目的:探讨短链脂肪酸(SCFAs)对小鼠肾损伤后炎症及纤维化的影响及其作用机制。方法:采用双侧肾动脉夹闭25 min诱导缺血再灌注(I/R)肾损伤建立小鼠肾脏纤维化模型后，小鼠随机分为缺血再灌注组(I/R组)、短链脂肪酸组(I/R＋SCFAs组)和短链脂肪酸合并抗CD25单克隆抗体组(I/R＋SCFAs＋anti-CD25组)，并设假手术组(Sham组)，每组6只。I/R＋SCFAs组和I/R＋SCFAs＋anti-CD25组小鼠在术前1周连续饮用SCFAs溶液，且I/R＋SCFAs＋anti-CD25组小鼠在术前2 d和手术当天给予腹腔注射anti-CD25；Sham组小鼠只分离肾动脉不进行夹闭。建模28 d后收集各组小鼠肾组织，进行病理学检测，免疫组织化学检测CD68、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、细胞间黏附分子-1(ICAM-1)、叉头盒转录因子P3(Foxp3)和转录因子维甲酸相关孤儿受体γt(RORγt)的表达，Western印迹检测各组肾组织中Toll样受体4(TLR4)、髓样分化因子88(MyD88)和核转录因子κB p65(NF-κB p65)及α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)等蛋白表达水平。结果:与Sham组相比，I/R组小鼠病理损伤较重，肾小管间质纤维化增多，免疫组织化学检测显示肾组织CD68、TNF-α、ICAM-1表达显著升高(P均<0.05)，Western印迹检测TLR4、MyD88、NF-κB p65、α-SMA蛋白表达水平显著增多(P均<0.05)。与I/R组相比，I/R＋SCFAs组小鼠肾纤维化程度减轻，肾组织的CD68、TNF-α、ICAM-1表达降低，而且TLR4、MyD88、NF-κB p65、α-SMA蛋白表达水平亦降低(P均<0.05)。与I/R＋SCFAs组相比，I/R＋SCFAs＋anti-CD25组病理损伤加重，Foxp3表达减少，而TNF-α、ICAM-1、RORγt表达升高(P均<0.05)，TLR4、MyD88、NF-κB p65、α-SMA蛋白表达水平有所升高。结论:SCFAs可能通过TLR4/MyD88/NF-κB通路抑制炎症因子产生，从而减轻肾脏炎症反应和肾纤维化。

目的:观察重症肌无力（MG）患者白细胞介素（IL）-36的表达，研究IL-36对MG患者调节性T细胞（Tregs）和Th17细胞的调控作用。方法:入组2016年7月至2021年8月新乡市中心医院就诊的MG患者51例（MG组）和健康对照者25名（对照组），采集外周血，分离血浆和外周血单个核细胞（PBMCs），采用酶联免疫吸附试验检测血浆IL-36α、IL-36β、IL-36γ、IL-36RA、IL-35、IL-17水平，流式细胞术检测Tregs和Th17细胞比例，实时定量聚合酶链反应法检测叉头盒蛋白3（FoxP3）和维甲酸相关孤独核受体γt（RORγt）mRNA表达。用重组IL-36β（5 ng/ml）刺激MG患者的PBMCs或纯化的Tregs，分析Tregs和Th17细胞比例、IL-35和IL-17分泌、FoxP3和RORγt mRNA表达、Tregs抑制活性的变化。结果:IL-36α、IL-36γ、IL-36RA水平在对照组和MG组之间的差异均无统计学意义（均 P>0.05）。MG组IL-36β水平高于对照组［（73.43±13.91）pg/ml比（60.91±12.65）pg/ml， t=3.79， P<0.001）。