、SPC+DMSO组和SPC+OSMI-1组均于再灌注初给予含2.4%七氟醚的K-H液持续灌注15 min；此外，在术前准备的K-H液中，SPC+DMSO组给予50 μmol/L DMSO, SPC+OSMI-1组给予50 μmol/L OSMI-1。连续监测各组大鼠缺血前即刻（T 0）、再灌注30 min (T 1）、再灌注60 min (T 2）、再灌注90 min (T 3）、再灌注2 h (T 4）的左室峰压（left ventricular peak pressure, LVSP）、左室舒张末压（left ventricular end-diastolic pressure, LVEDP）、心率、左室压力升高最大速率（maximum rate of rise of left ventricular pressure, +dp/dt max）与左室压力降低最大速率（maximum rate of drop of left ventricular pressure,-dp/dt max）；在再灌注末，采用1%氯化三苯基四氮唑 （triphenyl tetrazolium chloride, TTC）染色检测各组大鼠心肌梗死范围；采用ELISA法检测各组大鼠冠状动脉漏出液乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase, LDH）浓度；Western blot法检测各组大鼠心脏O-GlcNAc、OGT、O-糖基化糖苷酶（O-GlcNAcase, OGA）、磷酸化受体相互作用蛋白1 (phosphorylated RIPK1, p-RIPK1）、磷酸化RIPK3 (phosphorylated RIPK3, p-RIPK3）和磷酸化混合系激酶结构域样蛋白（phosphorylated mixed lineage kinase domain-like protein, p-MLKL）蛋白水平。 结果:与T 0比较，IR组、SPC组、SPC+DMSO组、SPC+OSMI-1组T 1~T 4时心率、LVSP、+dp/dt max、-dp/dt max降低（ P<0.05），LVEDP升高（ P<0.05）；与SHAM组比较，IR组、SPC组、SPC+DMSO组、SPC+OSMI-1组T 1~T 4时心率、LVSP、+dp/dt max、-dp/dt max降低（ P<0.05），LVEDP升高（ P<0.05）；与IR组比较，SPC组和SPC+DMSO组T 1~T 4时心率、LVSP、+dp/dt max、-dp/dt max升高（ P<0.05），LVEDP降低（ P<0.05）。与SHAM组比较：IR组、SPC组、SPC+DMSO组、SPC+OSMI-1组心肌梗死范围和LDH浓度增加（ P<0.05），OGT和OGA蛋白水平升高（ P<0.05），p-RIPK1蛋白水平升高（ P<0.05）；IR组、SPC组、SPC+DMSO组O-GlcNAc蛋白水平升高（ P<0.05）；IR组、SPC+OSMI-1组p-RIPK3、p-MLKL蛋白水平升高（ P<0.05）。与IR组比较，SPC组、SPC+DMSO组心肌梗死范围和LDH浓度减少（ P<0.05），O-GlcNAc、OGT蛋白水平升高（ P<0.05），p-RIPK3、p-MLKL蛋白水平降低（ P<0.05）。与SPC组比较，SPC+OSMI-1组心肌梗死范围和LDH浓度增加（ P<0.05），O-GlcNAc、OGT蛋白水平降低（ P<0.05），p-RIPK3、p-MLKL蛋白水平升高（ P<0.05）。 结论:七氟醚后处理可降低离体大鼠心肌IR损伤，其机制与激活OGT介导的RIPK3糖基化有关。

