目的 分析乙型肝炎病毒阳性(HBV+)肝细胞癌患者肝组织长链非编码RNA(long noncoding RNA,lncRNA)和信使RNA(messenger,mRNA)的共表达网络,探讨关键lncRNA的作用.方法 下载GEO(GSE54238) lncRNA/mRNA表达谱芯片数据,通过生物信息数据分析方法获得不同临床进展阶段的肝细胞癌患者与正常人均具有显著差异的肝组织lncRNA、mRNA表达谱,并构建被DNA元素百科全书数据库(Encyclopedia of DNA Elements,ENCODE)收录的差异lncRNA-mRNA共表达网络.继而分析共表达网络中的mRNA参与的GO、KEGG;并分析与核心lncRNA高度相关的mRNA与患者生存曲线的相关性.结果 与5个ENCODE收录的差异lncRNA具有共表达关系的mRNA共有81个(相关系数＞0.90).lncRNA-mRNA共表达网络中的mRNA主要参与的GO通路有氧化还原、呼吸电子链传递和脂肪酸代谢过程;KEGG信号通路主要有脂肪酸降解、过氧化物酶体增殖物激活受体和p-丙氨酸代谢.与核心LINC01018(又名SRHC)、EHHADH-AS1和F11-AS1高度相关的mRNA SLC2A2、PCK2、EHHADH、F11、FM04和NR1 I3与患者生存曲线具有极显著相关性(P＜0.01).结论 LINC01018、EHHADH-AS1、F11-AS1等lncRNA居于LncRNA-mRNA共表达网络的核心位置,在HBV+肝细胞癌发生、发展中具有关键作用,有望成为HBV+肝细胞癌新的诊断和预后指标.

目的 探讨长链非编码RNA(LnCRNA)溶质载体有机阴离子转运蛋白家族成员4A1反义RNA1(SLCO4A1-AS1)调控miR-876-3p对宫颈癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响.方法 qRT-聚合酶链反应(PCR)检测正常宫颈细胞株Ect1/E6E7和4种宫颈癌细胞株(SiHa、HeLa、C33a、Caski)中miR-876-3p和SLCO4A1-AS1的表达水平.以HeLa细胞为研究对象,分别构建沉默SLCO4A1-AS1或过表达miR-876-3p的HeLa细胞株,四甲基偶氮唑蓝(MTT)检测细胞增殖活力,Transwell实验检测细胞的迁移和侵袭能力,Western印迹检测增殖相关蛋白和迁移侵袭相关蛋白的表达.双荧光素酶报告基因实验和qRT-PCR验证SLCO4A1-AS1和miR-876-3p的靶向关系.结果 与NC组和si-con组比较,si-SLCO4A1-AS1组HeLa细胞SL-CO4A1-AS1的表达水平显著下降(P<0.05),表明沉默SLCO4A1-AS1的宫颈癌细胞株构建成功.与NC组和si-con组比较,si-SLCO4A1-AS1组HeLa细胞p21蛋白表达水平显著升高,细胞周期素(Cyclin)D1蛋白表达水平显著降低,细胞增殖活力显著降低(均P<0.05).与NC组和si-con组比较,si-SLCO4A1-AS1组HeLa细胞MMP-2和MMP-9蛋白的表达均显著降低,迁移和侵袭细胞数目均显著较少(P<0.05).生物信息学分析发现,SLCO4A1-AS1和miR-876-3p存在部分连续特异性互补的核苷酸序列.miR-876-3p组SLCO4A1-AS1-WT水平显著低于miR-con组(P<0.001).si-con组HeLa细胞miR-876-3p的表达水平(1.00±0.09)显著低于si-SLCO4A1-AS1组(4.36±0.44,P<0.05);pcDNA组HeLa细胞miR-876-3p的表达水平(0.96±0.08)显著高于pcDNA-SLC04A1-AS1组(0.53±0.05,P<0.05).与NC组和miR-con组比较,miR-876-3p组HeLa细胞miR-876-3p的表达水平显著升高(P<0.05),表明过表达miR-876-3p的宫颈癌细胞株构建成功.与NC组和miR-con组比较,miR-876-3p组HeLa细胞p21蛋白的表达水平显著升高,CyclinD1、MMP-9、MMP-2蛋白的表达水平显著下降,细胞增殖活力显著降低,迁移和侵袭数目显著减少(均P<0.05).与si-con组比较,si-SLCO4A1-AS1组HeLa细胞miR-876-3p和p21表达显著升高,Cy-clinD1、MMP-9、MMP-2蛋白表达水平显著下降,细胞增殖活力显著降低,迁移和侵袭数目显著减少(均P<0.05);与si-SL-CO4A1-AS1+anti-miR-con组比较,si-SLCO4A1-AS1+anti-miR-876-3p组HeLa细胞miR-876-3p和p21表达显著降低,CyclinD1、MMP-9、MMP-2蛋白表达水平显著升高,细胞增殖活力显著升高,迁移和侵袭数目显著增加(P<0.05).结论 沉默SLCO4A1-AS1通过靶向上调miR-876-3p抑制宫颈癌细胞的增殖、迁移和侵袭.

目的:探究依托咪酯对宫颈癌HeLa细胞增殖、迁移、侵袭及糖酵解的影响和可能机制.方法:体外培养HeLa细胞,经不同剂量(0、0.2、0.4、0.8μg·ml-1)依托咪酯干预后,细胞计数试剂盒-8(CCK-8)实验、克隆形成实验、Transwell实验分别测定细胞增殖抑制率、克隆形成数、迁移细胞数和侵袭细胞数,试剂盒测定葡萄糖消耗量和乳酸产生量,蛋白质印迹实验测定M2型丙酮酸激酶(PKM2)、己糖激酶2(HK2)蛋白表达量,实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)法测定细胞中SLC04A1-AS1表达量.同时以正常宫颈细胞株Ect1/E6E7为对照,RT-qPCR法测定宫颈癌HeLa细胞中SLC04A1-AS1表达量.转染SLC04A1-AS1小干扰RNA至HeLa细胞或用0.8 μg·ml-1依托咪酯干预转染SLC04A1-AS1过表达载体的HeLa细胞后,上述相同方法测定细胞增殖抑制率、克隆形成数、迁移细胞数和侵袭细胞数、葡萄糖消耗量、乳酸产生量及PKM2、HK2蛋白表达量.结果:依托咪酯增加HeLa细胞增殖抑制率,降低细胞克隆形成数、迁移细胞数和侵袭细胞数、葡萄糖消耗量、乳酸产生量及PKM2、HK2蛋白表达量,同时降低细胞中SLC04A1-AS1表达量.宫颈癌HeLa细胞中SLC04A1-AS1表达量较Ect1/E6E7细胞升高.干扰SLC04A1-AS1增加HeLa细胞增殖抑制率,降低细胞克隆形成数、迁移细胞数和侵袭细胞数、葡萄糖消耗量、乳酸产生量及PKM2、HK2蛋白表达量.上调SLC04A1-AS1逆转依托咪酯对HeLa细胞增殖、迁移、侵袭及糖酵解的影响.结论:依托咪酯可抑制宫颈癌HeLa细胞增殖、迁移、侵袭及糖酵解,其作用机制可能与下调细胞中SLC04A1-AS1表达有关.