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基于SIRT1/FoxO1信号通路探讨高压氧对脑缺血再灌注损伤大鼠血脑屏障的影响
编辑人员丨3天前
目的:基于沉默信息调节因子1/叉头转录因子O1(SIRT1/FoxO1)信号通路探讨高压氧(HBO)对脑缺血再灌注(CIR)大鼠血脑屏障(BBB)的保护作用。方法:选取雄性Wistar大鼠40只,按照随机数字表法将其分成假手术组(Sham组)、模型组(CIR组)、CIR+HBO组、CIR+HBO+ SIRT1抑制剂(EX527)组,每组10只。采用改良线栓法建立大鼠右侧大脑中动脉栓塞模型,Sham组大鼠不进行结扎和线栓导入,CIR+HBO组和CIR+HBO+EX527组予以HBO干预,CIR+HBO+EX527组在此基础上再予以EX527处理。CIR+HBO组和CIR+HBO+EX527组于再灌注1 h、9 h、21 h、45 h、69 h进入HBO舱,期间行HBO治疗5次。在处死动物前1 h,经尾静脉注射2%伊文思兰(EB),采用比色法、逆转录-聚合酶链(RT-PCR)和Western blot法分别检测再灌注72 h大鼠海马区脑组织EB含量,SIRT1、FoxO1、ZO-1、Occludin、Claudin-5 mRNA及蛋白表达变化。结果:CIR 72 h,CIR组、CIR+HBO组和CIR+HBO+EX527组大鼠海马区脑组织EB含量均较Sham组明显增加( P<0.05),CIR+HBO+XE527组大鼠海马区脑组织EB的含量较CIR+HBO组显著增加( P<0.05)。CIR 72 h,CIR组、CIR+HBO组和CIR+HBO+EX527组大鼠海马区脑组织SIRT1、FoxO1、ZO-1、Occludin、Claudin-5 mRNA表达及其相应蛋白表达较Sham组均显著降低( P<0.05),CIR+HBO+EX527组大鼠海马区脑组织SIRT1、FoxO1、ZO-1、Occludin、Claudin-5 mRNA表达及其相应蛋白表达较CIR+HBO组显著降低( P<0.05)。 结论:HBO可以通过SIRT1/FoxO1通路增加紧密连接蛋白的表达,从而在CIR损伤中对BBB起到保护作用。
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编辑人员丨3天前
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七氟烷对大鼠肾缺血再灌注损伤的影响及其机制
编辑人员丨3天前
目的:探讨七氟烷对大鼠肾缺血再灌注损伤的影响及其作用机制。方法:选取6~8周龄、体质量(250±30)g雄性SD大鼠40只,按数字表法随机分成假手术组(Sham组)、肾缺血再灌注组(IR组)、七氟烷预处理组(Sev组)、七氟烷预处理+沉默信号调节因子1(SIRT1)抑制剂组(EX组)4组,每组10只。肾缺血再灌注损伤模型制备前2天和术前10 min,Sham组、IR组、Sev组大鼠腹腔注射1% 二甲基亚砜(DMSO)溶液(5 mL/kg),EX组腹腔注射含抑制剂EX-527(1 mg/mL)的1% DMSO溶液(5 mL/kg)。Sham组:切除右侧肾脏,暴露左侧肾脏但不夹闭肾蒂;IR组:切除右侧肾脏,制备左侧肾脏缺血再灌注模型;Sev组、EX组:先吸入七氟烷45 min后,再按IR组方法制备缺血再灌注模型。于制备缺血再灌注模型术后3 h,收集各组大鼠肾脏组织与左心室血液,取材后以颈椎脱位法处死大鼠。观察项目:(1)检测各组大鼠左心室血液血清肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)。(2)制备各组大鼠肾脏组织病理切片,光镜下观察肾组织病理变化,对肾小管按Paller评分标准进行评分,评估肾脏损伤情况。(3)采用原位末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP切口末端标记技术(TUNEL)检测各组大鼠肾脏组织细胞凋亡情况。