MG组Tregs比例［（4.67±1.33）%比（6.32±1.81）%， t=4.48， P<0.001］、IL-35水平［（50.06±7.93）pg/ml比（65.37±8.90）pg/ml， t=7.59， P<0.001］、FoxP3 mRNA（1.03±0.14比1.57±0.46， t=7.78， P<0.001）低于对照组，而Th17细胞比例［（1.05±0.15）%比（0.94±0.21）%， t=2.61， P=0.011］、IL-17水平［（40.61±13.13）pg/ml比（33.09±11.48）pg/ml， t=2.44， P=0.017］、RORγt mRNA（1.26±0.16比1.03±0.13， t=6.08， P<0.001）高于对照组（均 P<0.05）。上述指标在不同性别之间、早发型和晚发型之间、非胸腺瘤组和胸腺瘤组之间、不同Osserman分型之间的差异均无统计学意义（均 P>0.05），与定量重症肌无力（QMG）量表评分均无明显相关性（均 P>0.05）。重组IL-36β对MG患者PBMCs增殖无影响（ P=0.248），可降低Tregs比例［（3.05±0.66）%比（4.18±1.07）%， t=4.23， P<0.001］、IL-35分泌［（48.12±10.93）pg/ml比（56.96±13.73）pg/ml， t=2.36， P=0.023］和FoxP3 mRNA表达（0.99±0.17比1.18±0.13， t=4.01， P<0.001），但对Th17细胞比例、IL-17分泌和RORγt mRNA表达无影响（均 P>0.05）。重组IL-36β刺激的Tregs免疫抑制活性减弱，表现为细胞增殖升高［（0.83±0.12）×10 5个比（0.69±0.15）×10 5个， t=3.02， P=0.005］和IL-35分泌降低［（28.71±10.08）pg/ml比（37.12±10.47）pg/ml， t=2.39， P=0.023］。 结论:MG患者中升高表达的IL-36β可能主要通过抑制Tregs功能调控Tregs/Th17细胞平衡。

目的:观察肝硬化合并自发性细菌性腹膜炎（SBP）患者外周血和腹水中CD100水平，并在体外检测CD100对腹水中CD4 +和CD8 +T淋巴细胞活性的影响。 方法:入组肝硬化患者77例（肝硬化合并单纯腹水患者49例、肝硬化合并SBP患者28例），采集外周血和腹水，入组22例对照者采集外周血。酶联免疫吸附试验检测外周血和腹水中可溶型CD100（sCD100），流式细胞术检测CD4 +和CD8 +T淋巴细胞表面膜结合型CD100（mCD100）。分选腹水中CD4 +和CD8 +T淋巴细胞，CD100刺激后检测CD4 +T淋巴细胞增殖、关键转录因子mRNA和分泌细胞因子变化，检测CD8 +T淋巴细胞增殖、重要毒性分子mRNA和分泌细胞因子变化，利用直接接触和间接接触培养系统检测CD8 +T细胞的杀伤活性。符合正态分布的数据使用单因素方差分析、Student t检验或配对 t检验进行比较。不符合正态分布的数据使用Krusal-Willis检验或Mann-Whitney检验进行比较。 结果:血浆sCD100水平在肝硬化合并单纯腹水患者（1 415.0±434.1）pg/ml、肝硬化合并SBP患者（1 465.0±386.8）pg/ml和对照者（1 355.0±428.0）pg/ml之间的差异无统计学意义（ P = 0.655）。肝硬化合并SBP患者腹水sCD100水平低于合并单纯腹水患者[（2 409.0±743.0）pg/ml比（2 825.0±664.2）pg/ml， P = 0.014]。外周血CD4 +和CD8 +T淋巴细胞中mCD100水平在3组间的差异无统计学意义（ P > 0.05）。肝硬化合并SBP患者腹水CD4 +和CD8 +T淋巴细胞中mCD100水平高于合并单纯腹水患者（ P < 0.05）。CD100刺激对肝硬化合并SBP患者腹水中CD4 +和CD8 +T淋巴细胞的增殖无明显影响（ P > 0.05），对效应性CD4 +T淋巴细胞中转录因子（T-bet、维甲酸相关孤独核受体γt、芳香烃受体）表达和细胞因子（干扰素-γ、白细胞介素-17、白细胞介素-22）分泌均无显著影响（ P > 0.05）。CD100刺激可增加肝硬化合并SBP患者腹水CD8 +T淋巴细胞穿孔素、颗粒酶B、颗粒溶素mRNA相对表达量及其分泌干扰素-γ和肿瘤坏死因子-α的水平（ P < 0.05），亦可增加CD8 +T淋巴细胞的杀伤活性。 结论:CD100的活性形式是sCD100而非mCD100，肝硬化合并SBP患者腹水中存在sCD100和mCD100表达失衡，sCD100可增强肝硬化合并SBP患者腹水CD8 +T淋巴细胞的功能，是潜在治疗靶点之一。

