目的:探讨Ras相关结合蛋白23（RAB23）在食管鳞状细胞癌（简称食管鳞癌）细胞侵袭和迁移中的作用和机制。方法:采用实时荧光定量聚合酶链反应检测16例配对食管鳞癌及癌旁正常组织中RAB23 mRNA的表达。比较基因表达综合（GEO）数据库的GSE20347数据集中食管鳞癌和配对癌旁正常组织RAB23 mRNA的表达水平。免疫组织化学检测106例配对食管鳞癌和癌旁正常组织、33例淋巴结阳性与10例淋巴结阴性患者原发灶与淋巴结组织中RAB23蛋白含量。在食管鳞癌KYSE30和KYSE150细胞中瞬时敲降RAB23表达（转染si-RAB23-1和si-RAB23-9）或者稳定敲降RAB23表达（转染sh-RAB23），采用Western blot法验证RAB23敲降效率，采用细胞计数试剂盒8法和裸鼠皮下成瘤实验检测食管鳞癌细胞的增殖能力，采用Transwell实验和裸鼠尾静脉-肺转移实验检测食管鳞癌细胞的侵袭和迁移能力，采用细胞黏附实验检测食管鳞癌细胞的黏附能力，采用转录组测序技术分析RAB23敲降后对细胞转录谱的影响，并通过Western blot检测验证相关信号通路。结果:16例食管鳞癌组织中RAB23 mRNA表达水平为0.009 7±0.008 9，高于癌旁正常组织［0.003 2±0.003 7， P=0.006］。对GEO数据库GSE20347数据集中食管鳞癌和配对癌旁正常组织表达谱的生信分析显示，食管鳞癌组织中RAB23 mRNA表达水平为4.30±0.25，高于癌旁正常组织（4.10±0.17， P=0.037）。106例食管鳞癌组织中，51例RAB23低表达，55例RAB23高表达；而配对癌旁正常组织中，82例RAB23低表达，24例RAB23高表达，食管鳞癌组织中RAB23表达水平高于配对癌旁正常组织（ P＜0.001）。33例淋巴结阳性食管鳞癌组织中，1例RAB23低表达，32例RAB23高表达；10例淋巴结阴性的食管鳞癌组织中，3例RAB23低表达，7例RAB23高表达。淋巴结阳性食管鳞癌组织中RAB23表达水平高于淋巴结阴性食管鳞癌组织（ P=0.024）。33例阳性淋巴结组织中，1例RAB23低表达，32例RAB23高表达，而10例阴性淋巴结组织中均为RAB23低表达。阳性淋巴结组织中RAB23表达水平高于阴性淋巴结组织（ P＜0.001）。瞬时或稳定敲降RAB23后，KYSE30细胞体外和体内的增殖能力无明显变化，KYSE30细胞的细胞侵袭和迁移能力下降，而KYSE150细胞仅侵袭能力下降，迁移能力无明显变化。sh-RAB23组KYSE30细胞黏附细胞的数量为（313.75±89.34）个，少于sh-NC组［（1 030.75±134.29）个， P＜0.001］。sh-RAB23组KYSE150细胞的黏附细胞数为（710.5±31.74）个，也少于sh-NC组［（1 005.75±61.09）个， P＜0.001］。转录组测序分析显示，敲降RAB23后，si-RAB23-1组和si-RAB23-9组KYSE30细胞中黏着斑相关信号通路均被削弱，sh-RAB23组KYSE30和KYSE150细胞中p-FAK和p-paxillin表达水平降低。 结论:RAB23在食管鳞癌组织中高表达，与淋巴结转移有关。敲低RAB23表达后能够削弱黏着斑相关信号通路，进而抑制食管鳞癌细胞的侵袭、迁移和黏附。