目的:探讨脂多糖（LPS）诱导的O-连接的N-乙酰葡萄糖胺（O-GlcNAc）修饰是否参与内皮细胞炎症信号通路。方法:体外培养人脐静脉内皮细胞（HUVEC），取对数生长期细胞用于实验，分为空白对照组、LPS组（2 000 mg/L的LPS）、O-GlcNAc转移酶（OGT）过表达（OGT-OE）+LPS组（转染OGT-OE质粒+2 000 mg/L的LPS）、蛋白激酶C（PKC）抑制剂+LPS组（10 μmol/L的Go 6983+2 000 mg/L的LPS）、Rho蛋白家族RhoA抑制剂+ LPS组（40 μmol/L盐酸罗红+ 2 000 mg/L的LPS）、磷脂酰肌醇3激酶（PI3K）抑制剂+LPS组（1 μmol/L的SL-2052+2 000 mg/L的LPS）、丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶（Akt）抑制剂+ LPS组（10 μmol/L的PP2+2 000 mg/L的LPS）和小干扰RNA（siRNA）作用的Akt（si-AKT）+LPS组（si-Akt+2 000 mg/L的LPS）。各组细胞经LPS处理24 h后，采用实时荧光定量反转录-聚合酶链反应（RT-qPCR）检测炎症细胞因子〔白细胞介素-6（IL-6）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、细胞间黏附分子-1（ICAM-1）和血管细胞黏附分子-1（VCAM-1）〕的转录水平；采用蛋白质免疫印迹试验（Western blotting）测定OGT、O-GlcNAc、Akt、细胞外信号调节激酶（ERK）、p38丝裂素活化蛋白激酶（p38MAPK）、核转录因子-κB p65（NF-κB p65）和信号转导及转录激活因子3（STAT3）的蛋白表达或磷酸化水平。结果:与空白对照组相比，LPS组细胞中OGT表达及O-GlcNAc修饰水平均降低，并伴随ERK、p38MAPK和STAT3的磷酸化水平升高，且炎症因子的转录水平亦显著升高〔IL-6 mRNA（2 -ΔΔCt）：4.71±0.60比1.03±0.29，TNF-α mRNA（2 -ΔΔCt）：1.89±0.11比1.04±0.35，ICAM-1 mRNA（2 -ΔΔCt）：2.06±0.18比1.02±0.21，VCAM-1 mRNA（2 -ΔΔCt）：2.94±0.57比1.01±0.17，均 P<0.05〕，说明LPS会导致O-GlcNAc修饰水平降低、炎症信号通路激活及炎症因子表达升高。与LPS组相比，OGT-OE+LPS组细胞ERK、p38MAPK、NF-κB p65和STAT3磷酸化水平下降，伴随炎症因子表达显著下降〔IL-6 mRNA（2 -ΔΔCt）：0.12±0.01比0.90±0.17，TNF-α mRNA（2 -ΔΔCt）：0.31±0.01比0.91±0.14，ICAM-1 mRNA（2 -ΔΔCt）：0.64±0.02比1.13±0.16，VCAM-1 mRNA（2 -ΔΔCt）：0.11±0.01比0.93±0.11，均 P<0.05〕，说明OGT水平增高可抑制LPS作用下的内皮细胞炎症信号通路部分激活。与空白对照组比较，LPS组Akt磷酸化水平升高；与LPS组相比，给予PKC抑制剂、RhoA抑制剂、PI3K抑制剂和Akt抑制剂预处理后，OGT表达及O-GlcNAc修饰水平均下调；其中PP2+LPS组IL-6、TNF-α、ICAM-1的转录水平均较LPS组明显下降〔IL-6 mRNA（2 -ΔΔCt）：1.46±0.16比3.55±0.87，TNF-α mRNA（2 -ΔΔCt）：0.98±0.14比1.76±0.10，ICAM-1 mRNA（2 -ΔΔCt）：1.39±0.24比2.04±0.13，均 P<0.05〕，而VCAM-1无明显变化。与LPS组相比，si-Akt+LPS组OGT表达及O-GlcNAc修饰水平均下降，且炎症因子的转录水平亦明显下调〔IL-6 mRNA（2 -ΔΔCt）：0.75±0.03比0.99±0.09，TNF-α mRNA（2 -ΔΔCt）：0.69±0.01比1.10±0.08，ICAM-1 mRNA（2 -ΔΔCt）：0.76±0.01比0.99±0.02，VCAM-1 mRNA（2 -ΔΔCt）：0.93±0.08比1.20±0.21，均 P<0.05〕，说明Akt参与了LPS对OGT的作用过程，并影响了炎症因子表达。 结论:LPS作用下的内皮细胞O-GlcNAc修饰水平下降，促进了炎症信号通路部分激活，主要涉及ERK、p38MAPK和STAT3，并影响了炎症因子表达；Akt可能参与了LPS对O-GlcNAc修饰的抑制作用。

糖尿病足溃疡是糖尿病的主要并发症之一，其主要特征是延迟愈合。研究表明表皮KC功能障碍在糖尿病创面愈合延迟中起关键作用，而c-Myc蛋白及其氧连接氮乙酰葡萄胺糖基化修饰（O-GlcNAc）与KC功能障碍的关系尚不清楚。上海交通大学医学院附属瑞金医院刘琰教授团队近期于《Burns & Trauma》发文《Inhibiting Hyper-O-GlcNAcylation of c-Myc accelerate diabetic wound healing by alleviating keratinocyte dysfunction》，该研究观察到糖尿病患者创面边缘KC的增殖和分裂活跃，迁移和分化降低；在糖尿病大鼠创面边缘KC和30 mmol/L葡萄糖培养中的人永生化表皮细胞HaCaT中也观察到前述同样的现象。进一步研究显示KC中c-Myc的表达增加，c-Myc的高表达促进了HaCaT的增殖，抑制了其迁移和分化，通过抑制c-Myc促进了大鼠糖尿病创面愈合。30 mmol/L葡萄糖通过增加c-Myc的O-GlcNAc使c-Myc蛋白更稳定，抑制O-GlcNAc缓解了KC功能异常并能促进糖尿病创面愈合，这项研究提示c-Myc和O-GlcNAc是糖尿病创面治疗的潜在靶点。