(4)取各组大鼠肾脏组织病理切片,在透射电子显微镜下观察肾脏组织自噬情况。(5)采用蛋白质印迹法(Western blotting)检测各组大鼠肾脏组织SIRT1、叉头盒转录因子O3(FoxO3)蛋白,以及凋亡蛋白(BAX/Bcl-2)、自噬相关蛋白(Beclin1、LC3A/B)的表达水平。结果:(1)Sham组大鼠血清Scr和BUN分别为(50.74±5.91)μmol/L和(10.11±0.80)mmol/L,IR组分别为(90.18±11.22)μmol/L和(53.39±6.29)mmol/L,Sev组分别为(63.70±8.69)μmol/L和(27.68±3.41)mmol/L,EX组分别为(80.18±9.15)μmol/L和(33.20±3.57)mmol/L。与Sham组相比,IR组、Sev组、EX组血清Scr、BUN水平均升高;与IR组相比,Sev组、EX组血清Scr、BUN水平均下降;与Sev组相比,EX组血清Scr、BUN 水平均升高:差异均有统计学意义( P值均<0.05)。(2)Sham组肾小球和肾小管形态结构基本正常;IR组肾小管上皮组织肿胀明显,肾小管细胞排列紊乱,大量细胞核固缩,大量中性粒细胞浸润;Sev组:肾小管上皮细胞轻中度肿胀,少见核固缩坏死,中性粒细胞浸润明显减少;EX组:肾小管上皮组织肿胀明显,细胞核固缩和溶解增多,中性粒细胞浸润较多。Sham组、IR组、Sev组、EX组肾小管Paller评分分别为(0.61±0.15)、(5.05±0.55)、(2.68±0.33)、(4.51±0.49)分。与Sham组比较,IR组、Sev组、EX组Paller评分均升高;与IR组比较,Sev组、EX组Paller评分均下降;与Sev组相比,EX组Paller评分升高:差异均有统计学意义( P值均<0.05)。(3)Sham组、IR组、Sev组、EX组细胞凋亡率分别为8.71%±0.68%、38.15%±2.23%、14.51%±2.02%、32.55%±2.89%。与Sham组比较,IR组、Sev组、EX组细胞凋亡率均升高;与IR组比较,Sev组、EX组细胞凋亡率下降;与Sev组比较,EX组细胞凋亡率升高:差异均有统计学意义( P值均<0.05)。(4)与Sham比较,IR组、Sev组、EX组大鼠肾组织自噬小体数量均增加;与IR组比较,Sev组、EX组自噬小体数量增加且体积增大;与Sev组比较,EX组自噬小体数量明显减少:差异均有统计学意义( P值均<0.05)。(5)与Sham组比较,IR组和EX组大鼠肾脏组织FoxO3、Beclin1、LC3A/B蛋白、BAX/Bcl-2蛋白的相对表达量均升高,SIRT1的相对表达量均降低;Sev组SIRT1、FoxO3、Beclin1、LC3A/B、BAX/Bcl-2蛋白的相对表达量均升高:差异均有统计学意义( P值均<0.05)。与IR组比较,Sev组SIRT1、Beclin1、LC3A/B蛋白的相对表达量均升高,FoxO3、BAX/Bcl-2蛋白的相对表达量均降低;EX组SIRT1蛋白的相对表达量升高,FoxO3、BAX/Bcl-2蛋白的相对表达量均降低:差异均有统计学意义( P值均<0.05)。与Sev组比较,EX组SIRT1、Beclin1、LC3A/B蛋白的相对表达量均降低,FoxO3、BAX/Bcl-2蛋白的相对表达量均升高,差异均有统计学意义( P值均<0.05)。 结论:七氟烷可通过促进自噬,抑制细胞凋亡,减轻大鼠肾缺血再灌注损伤,其机制可能与激活SIRT1/FoxO3信号通路有关。
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编辑人员丨3天前
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SIRT1/FoxO1信号通路在三叶苷减轻大鼠脑缺血再灌注损伤中的作用
编辑人员丨3天前