目的:探讨胸水中脂多糖(LPS)、白细胞介素35(IL-35)、维甲酸相关孤儿受体α(RORα)在结核性胸腔积液中的表达变化及临床意义。方法:采用回顾性研究方法，选择2017年1月至2020年1月襄阳市中心医院收治的79例结核性胸膜炎患者为结核组，66例恶性胸膜炎患者为恶性组。比较2组胸水LPS、IL-35、RORα水平，采用spearman相关分析胸水LPS、IL-35、RORα水平与结核性胸膜炎的相关性，采用多因素logistic回归分析结核性胸膜炎的影响因素，采用受试者工作特征曲线分析胸水LPS、IL-35、RORα对结核性胸膜炎与恶性胸膜炎的鉴别诊断价值。结果:结核组胸水LPS、IL-35、RORα水平显著高于恶性组( t值分别为2.691、2.908、6.017， P值均<0.05)；胸水LPS、IL-35、RORα水平与结核性胸膜炎均呈正相关( r值分别0.375、0.583、0.604， P值均<0.05)；胸水LPS、IL-35、RORα水平升高是结核性胸膜炎的危险因素( P值均<0.05)；胸水LPS对结核性胸膜炎与恶性胸膜炎的准确性明显高于胸水RORα( P<0.05)；胸水IL-35对结核性胸膜炎与恶性胸膜炎的准确性明显高于胸水LPS( P<0.05)；胸水LPS、IL-35、RORα联合检测对结核性胸膜炎与恶性胸膜炎的准确性明显高于各项指标单独检测( P<0.05)。 结论:胸水LPS、IL-35、RORα在结核性胸膜炎患者中呈高水平，胸水LPS、IL-35、RORα联合检测在结核性胸膜炎与恶性胸膜炎的鉴别诊断中价值较高，有望在临床推广。

目的 探讨白细胞介素17A(IL-17A)在食管腺癌中的表达情况及其通过核转录因子κB(NF-κB)信号通路对环氧合酶-2(COX-2)的调控作用及机制.方法 收集10例食管腺癌组织、癌旁组织和血清,同时收集10例做胃镜检查的健康体检者的食管上皮组织和血清,免疫组化法检测组织中IL-17A和COX-2蛋白的表达,real time-PCR法检测癌组织和癌旁组织中IL-17A mRNA和Th17细胞的特异性转录因子维甲酸相关孤儿核受体c(RORc)mRNA的表达,ELISA法检测食管腺癌患者和健康对照者血清中IL-17A的含量.选取对数生长期的人食管腺癌OE19细胞,分为对照组、IL-17A(100 ng/mL)组和IL-17A(100 ng/mL)+PDTC(100 μmol/L,NF-κB信号通路抑制剂吡咯烷二硫代甲酸铵)组,Western blot法检测OE19细胞中p50、p65、p-IKB-α和COX-2蛋白的表达水平.结果 食管腺癌组织中IL-17A阳性染色细胞数高于癌旁组织;相较于癌旁组织,食管腺癌组织中IL-17A和RORc mRNA水平增多(P＜0.05).与健康对照者相比,食管腺癌患者血清中IL-17A的含量明显升高(P＜0.05).与正常食管上皮组织比较,食管腺癌组织中 COX-2蛋白阳性染色面积更大更深.与对照组相比,IL-17A组OE19细胞中p-IκB-α和COX-2蛋白的表达量明显增加(P＜0.05);与IL-17A组相比较,IL-17A+PDTC组细胞中p-IκB-α和COX-2蛋白的表达量明显降低(P＜0.05).结论 IL-17A表达在食管腺癌患者组织和血清中均增加.在食管腺癌OE19细胞中,IL-17A可能通过激活NF-κB信号通路上调COX-2的表达量.

