目的 粉防己碱(Tet)对白细胞介素 1β(IL-1β)诱导原代人关节软骨细胞损伤的影响.方法 将人关节软骨细胞分为对照组、IL-1β组、低氧诱导因子-1α(HIF-1α)抑制剂[二甲氧基雌二醇(2-ME2)]组、Tet低、中、高浓度组,每组设置 6 个重复.MTT法检测细胞增殖;流式细胞仪检测细胞凋亡;ELISA检测细胞中炎性相关因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、基质金属蛋白酶 3(MMP-3)、诱导性一氧化氮合酶(iNOS)、环氧合酶-2(COX-2)的水平以及抗氧化因子超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)的活性;Western blot检测细胞中HIF-1α、VEGF蛋白的表达.结果 与对照组相比,IL-1β 组细胞的凋亡率、TNF-α、MMP-3、iNOS、COX-2 的水平以及HIF-1α、VEGF蛋白表达均升高,细胞存活率、SOD和GPx活性均降低,差异有统计学意义(P＜0.05);与IL-1β组相比,2-ME2 组和Tet低、中、高浓度组细胞的凋亡率、TNF-α、MMP-3、iNOS、COX-2 的水平以及HIF-1α、VEGF蛋白表达均降低,细胞存活率、SOD和GPx活性均升高,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 粉防己碱减轻IL-1β诱导的人关节软骨细胞损伤.

目的 探讨氧合酶家族分子(TET)在叶酸缺乏条件下对人神经母细胞瘤细胞系SH-SY5Y、IMR 32细胞的增殖能力及淀粉样前体蛋白(APP)基因、早老素1(PS1)基因以及β位淀粉样前体裂解酶-1(BACE1)基因表达的影响及机制. 方法 体外培养SH SY5Y、IMR-32细胞,分为叶酸缺乏组、低剂量组、正常对照组,采用噻唑蓝(MTT)法观察细胞增殖、实时荧光定量PCR(RTPCR)检测细胞中APP、PS1、BACE1、TETs、甲基转移酶(DNMTs)基因mRNA的表达;构建TET1低表达稳转细胞株,采用荧光倒置显微镜观察荧光蛋白,MTT法观察细胞增殖,RT PCR检测细胞中TET1、APP、PS1、BACE1的转录水平. 结果 (1)在叶酸缺乏组及低剂量组,培养120 h和144 h后SH-SY5Y、IMR 32细胞增殖能力明显降低(均P＜0.001);SH-SY5Y细胞中APP、PS1、BACE1、DNMT1、DNMT3a、DNMT3b、TET1、TET2、TET3的mRNA水平升高(F=80.315、35.386、101.979、786.407、80.331、131.545、28.000、9.165、102.167,均P＜0.05),IMR-32细胞中APP、PS1、BACE1、DNMT1、DNMT3b、TET1、TET2、TET3的mRNA水平升高(F=12.283、93.669、40.815、157.234、24.835、147.594、54.794、73.068,均P＜0.05).(2)构建TET1低表达稳转细胞株,低表达组(SH SY5Y shTET1)细胞内TET1的相对表达量分别为0.25±0.02,低于阴性对照组1.00±0.09(P=0.007);低表达组(IMR-32-shTET1)细胞内TET1的相对表达量分别为0.28±0.07,低于阴性对照组1.00±0.01(P=0.003).(3)相较于阴性对照组,低表达组(SH-SY5Y-shTET1、IMR-32-shTET1)的增殖能力均增加(均P＜0.01);且细胞内APP、BACE1的mRNA水平降低(P＜0.01或P＜o.05). 结论 在人神经母细胞瘤细胞系SH-SY5Y、IMR 32中,叶酸缺乏上调TETs的表达,通过TET蛋白去甲基化途径增加细胞中APP、BACE1表达,并抑制细胞生长.