目的:评价沉默信息调节因子1(SIRT1)/叉头框蛋白O1(FoxO1)信号通路在三叶苷减轻大鼠脑缺血再灌注损伤中的作用。方法:清洁级健康雄性SD大鼠80只,6~8周龄,体质量230~280 g,采用随机数字表法分为4组( n=20):假手术组(S组)、脑缺血再灌注组(CIR组)、三叶苷+脑缺血再灌注组(T组)和三叶苷+脑缺血再灌注+SIRT1/FoxO1信号通路抑制剂EX527组(E组)。采用大脑中动脉栓塞法制备大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤模型。T组和E组大鼠于缺血前3 d时开始灌胃给予三叶苷15 mg/kg,2次/d,连续3 d;E组大鼠每次灌胃前腹腔注射EX527 5 mg/kg。于再灌注24 h时采用改良Longa评分评估神经功能,随后处死大鼠取全脑组织,采用TTC染色确定脑梗死体积,流式细胞术检测海马神经元凋亡率和ROS水平,Western blot法检测SIRT1及乙酰化FOXO1(Ac-FOXO1)表达,ELISA法检测SOD和MDA含量,HE染色后光镜下观察海马CA1区病理学结果。 结果:与S组比较,CIR组Longa评分、脑梗死体积、海马神经元凋亡率、ROS和MDA水平升高,SOD含量降低,SIRT1表达下调,Ac-FOXO1表达上调( P<0.05);与CIR组比较,T组Longa评分、脑梗死体积、海马神经元凋亡率、ROS和MDA水平降低,SOD含量升高,SIRT1表达上调,Ac-FOXO1表达下调( P<0.05);与T组比较,E组Longa评分、脑梗死体积、海马神经元凋亡率、ROS和MDA水平升高,SOD含量降低,SIRT1表达下调,Ac-FOXO1表达上调( P<0.05)。 结论:三叶苷可能通过激活SIRT1/FoxO1信号通路,抑制海马氧化应激反应和神经元凋亡,减轻大鼠脑缺血再灌注损伤。
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编辑人员丨3天前
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白藜芦醇通过上调自噬发挥对糖尿病小鼠足细胞保护作用的机制研究
编辑人员丨3天前
目的:探讨白藜芦醇通过上调1型糖尿病小鼠肾脏自噬水平减轻足细胞损伤的机制。方法:选取健康雄性无特定病原体级昆明小鼠28只,以8只健康昆明小鼠作为正常对照组(NC组),剩余20只小鼠给予链脲佐菌素建立1型糖尿病小鼠模型,将造模成功的18只小鼠随机分为糖尿病组(DM组, n=9)和白藜芦醇干预组(Res组, n=9)。12周末检测24 h尿蛋白、血清肌酐、尿素氮水平,采用实时荧光定量聚合酶链反应、免疫印迹法检测沉默信号调节因子1(SIRT1)、叉头状转录因子O1(FoxO1)、微管相关蛋白1轻链3Ⅱ(LC3Ⅱ)、自噬接头蛋白(P62)、裂孔膜蛋白肾病蛋白(nephrin)及足突蛋白(podocin)的表达水平及磷酸化FoxO1(p-FoxO1)/FoxO1。免疫组织化学法观察足细胞nephrin、podocin的表达,应用HE染色及电镜的方法观察肾小球形态及超微结构的变化。多组间比较采用方差分析,组内比较采用LSD- t法。 结果:与NC组相比,DM组肌酐、尿素氮、24 h尿蛋白升高( t=-39.57、-28.17、-57.31,均 P<0.05),SIRT1、LC3Ⅱ、nephrin及podocin表达减少,P62表达增多(均 P<0.05),p-FoxO1/FoxO1升高(0.71±0.03比0.32±0.01, t=-38.81, P<0.05),光镜及电镜显示肾小球、基底膜及足细胞结构损伤。Res组与DM组相比,肌酐、尿素氮、24 h尿蛋白降低( t=30.89、16.39、49.64,均 P<0.05),SIRT1、LC3Ⅱ、nephrin及podocin表达增高,P62表达减少(均 P<0.05),p-FoxO1/FoxO1降低(0.42±0.01比0.71±0.03, t=27.47, P<0.05),光、电镜显示以上损伤减轻。 结论:白藜芦醇通过激活SIRT1/FoxO1通路提高肾脏自噬水平,对糖尿病小鼠肾脏足细胞起保护作用。