目的 观察维甲酸相关孤核受体α(RORα)过表达病毒载体尾静脉注射对多柔比星(DOX)诱导小鼠心脏毒性(DIC)的影响,并探讨其可能的机制.方法 将80只雄性C57BL/6小鼠随机分为Con组、DIC组、DIC+RORα组、DIC+RORα+EX527组,每组20只.DIC+RORα组和DIC+RORα+EX527组经尾静脉注射过表达RORα基因的腺相关病毒9型(AAV9)载体,DIC组经尾静脉注射AAV9空白对照载体;AAV9载体注射3周后,除Con组外均采用尾静脉注射DOX的方法建立DIC小鼠模型;DIC+RORα+EX527组每次DOX注射后腹腔注射沉默信息调节因子(SIRT1)信号通路特异性阻断剂EX527.各组分组处理后4周,经胸超声心动图检查测算左心室射血分数(LVEF)和左心室缩短分数(LVFS),处死后取眼眶血和心肌组织.采用HE染色观察心肌组织病理情况,ELISA法检测血清肌酸激酶同工酶(CK-MB)、乳酸脱氢酶(LDH)、肌钙蛋白I(cTnI)、白细胞介素1β(IL-1β)、白细胞介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α),TUNEL染色后计算细胞凋亡率,二氢乙锭法检测心肌组织活性氧(ROS)表达,比色法检测心肌组织超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、丙二醛(MDA)表达,免疫荧光染色观察心肌组织巨噬细胞浸润和NF-κB p65表达,Western blotting法检测心肌组织cleaved Caspase-3、RORα、SIRT1蛋白表达并计算Ac-NF-κB p65/NF-κB p65、Ac-Foxo1/Foxo1,实时荧光定量PCR法检测心肌组织RORα、SIRT1 mRNA表达.结果 与Con组比较,DIC组小鼠心肌纤维排列紊乱且断裂明显,心肌细胞空泡化显著;与DIC组、DIC+RORα+EX527组比较,DIC+RORα组小鼠心肌纤维断裂及心肌细胞空泡化均减轻.LVEF、LVFS及心肌组织SOD、GSH-Px:Con组>DIC+RORα组>DIC组、DIC+RORα+EX527组(P均<0.05).血清CK-MB、LDH、cTnI、IL-1β、IL-6、TNF-α及心肌组织细胞凋亡率、cleaved Caspase-3蛋白、ROS、MDA、巨噬细胞浸润、NF-κB p65:Con组DIC组(P均<0.05).SIRT1 mRNA及蛋白:Con组、DIC+RORα组>DIC组、DIC+RORα+EX527组(P均<0.05).Ac-Foxo1/Foxo1、Ac-NF-κB p65/NF-κB p65:Con组、DIC+RORα组

目的 基于网络药理学及实验验证确定淫羊藿苷(icariin,ICA)干预强直性脊柱炎(ankylosing spondylitis,AS)的潜在作用靶点.方法 应用网络药理学方法和分子对接预测ICA治疗AS的可能靶点和途径.招募 15 名活动期AS患者和 15 名性别、年龄匹配的健康志愿者,提取外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC)进行体外实验,检测经不同浓度ICA干预后蛋白酪氨酸激酶 2/信号转导与转录激活子3(janus kinase 2/signal transducer and activator of transcription 3,JAK2/STAT3)信号通路相关分子的表达.