目的:探讨黏着斑激酶相关非激酶（FRNK）对肝星状细胞（HSCs）活化及迁移功能的影响。方法:2019年3—9月，收集贵州医科大学附属医院肝胆外科9例肝纤维化患者肝组织标本。人体肝组织分为健康对照组与纤维化组。C57BL/6实验小鼠分为野生型（WT）、FRNK基因敲除型（FRNK -/-）两组，以四氯化碳（CCl 4）进行肝纤维化造模，完成后使用腺病毒载体构建FRNK基因过表达型（Ad-FRNK）。通过HE、Masson染色观察肝组织病理改变，Western蛋白印迹法检测磷酸化黏着斑激酶（PY397-FAK）与α平滑肌肌动蛋白（α-SMA）蛋白表达；提取小鼠原代HSCs，细胞划痕实验检测FRNK对HSCs迁移功能的影响，及对Rac、Rho活化的影响。 结果:肝纤维化人体肝组织PY397-FAK蛋白表达量显著高于健康对照组（0.88±0.09比0.73±0.09），FRNK低于健康对照组（0.68±0.09比0.79±0.11）， P值均<0.01。CCl 4造模后，FRNK -/-组小鼠肝纤维化［（153±13）%］较WT组（100%）程度更明显，PY397-FAK与α-SMA蛋白表达量高于WT组（2.50±0.23比0.75±0.09， 1.46±0.20比0.92±0.10）， P值均<0.01。在FRNK -/-组小鼠体内重新导入FRNK基因（100%）后，小鼠肝纤维化程度减轻［（74±6）%］，PY397-FAK与α-SMA蛋白表达量减少（0.68±0.11比1.12±0.19，0.68±0.10比0.85±0.06）， P值均<0.01。体外实验显示，FRNK可抑制HSCs的迁移功能［WT︰FRNK -/-︰Ad-FRNK为（339±49）%︰（580±53）%︰（259%±33）%］，并抑制Rac和Rho蛋白的活化（Rac为0.54±0.07比0.91±0.10比0.77±0.12，Rho为0.45±0.05比0.64±0.06比0.53±0.07）， P值均<0.01。 结论:FRNK可通过抑制HSCs的活化及迁移功能改善肝纤维化，其机制可能与下调PY397-FAK、抑制Rac和Rho的活化有关。

目的:评价肝素对脓毒症小鼠急性肺损伤(ALI)时黏着斑激酶(FAK)/Ras同源家族成员A(RhoA)/Rho相关卷曲螺旋形成蛋白激酶(ROCK)信号通路的影响。方法:SPF级健康成年雄性C57BL/6J小鼠30只，6～8周龄，体质量20～23 g，采用随机数字表法分为3组( n＝10)：对照组(C组)、ALI组和肝素组(H组)。采用腹腔注射LPS 15 mg/kg的方法制备脓毒症小鼠ALI模型，C组注射等量生理盐水。H组尾静脉注射肝素钠10 U，30 min后制备模型，C组和ALI组注射等量生理盐水。于注射LPS后24 h时深麻醉下采集眼球静脉血样，随后处死小鼠取肺组织。采用ELISA法测定血清IL-1β、IL-6和TNF-α浓度；HE染色法观察肺组织病理学结果并行肺损伤(LI)评分，确定肺湿质量/干质量(W/D)比值；免疫组化染色法观察血管内皮黏附因子1(VCAM-1)表达；Western blot法检测FAK、磷酸化FAK(p-FAK)、RhoA、结合GTP形式Rho蛋白A(RhoA-GTP)和ROCK表达。 结果:与C组相比，ALI组血清IL-1β、IL-6、TNF-α浓度、肺W/D比值、LI评分和VCAM-1表达水平升高，肺组织p-FAK、RhoA-GTP和ROCK表达上调( P<0.05)；与ALI组相比，H组血清IL-1β、IL-6、TNF-α浓度、肺W/D比值、LI评分和VCAM-1表达水平降低，肺组织p-FAK、RhoA-GTP和ROCK表达下调( P<0.05)。 结论:肝素减轻脓毒症小鼠ALI的机制与抑制FAK/RhoA/ROCK信号通路有关。

