目的:检测ADAR1在胃癌患者中的表达情况,探讨ADAR1的表达水平对胃癌患者的潜在临床意义.方法:通过基因表达谱数据交互分析(GEPIA)数据库获得了胃癌和正常胃组织样本ADAR1在mRNA水平的表达差异情况,在170例胃癌患者的胃癌和配对组织芯片中,通过免疫组织化学手段检测ADAR1的表达情况,并分析ADAR1的表达和临床特征之间的关系.通过癌症基因组图谱(TCGA)数据库获得胃癌的RNAseq数据(level3)和相应的临床信息,用于分析ADAR1与临床诊疗过程中的潜在相关性.通过Kaplan-Meier Plotter平台获得ADAR1的表达对胃癌患者的预后分析预测,结合组织芯片的评分和临床预后资料进行分析、验证.结果:ADAR 1在胃癌组织中异常高表达,差异具有统计学意义(P＜0.0001);其高表达与胃癌的组织学分化程度相关(P=0.044);性别(HR=2.082,95％CI=1.160-3.736,P=0.014)、淋巴结肿大(HR=1.582,95％CI=1.003-2.496,P=0.049)是影响胃癌患者总生存期的独立危险因素;高表达ADAR1的患者总生存期更短,预后差;ADAR1的表达和肿瘤突变负荷(TMB)呈正相关(P=0.002),具有评估胃癌患者免疫治疗价值的潜力.结论:ADAR 1在胃癌中异常高表达,具有较大的判断患者预后与评估免疫治疗价值的潜力,有希望成为一个新型的临床诊疗靶标.

选择小鼠腺苷脱氨酶mRNA做为靶RNA系统，采用计算机辅助设计，人工设计了能特异性定点切割小鼠腺苷脱氨酶mRNA的Ribozyme，命名为ADARb262、ADARb455, ADARb583和ADARb862,它们分别切割靶RNA上不同切点。通过计算机基因库检索，在已知小鼠基因中，无其它基因mRNA含有靶RNA切点两翼碱基序列的同源序列。经人工合成和体外转录得到了Ribozyme分子和靶RNA分子。体外切割实验表明，不同来源和不同切点的Ribozyme均能在相应切点定点切割靶RNA分子。Ribozyme和靶RNA侧翼序列部分影响了Ribozyme的切割活性。该研究可能为Ribozyme用于T淋巴细胞白血病的治疗和具有腺苷脱氨酶缺陷的重症联合免疫缺陷小鼠模型的建立提供新的手段。

RNA特异性腺苷脱氨酶1(ADAR1)是一种作用于双链RNA(dsRNA)使腺苷脱氨基产生肌苷(A-to-I)的酶,其RNA编辑依赖作用和非RNA编辑依赖的蛋白质-蛋白质相互作用在人类疾病中发挥重要作用.ADAR1在实体肿瘤中过表达使肿瘤细胞逃避免疫识别促进肿瘤发生发展,其中干扰素刺激基因(ISG)呈阳性的肿瘤细胞对ADAR1缺失具有独特的易感性.因此,在ISG呈阳性肿瘤细胞中靶向ADAR1成为增强肿瘤免疫疗法或克服肿瘤免疫检查点抑制剂抵抗的新方法.而ADAR1 p150亚型的左手螺旋DNA(Z-DNA)特异性和左手螺旋RNA(Z-RNA)特异性Zα结构域可能成为特异性的作用靶点,在实体肿瘤免疫治疗中发挥作用.

目的 探讨一家系2例遗传性对称性色素异常症患者基因突变情况.方法 收集一家系2例遗传性对称性色素异常症患者的临床资料.采集该家系先证者及其父母、100例健康对照者外周血,提取基因组DNA,采用高通量测序法检测皮肤病相关基因各外显子编码区域序列,应用PCR-Sanger测序验证突变基因,应用GERP++、PyMOL、SPIDEX、SIFT和Polyphen等生物信息软件预测突变基因编码的蛋白结构及致病性.结果 先证者临床表现为双手背及足背对称性褐色色素沉着斑和色素减退斑,先证者父亲临床表现为面部、双侧锁骨、双手背及腕部、双足背及踝部对称性褐色色素沉着斑和色素减退斑,该家系3代以内其他成员均无类似皮损表现.基因测序结果显示,先证者及其父亲RNA特异性腺苷脱氨酶(adenosine deaminase acting on RNA,ADAR)基因第2外显子发生c.716G＞A(p.Arg239Gln)杂合错义突变,导致其编码蛋白的第239位氨基酸由Arg突变为Gln;先证者母亲及100例健康对照者均未发现该突变.生物信息软件预测结果显示,ADAR基因突变后对应蛋白结构发生变化,该位点突变为疑似致病性突变.结合患者临床表现、基因测序及软件分析结果,诊断为遗传性对称性色素异常症.结论 ADAR基因c.716G＞A(p.Arg239Gln)杂合错义突变可能是该家系2例遗传性对称性色素异常症患者的致病原因.