目的:观察精子发生和中心粒相关1(SPATC1)在头颈鳞癌组织及细胞系中的表达，探寻可能的调控机制。方法:利用生物信息学技术筛选出SPATC1；用免疫组织化学和蛋白印迹实验分别检测SPATC1在头颈鳞癌组织及细胞中的表达，Kaplan-Meier法分析SPATC1在头颈鳞癌组织表达与患者预后的相关性；使用小干扰RNA(siRNA)下调SPATC1和氧连接乙酰葡萄糖胺转移酶(OGT)的表达，使用外源表达质粒上调SPATC1和OGT的表达，筛选构建稳定的细胞系。采用细胞计数试剂盒(CCK-8)实验和流式细胞术分析分别研究SPATC1和OGT表达水平变化对细胞增殖及凋亡的影响；成对资料采用Student’s t检验，多组间比较采用单因素方差分析(组间比较采用LSD- t检验)。使用Pearson相关系数评价OGT基因与SPATC1表达的相关性。 结果:HNSCC组织及细胞系中的SPTC1表达显著升高(组织0.809±0.438，细胞0.809±0.306， P<0.01)，SPATC1高表达组患者的总生存率明显低于SPATC1低表达组( χ2＝7.713， P<0.01)；细胞转染中，SPATC1表达上调导致细胞增殖明显增加(Fadu细胞和SCC154 F＝202.006， F＝230.678， P均<0.05；LSD- t检验 P均<0.05)，同时细胞凋亡减少(Fadu细胞和SCC154 F＝2855.197， F＝1130.925， P均<0.05)。而SPATC1下调导致相反的结果( P均<0.05)。OGT mRNA表达水平变化与肿瘤细胞SPATC1 mRNA及蛋白表达水平呈正相关(OGT mRNA与SPATC1 mRNA相关性：Fadu r＝0.742，SCC154 r＝0.645；OGT mRNA与SPATC1蛋白相关性：Fadu r＝0.790，SCC154 r＝0.687， P<0.05)。 结论:SPATC1在HNSCC中高表达，可以促进HNSCC肿瘤细胞增殖，减少其凋亡。SPATC1受O-GlcNAc糖基化修饰调控，与OGT关系密切。

目的:评价氧连氮-乙酰葡萄糖胺(O-GlcNAc)转移酶(OGT)在甲烷减轻大鼠脊髓神经元氧糖缺失-复氧复糖损伤中的作用及其与Nrf2表达的关系。方法:原代培养的大鼠脊髓神经元，以1×10 5个/ml密度接种于6孔板，采用随机数字表法分为4组( n＝60)：对照组(C组)、氧糖缺失-复氧复糖组(OGD/R组)、甲烷组(M组)和甲烷＋OGT抑制剂四氧嘧啶组(MA组)。采用无糖-无血清Earle平衡盐液，在37 ℃、5%CO 2-95%N 2缺氧培养箱中孵育2 h，然后正常培养的方法制备脊髓神经元氧糖缺失-复氧复糖损伤模型。M组于复氧复糖时在培养液中加入200 μl甲烷饱和生理盐水(甲烷终浓度1.8 mmol/L)；MA组于M组复氧复糖后10 min在培养液中加入8 mmol/L四氧嘧啶。复氧复糖12 h时，测定神经元存活率、LDH漏出率和凋亡率；采用染色质免疫沉淀和实时荧光定量PCR(qPCR)法检测Nrf2基因启动子区OGT和H3K4me3表达水平；提取核蛋白，采用免疫沉淀和Western blot法测定H3K4甲基转移酶复合物调节亚基RBBP5的O-GlcNAc糖基化水平；采用邻位连接法检测H3K4甲基转移酶复合物催化亚基MLL1与组蛋白H3空间邻近水平；采用Western blot和qPCR法测定Nrf2及其mRNA的表达；采用ELISA法测定上清液SOD、过氧化氢酶(CAT)活性和MDA浓度。 结果:与C组比较，OGD/R组和M组神经元存活率降低，LDH漏出率、凋亡率和上清液MDA浓度升高( P<0.01)；与OGD/R组比较，M组神经元存活率升高，LDH漏出率、凋亡率和上清液MDA浓度降低，Nrf2启动子区OGT和H3K4me3表达上调，RBBP5亚基O-GlcNAc糖基化、MLL1亚基与组蛋白H3空间邻近水平增高，Nrf2及其mRNA表达上调，上清液SOD和CAT活性升高( P<0.01)；与M组比较，MA组神经元存活率降低，LDH漏出率、凋亡率和上清液MDA浓度升高，Nrf2启动子区OGT和H3K4me3表达下调，RBBP5亚基O-GlcNAc糖基化、MLL1亚基与组蛋白H3空间邻近水平降低，Nrf2及其mRNA表达下调，SOD和CAT活性下降( P<0.05或0.01)。 结论:OGT参与了甲烷减轻大鼠脊髓神经元氧糖缺失-复氧复糖损伤的过程，与上调Nrf2表达有关。

O连接N-乙酰氨基葡萄糖（O-GlcNAc）糖基化修饰是一种常见的蛋白质翻译后修饰，其在胰岛素抵抗及糖尿病并发症中发挥着重要作用。近年来相关研究证明O-GlcNAc糖基化修饰与糖尿病肾病密切相关，高糖状态下进入氨基己糖生物合成途径的葡萄糖通量增加，O-GlcNAc糖基化修饰水平增加，其通过修饰特定的蛋白，诱导基底膜损伤、细胞肥大、足细胞功能障碍、间质纤维化等病理改变，参与糖尿病肾病的发生发展。抑制 O-GlcNAc糖基化修饰可减轻相关组织的糖毒性，延缓向终末期肾病进展，为临床诊疗提供针对性策略。