结果 转录因子 p65(transcription factor p65,RELA)、一氧化氮合成酶(nitric oxide synthase,NOS)2、丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated Protein Kinase,MAPK)14、MAPK1、胰岛素样生长因子(insulin-like growth factor,IGF)1、热休克70 kDa蛋白(heat shock 70 kDa protein,HSPA)1A、热休克90 kDa蛋白α(HSP90A)A1、JAK2 和蛋白激酶Cβ(protein kinase C beta,PRKCB)可能是ICA调控AS的潜在作用靶点.体外实验结果表明,活动期AS患者PBMC中JAK2 和STAT3 的磷酸化水平明显高于对照组(P<0.05),经ICA体外干预后AS患者PBMC中JAK2 和STAT3 磷酸化水平显著降低(P<0.05).特异性转录因子维甲酸相关孤儿核受体(retinoic acid related orphan receptor,ROR)γt蛋白和其编码基因RORc在活动期AS患者中的表达显著高于对照组(P<0.05),ICA可下调RORγt蛋白和RORc mRNA的表达(P<0.05).结论 ICA可能通过RELA、NOS2、MAPK14、MAPK1、IGF1、HSPA1A、HSP90AA1、JAK2 等关键靶点和JAK2/STAT3 信号通路发挥抗AS的作用.

[目的]探讨滋金补水膏对慢性阻塞性肺疾病(COPD)模型大鼠的治疗作用及机制.[方法]将96只大鼠随机分为正常组,模型组,滋金补水膏低、中、高剂量组,盐酸氨溴索组、滋金补水膏高剂量+pcDNA组,滋金补水膏高剂量+pcDNA-人浆细胞瘤转化迁移基因1(PVT1)组,每组12只.除正常组外,其他各组大鼠采用气道滴注脂多糖(LPS)联合烟雾暴露法构建COPD模型.建模成功后,进行给药干预.给药结束后,采用酶联免疫吸附分析(ELISA)检测大鼠血清中白细胞介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平;流式细胞术检测大鼠外周血中辅助性T细胞17/调节性T细胞(Th17/Treg)水平,苏木素-伊红(HE)染色法观察肺组织病理变化,实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)法检测血清和肺组织中长链非编码RNA(lncRNA)PVT1、miR-30b-5p表达,Western Blot法检测肺组织中维甲酸相关孤核受体γt(RORγt)、叉头框蛋白P3(Foxp3)蛋白表达,双荧光素酶报告基因实验验证lncRNA PVT1与miR-30b-5p的关系.[结果]与正常组比较,模型组肺泡间隔变大,支气管周围有大量炎症细胞浸润,Treg细胞比例、miR-30b-5p表达水平、Foxp3蛋白表达水平降低,IL-6、TNF-α水平,Th17细胞比例、Th17/Treg比值,lncRNA PVT1表达水平,RORγt蛋白表达水平升高(均P<0.05);与模型组比较,滋金补水膏低、中、高剂量组及盐酸氨溴索组大鼠肺组织病理损伤减轻、Treg细胞比例、miR-30b-5p表达水平、Foxp3蛋白表达水平升高,IL-6、TNF-α水平,Th17细胞比例,Th17/Treg比值,lncRNA PVT1表达水平,RORγt蛋白表达水平降低(均P<0.05).lncRNA PVT1靶向调控miR-30b-5p表达.[结论]滋金补水膏可能通过调节lncRNA PVT1/miR-30b-5p轴促进Th17/Treg细胞平衡来抑制COPD大鼠炎症反应.