目的 探讨老年急性心肌梗死患者血清黏着斑激酶(FAK)和脂肪酸结合蛋白4(FABP4)水平变化与心肌损伤及心功能的关系.方法 选择2020年1月至2023年4月牡丹江心血管病医院收治的211例急性心肌梗死患者作为疾病组;选择同期在我院行体检的60例健康志愿者为对照组.比较2组血清FAK和FABP4水平,多因素lo-gistic 回归分析老年急性心肌梗死的影响因素,应用ROC曲线评估血清FAK和FABP4对老年急性心肌梗死的预测价值,Pearson相关分析血清FAK和FABP4与心肌损伤和心功能的相关性.结果 疾病组患者血清FAK、FABP4、肌酸激酶同工酶(CK-MB)、肌钙蛋白Ⅰ(cTnⅠ)、肌酸激酶(CK)、左心室收缩末期内径(LVESD)和左心室舒张末期内径(LVEDD)显著高于对照组,左心室射血分数(LVEF)显著低于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05,P＜0.01).血清 FAK 和 FABP4 与 CK-MB、cTnⅠ、CK、LVESD 和 LVEDD 均呈正相关,与 LVEF 呈负相关(P＜0.05).多因素 logistic 回归分析显示,血清 FAK(OR=2.872,95％CI:2.230～3.698,P=0.000)和 FABP4(OR=2.667,95％CI:1.713～4.154,P=0.000)是老年急性心肌梗死发生的影响因素.ROC曲线分析显示,血清FAK诊断的临界值为25.60 μg/L,曲线下面积为0.801(95％CI:0.750～0.852);血清FABP4诊断的临界值为23.22 μg/L,曲线下面积为0.760(95％CI:0.707～0.812);FAK和FABP4联合分析显示,曲线下面积为0.899(95％CI:0.839～0.918).结论 老年急性心肌梗死患者血清FAK和FABP4异常高表达,与心肌损伤及心功能密切相关,单独或联合分析可有效预测急性心肌梗死的发生.

目的 观察蚓激酶对TGF-β1诱导人肾小管上.皮细胞α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)、纤维连接蛋白(fibronectin,FN)、黏着斑激酶(focal adhesion kinase,FAK)和Src家族蛋白酪氨酸激酶表达的影响.方法 将人肾小管上皮细胞按随机数字表法分为正常组,模型组,贝那普利组及蚓激酶低、中、高剂量组.除正常组外,其余各组加入10 μg/ml的TGF-β1溶液进行干预,30 min后,贝那普利组加入盐酸贝那普利10 μmol/L进行干预,蚓激酶低、中、高剂量组分别加入蚓激酶30、60、120 U/ml进行干预.培养24 h后,采用Western blot法和荧光定量PCR检测α-SMA、FN、FAK和Src激酶蛋白及基因表达.结果 与模型组比较,蚓激酶低、中、高剂量组α-SMA[(0.84±0.14)、(0.72±0.08)、(0.69±0.05)比(1.24±0.03)]、FN[(0.59±0.09)、(0.55±0.11)、(0.44±0.08)比(0.83±0.1 8)]、FAK[(0.94±0.04)、(0.79±0.05)、(0.70±0.02)比(1.29±0.07)]、Src激酶[(0.87±0.20)、(0.78±0.15)、(0.71±0.11)比(1.23±0.01)]蛋白表达降低(P＜0.05),α-SMA mRNA[(3.13±0.62)、(2.76±0.14)、(2.15±0.33)比(4.12±0.3 2)]、FN mRNA[(3.08±0.34)、(2.78±0.17)、(2.49±0.11)比(4.34±0.06)]、FAK mRNA[(1.73±0.23)、(1.63±0.36)、(1.57±0.27)比(2.61±0.59)]、Src激酶mRNA[(2.11±0.17)、(1.78±0.25)、(1.71±0.22)比(2.78±0.47)]表达降低(P＜0.05).结论 蚓激酶可通过调节TGF-β1诱导的人肾小管上皮细胞FAK、Src激酶的表达,减少α-SMA、FN生成,从而阻抑肾纤维化的发展.