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编辑人员丨3天前
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RORα过表达病毒载体尾静脉注射对多柔比星诱导小鼠心脏毒性的抑制作用及其机制
编辑人员丨3周前
目的 观察维甲酸相关孤核受体α(RORα)过表达病毒载体尾静脉注射对多柔比星(DOX)诱导小鼠心脏毒性(DIC)的影响,并探讨其可能的机制.方法 将80只雄性C57BL/6小鼠随机分为Con组、DIC组、DIC+RORα组、DIC+RORα+EX527组,每组20只.DIC+RORα组和DIC+RORα+EX527组经尾静脉注射过表达RORα基因的腺相关病毒9型(AAV9)载体,DIC组经尾静脉注射AAV9空白对照载体;AAV9载体注射3周后,除Con组外均采用尾静脉注射DOX的方法建立DIC小鼠模型;DIC+RORα+EX527组每次DOX注射后腹腔注射沉默信息调节因子(SIRT1)信号通路特异性阻断剂EX527.各组分组处理后4周,经胸超声心动图检查测算左心室射血分数(LVEF)和左心室缩短分数(LVFS),处死后取眼眶血和心肌组织.采用HE染色观察心肌组织病理情况,ELISA法检测血清肌酸激酶同工酶(CK-MB)、乳酸脱氢酶(LDH)、肌钙蛋白I(cTnI)、白细胞介素1β(IL-1β)、白细胞介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α),TUNEL染色后计算细胞凋亡率,二氢乙锭法检测心肌组织活性氧(ROS)表达,比色法检测心肌组织超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、丙二醛(MDA)表达,免疫荧光染色观察心肌组织巨噬细胞浸润和NF-κB p65表达,Western blotting法检测心肌组织cleaved Caspase-3、RORα、SIRT1蛋白表达并计算Ac-NF-κB p65/NF-κB p65、Ac-Foxo1/Foxo1,实时荧光定量PCR法检测心肌组织RORα、SIRT1 mRNA表达.结果 与Con组比较,DIC组小鼠心肌纤维排列紊乱且断裂明显,心肌细胞空泡化显著;与DIC组、DIC+RORα+EX527组比较,DIC+RORα组小鼠心肌纤维断裂及心肌细胞空泡化均减轻.LVEF、LVFS及心肌组织SOD、GSH-Px:Con组>DIC+RORα组>DIC组、DIC+RORα+EX527组(P均<0.05).血清CK-MB、LDH、cTnI、IL-1β、IL-6、TNF-α及心肌组织细胞凋亡率、cleaved Caspase-3蛋白、ROS、MDA、巨噬细胞浸润、NF-κB p65:Con组
DIC组(P均<0.05).SIRT1 mRNA及蛋白:Con组、DIC+RORα组>DIC组、DIC+RORα+EX527组(P均<0.05).Ac-Foxo1/Foxo1、Ac-NF-κB p65/NF-κB p65:Con组、DIC+RORα组 ...不再出现此类内容
编辑人员丨3周前
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中药通过SIRT1信号通路干预糖尿病肾病基础研究进展
编辑人员丨1个月前
糖尿病肾病(DKD)是终末期肾脏病的主要原因.沉默信息调节因子1(SIRT1)蛋白在糖尿病肾病的发生发展过程中发挥关键作用.中药干预DKD表现出独特优势.本文围绕SIRT1信号通路及主要分子调节机制,梳理中药调控SIRT1在足细胞、氧化应激和炎症反应中作用,发现中药单体及中药复方可通过靶向SIRT1调控PGC-1α信号通路、Nrf2/ARE信号通路、AMPK信号通路、NF-κB p65信号通路及PI3K/AKT/FoxO1信号通路,发挥抑制细胞凋亡、改善线粒体自噬、抑制炎症反应等药理作用,从而干预DKD,可为相关研究提供参考.