目的 研究益气解毒复方对实验性自身免疫性重症肌无力(Experimental autoimmune myasthenia gravis,EAMG)大鼠胸腺中自身免疫调节因子(Aire)及转录因子维甲酸相关核孤儿受体(ROR-γt)/叉头翼状螺旋转录因子3(Foxp3)相关炎症因子表达的影响.方法 通过免疫诱导注射鼠源性AchR-α亚基97-116肽段复制EAMG模型,分为正常组、模型组、阳性对照组(强的松)及益气解毒复方高、中、低剂量组,每组10只.观察大鼠行为学及Lennon评分,检测血清转化生长因子-β1(TGF-β1)、白细胞介素-6(IL-6)水平,Western blot检测EAMG大鼠胸腺组织中Aire和Foxp3的表达,RT-PCR检测各组大鼠胸腺组织中RORγt的表达情况.结果 与治疗前相比,各药物组Lennon分级评分显著降低;与强的松组相比,益气解毒复方各剂量组Lennon评分无明显差异(P>0.05).RT-PCR结果,模型组胸腺内RORγt mRNA相对表达量明显高于正常组(P<0.05),各药物组胸腺中RORγt mRNA相对表达量明显低于模型组(P<0.05).Western blot结果,与正常组比较,模型组Aire和Foxp3蛋白的表达量均显著降低(P<0.05);与模型组比较,各药物组大鼠胸腺中Aire和Foxp3蛋白的表达量均显著升高(P<0.01).ELISA结果,模型组大鼠血清IL-6含量明显高于正常组(P<0.01),而TGF-β1含量明显低于正常组(P<0.01);给药后,各药物组IL-6含量明显降低,TGF-β1含量明显升高(P<0.01).结论 益气解毒复方能改善EAMG大鼠肌无力症状,其作用机制可能通过上调Aire蛋白表达,调节免疫炎症反应,影响Th17/Treg分化,从而调控ROR-γt/Foxp3免疫平衡发挥调节自身免疫反应的作用,可能是其治疗MG的作用机制之一.

目的 探讨小鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)模型中,外源性和内源性红细胞膜相关蛋白(ERMAP)通过白细胞介素6/信号转录及转录激活因子3(IL-6/STAT3)/维甲酸相关孤核受体γt/(ROR-γt)信号通路对辅助性T细胞17(Th17)细胞分化的影响.方法 流式细胞术验证不同浓度ERMAP-Ig融合蛋白功能;琼脂糖凝胶电泳鉴定ERMAP基因敲除小鼠.流式细胞术检测ERMAP-Ig融合蛋白在体外对Th17细胞分化影响.40只6周龄普通C57BL/6小鼠随机分为2组建立EAE模型:对照(control)-Ig和ERMAP-Ig组,每组20只;记录临床评分;流式细胞术检测EAE小鼠体内Th17细胞分化情况.40只6周龄已鉴定的野生型和ERMAP基因敲除小鼠分为2组建立EAE模型:ERMAP+/+和ERMAP-/-组,每组20只.记录临床评分;脊髓HE和固蓝(LFB)染色并进行组织学半定量评分.流式细胞术检测IL-17A+CD4+T细胞百分比;Western blotting检测IL-6、白细胞介素17(IL-17)、STAT3、磷酸化 STAT3(p-STAT3)、ROR-γt 蛋白水平表达;Real-time PCR 检测 IL-17、肿瘤坏死因子 a(TNF-a)、IL-6、STAT3和ROR-γt的mRNA表达;ELISA检测细胞水平IL-17和TNF-a的表达.结果 1.外源性ERMAP-Ig融合蛋白抑制体内外Th17细胞分化且减轻小鼠EAE症状.2.与对照组相比,ERMAP-/-组EAE小鼠炎性浸润和脱髓鞘症状加重,Th17分泌IL-17A增加.3.内源性ERMAP基因敲除后,IL-17、TNF-α、IL-6、STAT3及ROR-γt表达均增加.差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 ERMAP可能通过IL-6/STAT3/ROR-γt信号通路调控Thl7细胞分化,参与小鼠EAE发生发展.