神经系统的正常发育是多种因素相互协调作用的结果,一旦特定因素失衡将引起相关疾病的发生.近年来不断有研究发现,DNA去甲基化过程的一类中间产物5-羟甲基胞嘧啶(5-hydroxymethylcytosine,5hmC)作为一种新的表观遗传标记,在神经系统中高水平分布,并参与认知、记忆等重要的神经功能.5hmC的形成由氧合酶家族分子(ten-eleven translocation protein,TET)催化,在多种神经系统相关疾病中,5hmC水平和TETs分子的表达都发生改变,提示TET-5hmC表观遗传机制在复杂的神经系统发生发展过程中发挥了重要的调控作用.此外,作为基因表达调控的DNA标记物,5hmC的基因定位与基因表达水平的关系也是重要的研究方向.本文就近年来5hmC和TET家族蛋白分子在神经系统发育和相关疾病方面的重要研究发现进行了综述总结,希望为相关领域研究人员深入开展研究提供重要的思路,并为相关疾病设计治疗策略提供理论支持.

目的 探讨5-羟甲基胞嘧啶(5-hydroxymethylcytosine,5-hmC)和TET家族氧合酶(teneleven translocation protein,TET1/2/3)在肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)中的表达水平和临床意义.方法 采用免疫组化方法检测130例HCC组织中5-hmC的表达水平,应用Kaplan-Meier检验进行生存分析.5-hmC可以被TET1/2/3转化5-甲基胞嘧啶(5-methylcytosine,5-mC)产生,应用免疫组织化学和RT-PCR的方法分析TET1/2/3的表达变化.结果 5-hmC在HCC组织中表达水平特异性的降低,同时伴有TET1表达水平的降低,TET2和TET3的表达水平无变化.5-hmC的表达水平与患者的病理学分级具有相关性(x2 =10.611,P=0.001),对患者的生存时间进行分析发现5-hmC弱阳性表达的患者生存时间明显低于5-hmC强阳性表达的患者(x2=4.412,P=0.036).结论 HCC组织中5-hmC的表达水平特异性降低,与患者的病理学分级和生存时间有相关性,TET1蛋白表达水平的降低可能是调控5-hmC的直接因素.

目的:考察包栽粉防己碱(Tet)新型纳米脂质体(Tet-lips)对于糖尿病心肌病(DCM)的预防作用及其机制.方法:应用薄膜分散法结合超声水合技术制备Tet-lips并对其进行质量表征.腹腔注射链脲佐菌素(STZ)建立1型糖尿病(DM)实验动物模型后,将实验动物随机分为正常对照组、DM组、Tet溶液组及Tet-lips组分别接受相应形式药物干预.药物干预结束后分别应用超声心动图、HE染色及透射电镜评价各组大鼠心功能及心肌细胞结构.ELISA及Western blot技术分析各组大鼠的氧化应激水平及分子机制.结果:Tet-lips形态圆整,分散均匀,包封率高达(87.23±2.21)％且稳定好.常规超声心功能检查结果显示DM组大鼠心功能指标包括左心室舒张末内径(LVEDD)、左心室收缩末内径(LVESD)、左心室舒张末期容积(LV-EDV)、左心室收缩末期容积(LVESV)较正常组对照大鼠显著升高(P＜0.05),而短轴短缩率(FS)及射血分数(EF)显著下降(P＜0.05),同时HE染色及透射电镜观察也证实DM组大鼠心肌细胞排列紊乱、肌原纤维断裂,线粒体空泡化.而Tet-lips干预组大鼠的各项心功能指标及心肌细胞结构较DM组明显改善,接近正常对照组水平.同时,分子生物学检测显示,Tet-lips组大鼠心肌超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-px)含量和核因子E-2相关因子2(Nrf-2)、血红素氧合酶-1(HO-1)蛋白表达较DM组显著升高(P＜0.05),同时丙二醛(MDA)含量显著下降(P＜0.05).结论:新型粉防己碱纳米脂质体能够激活Nrf2/HO-1信号通道从而发挥抗氧化应激损伤作用,改善DCM大鼠的心功能.