目的:评价肝素对脓毒症小鼠急性肺损伤(ALI)时黏着斑激酶(FAK)/Ras同源家族成员A(RhoA)/Rho相关卷曲螺旋形成蛋白激酶(ROCK)信号通路的影响。方法:SPF级健康成年雄性C57BL/6J小鼠30只，6～8周龄，体质量20～23 g，采用随机数字表法分为3组( n＝10)：对照组(C组)、ALI组和肝素组(H组)。采用腹腔注射LPS 15 mg/kg的方法制备脓毒症小鼠ALI模型，C组注射等量生理盐水。H组尾静脉注射肝素钠10 U，30 min后制备模型，C组和ALI组注射等量生理盐水。于注射LPS后24 h时深麻醉下采集眼球静脉血样，随后处死小鼠取肺组织。采用ELISA法测定血清IL-1β、IL-6和TNF-α浓度；HE染色法观察肺组织病理学结果并行肺损伤(LI)评分，确定肺湿质量/干质量(W/D)比值；免疫组化染色法观察血管内皮黏附因子1(VCAM-1)表达；Western blot法检测FAK、磷酸化FAK(p-FAK)、RhoA、结合GTP形式Rho蛋白A(RhoA-GTP)和ROCK表达。 结果:与C组相比，ALI组血清IL-1β、IL-6、TNF-α浓度、肺W/D比值、LI评分和VCAM-1表达水平升高，肺组织p-FAK、RhoA-GTP和ROCK表达上调( P<0.05)；与ALI组相比，H组血清IL-1β、IL-6、TNF-α浓度、肺W/D比值、LI评分和VCAM-1表达水平降低，肺组织p-FAK、RhoA-GTP和ROCK表达下调( P<0.05)。 结论:肝素减轻脓毒症小鼠ALI的机制与抑制FAK/RhoA/ROCK信号通路有关。

目的 基于网络药理学、文献筛选及分子对接探讨宣白承气汤治疗重型COVID-19的主要活性成分、作用靶点和相关通路,明确其潜在作用机制.方法 利用TCMSP、PubChem和Swiss Target Prediction数据库筛选宣白承气汤的活性成分和作用靶点,从GeneCards数据库获取与重型COVID-19发生、发展相关的基因,将两者取交集得到药物治疗的潜在靶标,并利用已发表的宣白承气汤治疗重症肺炎的文献,找出有效检测指标,与各靶标取交集后,找出最有可能起作用的关键靶标.运用Cytoscape软件构建活性成分靶标作用网络,并STRING数据库构建蛋白互做网络,并筛选出核心靶标;运用R软件对作用靶点进行GO功能和KEGG通路富集分析.使用SYBYL软件将主要的活性成分与与SARS-CoV-23CL水解酶和血管紧张素转化酶II(ACE2)进行分子对接.结果 宣白承气汤的亚油酸乙酯、亚麻酸乙酯等46个活性成分可能通过PI3K/Akt通路、HIF1通路、Ras信号通路等140条通路作用于以IL6(白介素6)为核心的108个靶点发挥其治疗作用.分子对接结果显示:杏仁中的丁二酸二异辛酯、大黄中的β-胡萝卜素氧化物和瓜蒌中的亚油酸乙酯与与SARS-CoV-23CL水解酶、ACE3等具有较好的结合性.结论 网络药理学、文献筛选及分子对接均表明宣白承气汤可用于重型COVID-19的治疗.宣白承气汤所含的活性成分可能通过抗炎、抗病毒、调节免疫、抗凝等作用,对重型COVID-19引发的炎症、免疫损伤、凝血异常等具有潜在的预防与治疗作用.