目的:探讨五味子甲素(deoxyschizandrin)对人胰腺癌PANC-1细胞迁移和侵袭的影响及其作用机制.方法:用不同浓度(6.25、12.5、25和50 μmol/L)的五味子甲素处理胰腺癌PANC-1细胞后,采用CCK-8法检测细胞增殖抑制率,采用划痕愈合实验和Transwell小室法分别检测细胞迁移和侵袭能力的变化.基于五味子甲素的药效团,应用生物信息学软件预测五味子甲素作用的蛋白靶点,并进行通路富集分析.然后采用蛋白质印迹法检测不同浓度(6.25、12.5和25 μmol/L)五味子甲素作用后胰腺癌PANC-1细胞中表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)、Src激酶(Src kinase, SRC)、黏着斑激酶(focal adhesion kinase,FAK)、磷酸化FAK (Y397) (phospho-Y397-FAK,p-Y397 FAK)、桩蛋白(Paxillin)和磷酸化Paxillin (Y181)(phospho-Y181-Paxillin,p-Y181 Paxillin)的蛋白表达水平.结果:五味子甲素以时间和浓度依赖方式抑制胰腺癌PANC-1细胞增殖(P值均＜ 0.05),并明显抑制细胞迁移和侵袭(P值均＜0.05).生物信息学分析发现五味子甲素有113个作用蛋白靶点,这些蛋白靶点明显富集于肿瘤发生相关通路、环磷酸腺苷(cyclic adenosine monophosphate,cAMP)信号通路和黏着斑信号通路等;其中,五味子甲素作用蛋白靶点EGFR和SRC富集于包括黏着斑信号通路在内的多个信号通路.不同浓度的五味子甲素作用后,胰腺癌PANC-1细胞中EGFR、SRC、p-Y397 FAK和p-Y181Paxillin蛋白的表达水平均明显下调(P值均＜0.05),而FAK和Paxillin蛋白表达水平无明显变化(P值均＞ 0.05).结论:五味子甲素通过靶向抑制EGFR-SRC信号通路,减少黏着斑相关蛋白p-Y397 FAK和p-Y181 Paxillin的表达,进而抑制胰腺癌PANC-1细胞的迁移和侵袭.

目的 探究抑制整合素-黏着斑激酶(FAK)信号通路对脑缺血动物模型神经干细胞(NSC)移植后NSC增殖的影响.方法 选择12只健康SD大鼠作为对照组,另将线栓法成功构建脑缺血模型大鼠36只.随机分为脑缺血组、NSC移植组和西仑吉肽组,每组12只.后2组大鼠注射10μl NSC溶液(细胞浓度为1×106个/L),西仑吉肽组还腹腔注射整合素抑制剂西仑吉肽100μg/kg.水迷宫实验分析大鼠神经功能,Western blot检测整合素和FAK蛋白表达,TUNEL染色检测神经细胞凋亡,免疫荧光染色检测NSC增殖.结果 与对照组比较,脑缺血组逃避潜伏期显著升高,而穿越平台次数显著降低(P<0.05);NSC移植组逃避潜伏期显著低于脑缺血组[(34.02±4.02)s vs(48.79±4.94)s,P<0.05],而穿越平台次数显著高于脑缺血组[(4.86±0.54)次vs(2.74±0.42)次,P<0.05];西仑吉肽组逃避潜伏期显著高于NSC移植组,而穿越平台次数显著低于NSC移植组(P<0.05).与对照组比较,脑缺血组大鼠整合素、FAK蛋白表达、凋亡指数和5溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)/神经元核抗原(NeuN)阳性细胞数显著升高(P<0.05);NSC移植组整合素、FAK蛋白表达、BrdU/NeuN阳性细胞数显著高于脑缺血组,凋亡指数显著低于脑缺血组(P<0.05);西仑吉肽组整合素、FAK蛋白表达、BrdU/NeuN阳性细胞数显著低于NSC移植组,凋亡指数显著高于NSC移植组(P<0.05).结论 外源性NSC增殖、分化为神经元的过程中,整合素-FAK信号通路被激活,抑制整合素-FAK信号通路会影响NSC对脑缺血大鼠神经功能恢复的促进作用.