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编辑人员丨1个月前
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沉默信息调节因子1/叉头框蛋白O1信号通路调控铁死亡对多囊卵巢综合征大鼠卵巢颗粒细胞的影响实验研究
编辑人员丨1个月前
目的:探讨沉默信息调节因子1(SIRT1)/叉头框蛋白O1(FOXO1)信号通路调控铁死亡对多囊卵巢综合征(PCOS)大鼠卵巢颗粒细胞的影响.方法:将30只雌性SD大鼠分为对照组(皮下注射豆油)和PCOS组(皮下注射脱氢表雄酮).将对照组和PCOS组大鼠分离得到的卵巢颗粒细胞分为对照组、PCOS组,取一半PCOS组卵巢颗粒细胞为过表达SIRT1组(20 μmol/L SIRT1激活剂SRT 2183干预).RT-qPCR及Western blot检测细胞中SIRT1、FOXO1、溶质载体家族7成员11(SLC7A11)、谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)、Bcl-2关联X蛋白(Bax)、半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)mRNA及蛋白表达.Hoechst染色检测细胞活性氧(ROS)及线粒体活性氧(mtROS)水平.ELISA检测细胞中谷胱甘肽(GSH)、丙二醛(MDA)、Fe2+、卵泡刺激素(FSH)、睾酮(T)、黄体生成素(LH)水平.流式细胞术检测细胞凋亡情况.结果:与对照组比较,PCOS组卵巢颗粒细胞中SIRT1、FOXO1、SLC7A11、GPX4、Bcl-2 mRNA 及蛋白表达和 GSH、FSH 水平降低,Bax、Caspase-3 mRNA 及蛋白表达和MDA、ROS、mtROS、Fe2+、T、LH水平升高,卵巢颗粒细胞凋亡率增加(均P<0.05).与PCOS组比较,过表达SIRT1组卵巢颗粒细胞中SIRT1、FOXO1、SLC7A11、GPX4、Bcl-2 mRNA及蛋白表达和GSH、FSH水平升高,Bax、Caspase-3 mRNA及蛋白表达和MDA、ROS、mtROS、Fe2+、T、LH水平降低.卵巢颗粒细胞凋亡率减少(均P<0.05).结论:SIRT1/FOXO1通路在PCOS卵巢颗粒细胞中下调,激活该通路可能通过下调铁死亡抑制PCOS卵巢颗粒细胞凋亡.
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编辑人员丨1个月前
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基于AMPK/SIRT1-FOXO1信号通路探讨哺乳期营养过剩对小鼠肥胖的影响
编辑人员丨1个月前
目的 明确哺乳期营养过剩影响小鼠肥胖过程中,腺苷酸活化蛋白激酶(AMP-activated protein kinase,AMPK)/去乙酰化酶1(sirtuin1,SIRT1)-叉头框蛋白O1(forkhead box protein O1,FOXO1)信号通路蛋白翻译后修饰水平防治肥胖的新靶标及新策略.方法 C57BL/6刚出生雄性小鼠随机分为对照组(control,CON,8只/乳母)和小窝组(small litter control group,SC,5只/乳母),3周断乳后给与标准膳食喂养6周至成年,CON组和SC组小鼠分别被分为两组:CON和高脂对照组(high fat control,HFC),SC和小窝HFC(small litter HFC,SHFC)组.CON和SC组小鼠继续食用标准膳食,HFC和SHFC组小鼠高脂膳食诱导肥胖7周.分期处死小鼠取材,酶法测量血脂,Western blot法检测蛋白的表达,苏木精-伊红染色法进行病理学观察.结果 与CON或HFC相比,各阶段SC或SHFC组的体脂、体重、血清甘油三酯水平均升高(P<0.05),高密度脂蛋白胆固醇水平降低(P<0.05);16周末SHFC组小鼠肝细胞脂肪变性明显高于SC组.与CON或HFC、SC组比较,SC或SHFC组SIRT1、磷酸化AMPK蛋白持续降低(P<0.05),乙酰化FOXO1蛋白持续升高(P<0.05).结论 哺乳期营养过剩可通过AMPK/SIRT1-FOXO1信号通路的表观遗传学机制,持续降低AMPK蛋白的磷酸化,升高FOXO1蛋白的乙酰化,导致脂代谢紊乱,体脂积蓄和肥胖.