目的 从分子水平探究交泰丸治疗心律失常的作用机制.方法 ①采用中医药整合药理学研究平台(Integrative Pharmacology-based Research Platform of Traditional Chinese Medicine,TCMIP)V2.0,检索并获取黄连和肉桂活性成分、靶标,以及心律失常疾病和证候靶标信息,借助平台构建"中药-证素-疾病-靶标-通路"多维网络,获得药物干预疾病的关键靶标,通过基因本体数据库(Gene Ontology,GO)和京都基因与基因组百科全书库(Kyoto Encyclopaedia of Genes and Genomes,KEGG)进行富集分析,预测交泰丸治疗心律失常的分子机制.②选取雄性SD大鼠32只,随机分为对照组(N)、模型组(M)、交泰丸组(J)、阳性药组(Meto)4组,以尾静脉推注肾上腺素(Epi)制造心律失常模型,利用酶联免疫吸附法(ELISA)观察各组大鼠血浆血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)、儿茶酚抑素(CST)、神经肽Y(NPY)的含量.结果 ①交泰丸共筛选出23个活性成分(黄连14个,肉桂9个),心律失常相关靶标850个.这些活性成分通过调控基因表达的正调控、丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)级联激活、信号识别颗粒(signal recognition particle,SRP)依赖的共翻译蛋白靶向膜、细胞因子介导的信号通路、调节心室心肌细胞动作电位、通过心脏传导调节心率等生物过程,直接或间接参与促红细胞生成素激活肾素-血管紧张素系统(RAS)、加速纤维肉瘤蛋白(rapidly accelerated fibrosarcoma,RAF)激活等信号通路,从而发挥抗心律失常的作用.②模型组大鼠血浆AngⅡ、CST、NPY含量明显高于对照组(P<0.01),交泰丸组AngⅡ、CST、NPY水平与模型组比较明显下降(P<0.05或P<0.01),且交泰丸组疗效优于阳性药组.结论 通过整合药理学策略结合药效验证,揭示了交泰丸多途径抗心律失常作用的分子机制,验证了RAS系统与交感神经活性在心律失常中的重要作用,并明确交泰丸对心律失常有一定的调节作用,疗效确切.

对美国国家生物技术信息中心(National Center for Biotechnology Information,NCBI)-基因表达综合数据库(Gene Expression Omnibus,GEO)中人单核细胞源巨噬细胞的基因组芯片进行生物信息学分析,寻找巨噬细胞极化参与糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)肾纤维化的关键基因,预测潜在的上游miRNA,探索疾病治疗的新靶点.从GEO数据库中采集人单核细胞源巨噬细胞的基因组表达数据,使用在线工具GEO2R下载数据并筛选差异表达基因,通过WebGestalt数据库对差异表达基因进行GO和KEGG分析,通过STRING v11.0数据库构建差异表达基因的蛋白质相互作用(protein-protein interaction,PPI)网络,并应用Cytoscape v3.7.2软件进行可视化分析;采用cytoHubba插件分析PPI网络的关联程度并筛选关键表达基因.研究通过在线工具GEO2R筛选出289个表达上调的差异基因,GO分析发现M2型巨噬细胞上调表达的差异基因多在细胞外基质(extracellular matrix,ECM)形成、细胞通讯调节、抗原加工提呈、免疫反应以及炎症反应等生物学过程中富集;在ECM、细胞膜、内膜系统和溶酶体等细胞及相关组分中富集;在抗原结合、蛋白质活性和分子功能调节等分子功能中富集;KEGG分析发现差异表达基因在瞬时受体电位(transient receptor potential,TRP)通道的炎性介质调节和 Ras 相关蛋白 1(Ras-related protein 1,Rap1)等信号通路中富集.整合素 αM(integrin αM,ITGAM)、CD1A、CD1E、FCGR2B、ITGAE、CD1C、CD1B、SDC1、MRC1、CD209、CR1、CDH1、MYC、FN1、PPARG、FOS、PIK3R1、CAT、P2RY1、CYSLTR1、GNAQ、PLCB1、NMB、LPL和ABCG2等是关键基因.对筛选出的关键基因ITGAM上游的miRNA进行预测,结果表明,hsa-miR-23b-3p、hsa-miR-125a-5p,hsa-miR-761 和 hsa-miR-4319 等可调控 ITGAM 的表达.miR-23b 可能通过靶向作用于巨噬细胞中的ITGAM调控其向M2型巨噬细胞极化,参与DN炎症和纤维化过程的调节.