背景与目的:脓毒症相关肝损伤(SRLI)发病机制尚不清楚,细菌内毒素(LPS)对肝脏血管内皮细胞的炎症损害可能是重要环节.前期研究提示,RNA特异性腺苷脱氨酶1(ADAR1)可能通过调控内皮细胞功能相关蛋白Caveolin 1(Cav-1)在参与血管内皮应激中的局部和全身炎症反应.因此,本研究初步探讨ADAR1与Cav-1在SRLI中的作用,以期为SRLI的早期防治寻找新的方法.方法:取ADAR1基因敲除小鼠(ADAR1ECKO)与野生型小鼠(ADAR1flox/flox)各20只,腹腔注射LPS(20mg/kg)诱导脓毒症小鼠模型脓毒症模型,6 h后每组小鼠各取10只,获取肝脏组织,并分离肝窦内皮细胞(LSECs),通过HE染色观察其肝脏病理学改变,用细胞免疫荧光法观察LSECs中Cav-1及其下游蛋白VE-cadherin的表达,两组其余小鼠用于生存率分析;用ADAR1 siRNA转染正常野生型小鼠的LSECs后,通过内皮细胞成管实验观察转染后LSECs的增殖情况、Western blot检测Cav-1下游相关蛋白的表达.结果:生存观察结果显示,注射LPS后,ADAR1ECKO小鼠死亡时间早于ADAR1flox/flox小鼠,存活率低于ADAR1flox/flox小鼠(均P＜0.05);组织病理学观察显示,注射LPS6h后,ADAR1ECKO小鼠的肝损伤比ADAR1flox/flox小鼠更严重;细胞免疫荧光观察显示,注射LPS6h后,ADAR1ECKO小鼠LSECs中Cav-1与VE-cadherin 的表达低于ADAR1flox/flox小鼠.正常野生型小鼠的LSECs转染ADAR1 siRNA后,成管能力明显减弱,Cav-1下游蛋白VE-cadherin的表达下调,但β-Catenin的表达无明显变化.结论:ADAR1的下调或功能缺失会导致SRLI加重,机制可能涉及其调控Cav-1/VE-cadherin通路的活性.因此,激活ADAR1/Cav-1/VE-cadherin通路可能是防治SRLI的有效策略.

目的 对3个中国遗传性对称性色素异常症(DSH)家系进行临床特征分析及致病变异鉴定.方法 收集3个中国DSH患者及其家系成员的临床资料并采集外周血,应用全外显子组测序技术(WES)对3个DSH家系的先证者进行变异筛查,并使用Sanger测序技术进行家系基因型-表型共分离验证,最后通过系列生物信息分析软件对新发现变异的致病性进行预测.结果 3个中国DSH家系的先证者均表现为肢端色素沉着减少斑间杂色素沉着过度斑.WES结果发现3个先证者均携带ADAR基因(NM 001111.5)变异,先证者1携带ADAR基因c.3546T>G(p.Tyr1182?)无义变异,先证者2携带ADAR基因c.2770T>G(p.Tyr924Asp)错义变异,先证者3携带ADAR基因c.3116A>C(p.Lys1039Thr)错义变异.前两个变异均未在gnomAD和HGMD等公共数据库中收录,第三个变异在HGMD数据库中收录,人群频率为0.Sanger测序结果表明这3个家系中先证者的父母均未携带相应变异,提示这3个变异均为新发变异.这3个变异位点在不同物种中高度保守,且均位于双链RNA特异性腺苷脱氨酶蛋白的腺苷脱氨酶催化结构域.根据美国医学遗传学和基因组学学会(ACMG)指南,ADAR基因c.3546T>G无义变异被判定为致病(PVS1+PS2+PM2+PP3+PP4),c.2770T>G、c.3116A>C错义变异被判定为致病(PS2+PM1+PM2+PP3+PP4)以及(PS1+PS2+PM1+PM2+PP3+PP4).结论 ADAR基因的新发变异c.3546T>G、c.2770T>G和c.3116A>C可能分别是这3个中国DSH患者的发病原因,以上结果丰富了ADAR基因的突变谱.