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编辑人员丨1个月前
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姜黄素调控SIRT1/FoxO1信号通路防控NAFLD发生发展的作用及机制
编辑人员丨1个月前
目的 探讨姜黄素(curcumin)调控沉默信息调节因子 1(silent mating-type information regulation 2 homolog 1,SIRT1)/叉头盒蛋白O1(forkhead box protein O1,FoxO1)信号通路防控非酒精性脂肪肝(nonalcoholic fatty liver disease,NAFLD)的作用及机制.方法 采用脂肪酸诱导HepG2 细胞 24 h建立NAFLD体外模型,油红O染色后光镜下观察细胞内脂肪变性,透射电镜观察细胞内自噬体形成,比色法检测细胞内总胆固醇(total cholesterol,TC)、甘油三酯(triglyceride,TG)含量,免疫印迹法检测细胞内沉默信息调节因子 1(silent mating type information regulation 2 homolog 1,SIRT1)、乙酰化叉头盒蛋白O1(acetylated forkhead box protein O1,AC-FoxO1)、微管相关蛋白 1 轻链 3(microtubule-associated protein 1 light chain 3,LC3)、选择性自噬接头蛋白 1(sequestosome 1,SQSTM1/P62)、自噬相关蛋白 7(autophagy related protein 7,ATG7)蛋白质表达,免疫荧光观察细胞内SIRT1 和FoxO1 蛋白质共定位.结果 姜黄素可改善细胞内脂肪变性,自噬体增加,显著降低 TC、TG 含量及 AC-FoxO1、P62 蛋白质表达(P<0.01),显著升高 SIRT1、ATG7 蛋白质表达及 LC3-Ⅱ/LC3-I比值(P<0.01).干扰 SIRT1 表达显著影响了姜黄素对细胞的保护作用及相关蛋白质的调控(P<0.05 或P<0.01);姜黄素通过激活SIRT1,增强细胞中FoxO1 核定位.干扰SIRT1 表达,FoxOl大量迁入细胞质区,SIRT1 和FoxOl共定位减少.结论 姜黄素通过激活SIRT1 促进FoxO1 脱乙酰化,诱导自噬,改善肝细胞脂肪变性.
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编辑人员丨1个月前
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白藜芦醇防治骨质疏松症的作用机制研究进展
编辑人员丨2024/7/13
白藜芦醇(Resveratrol,RES)具有多种药理活性,是一种天然植物抗毒素多酚,主要通过Sirt1 蛋白介导FoxO3a蛋白、NF-κB/RANKL信号,Wnt/β-catenin、PI3K/AKT、MAPK信号通路、雌激素受体、AMPK、氧化应激反应影响成骨细胞分化,抑制破骨细胞生成,改善骨关节组织结构及机体骨质流失,改善骨质疏松,保护骨骼健康.白藜芦醇增加了老年人和绝经后人群的骨骼生长,减少骨质流失,未来可能成为治疗骨质疏松的新型潜力药物.该文通过CNKI、中华医学期刊全文数据库、万方数据库、PubMed、Web of Science数据库检索最近10 年关于RES防治OP的文献报道,多方面对RES防治OP的作用机制作一综述,以期为白藜芦醇在未来临床中的应用提供新的思路和方向.
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编辑人员丨2024/7/13
