目的:探讨热疗对人喉癌Hep-2顺铂耐药（Hep-2/CDDP）细胞株生物学行为的影响和可能机制。方法:采用高浓度冲击联合浓度递增法诱导建立Hep-2/CDDP细胞株。采用细胞计数法检测Hep-2亲代细胞株组（未发生顺铂耐药的Hep-2细胞，采用无顺铂的RPMI 1640培养液培养）、Hep-2/CDDP细胞组、Hep-2/CDDP+顺铂细胞组（采用含4 mg/L顺铂的RPMI 1640培养液培养）的细胞增殖能力。Hep-2/CDDP细胞组和Hep-2亲代细胞株组分别使用含有0、0.004、0.04、0.4、4、40 mg/L顺铂的培养液培养，采用四甲基偶氮唑盐（MTT）法检测Hep-2/CDDP细胞对顺铂、长春新碱、5-氟尿嘧啶的敏感性，计算半数抑制浓度（ IC50）及耐药指数（RI）。将Hep-2/CDDP细胞分为4组，对照组细胞于37 ℃继续培养24 h；热疗组细胞于43 ℃作用2 h后37 ℃继续培养22 h；顺铂组用含4 mg/L顺铂的培养液37 ℃继续培养24 h；热疗联合顺铂组用含4 mg/L顺铂的培养液培养，43 ℃作用2 h后37 ℃继续培养22 h。采用MTT法和流式细胞术检测热疗联合顺铂对Hep-2/CDDP细胞增殖和早期凋亡的影响；采用析因分析法观察热疗联合顺铂对Hep-2/CDDP细胞增殖和早期凋亡影响的交互作用；采用蛋白质印迹法检测热疗联合顺铂对Hep-2/CDDP细胞野生型p53和PI3K表达的影响。将Hep-2/CDDP细胞分为4组，对照组Hep-2/CDDP细胞于37 ℃继续培养24 h；化疗药组采用12 mg/L长春新碱或9 mg/L 5-氟尿嘧啶处理细胞；热疗组Hep-2/CDDP细胞于43 ℃作用2 h后37℃继续培养22 h；热疗联合化疗组采用含有12 mg/L长春新碱或9 mg/L 5-氟尿嘧啶的培养液培养，43 ℃作用2 h后37℃继续培养22 h。采用MTT法检测热疗分别联合长春新碱、5-氟尿嘧啶对Hep-2/CDDP细胞增殖的影响。 结果:成功建立Hep-2/CDDP细胞株。不同时间Hep-2/CDDP细胞组、Hep-2亲代细胞株组和Hep-2/CDDP+顺铂细胞组的细胞数差异均无统计学意义（均 P>0.05），倍增时间分别为43.8、40.6和43.5 h。Hep-2亲代细胞株组和Hep-2/CDDP细胞组对顺铂的 IC50分别为4.771 mg/L和42.749 mg/L，RI为8.960。热疗联合顺铂可抑制Hep-2/CDDP细胞增殖（ F=327.91， P<0.05），促进Hep-2/CDDP细胞的早期凋亡（ F=724.63， P<0.05）；析因分析结果显示，热疗联合顺铂对Hep-2/CDDP细胞增殖和早期凋亡的影响均有交互作用（ F值分别为185.06、472.51，均 P<0.05）。蛋白质印迹法结果显示，对照组、热疗组、顺铂组、热疗联合顺铂组细胞野生型p53蛋白和PI3K蛋白的相对表达量差异均有统计学意义（ F值分别为547.76、404.44，均 P<0.01）。热疗联合长春新碱或5-氟尿嘧啶均可抑制Hep-2/CDDP细胞增殖（ F值分别为33.06、34.61，均 P<0.05）；析因分析结果显示，热疗分别联合长春新碱、5-氟尿嘧啶对Hep-2/CDDP细胞增殖抑制均无交互作用（ F值分别为0.64、0.60，均 P>0.05）。 结论:热疗可能通过上调野生型p53的表达、抑制PI3K相关通路逆转Hep-2/CDDP细胞株对顺铂的耐药性。Hep-2/CDDP细胞株对长春新碱和5-氟尿嘧啶产生交叉耐药，热疗可增加Hep-2/CDDP细胞株对长春新碱、5-氟尿嘧啶的敏感性。

目的:研究非甲基化胞嘧啶鸟嘌呤二核苷酸寡脱氧核苷酸(CpG-ODN，DSP30)在伴有骨髓浸润的B细胞非霍奇金淋巴瘤(B cell lymphoma，B-NHL)常规染色体检测中的价值。方法:搜集116例初诊时伴有骨髓浸润的B-NHL标本，设实验组应用DSP30联合IL-2刺激细胞增殖并培养72 h后进行染色体制备；对照组常规24 h培养处理并制备染色体，运用R显带技术对患者骨髓标本进行核型分析。结果:116例B-NHL中慢性淋巴细胞白血病/小淋巴细胞淋巴瘤(CLL/SLL)47例，弥漫大B细胞淋巴瘤(DLBCL)19例，套细胞淋巴瘤(MCL)16例，滤泡细胞淋巴瘤(FL)13例，边缘区淋巴瘤(MZL)8例，伯基特淋巴瘤(BL)7例，淋巴浆细胞淋巴瘤/华氏巨球蛋白血症(LPL/WM)3例，毛细胞白血病(HCL)2例，富于T/组织细胞的大B细胞淋巴瘤1例；对照组116例行常规染色体检测，18例无分裂相，染色体成功分析中异常检出率为22.45%(22/98)，而经实验组(DSP30+IL-2)刺激的同期患者，无分裂相者减少至10例，异常检出率为59.43%(63/106)；在惰性淋巴瘤中，对照组检出率为16.21%(12/74)，实验组检出率为55.00%(44/80)，在非CLL/SLL的惰性淋巴瘤中，对照组检出率为17.95%(7/39)，实验组为52.50%(21/40)；无论骨髓侵犯比例多少，DSP30+IL-2都能够有效提高染色体异常检出率；实验组染色体异常累及数前5的依次为14、13、11、8和18号染色体，对照组依次为14、13、8、9和1号染色体；实验组检出具有特征性的染色体异常高于对照组。结论:DSP30+IL-2作为刺激剂应用于伴有骨髓浸润的B细胞淋巴瘤，可以明显提高染色体的异常检出率，特别在低比例肿瘤细胞浸润时，能有效减少异常染色体的漏诊率；DSP30+IL-2应用可检出更多不同种类的特异性遗传学改变，可以对淋巴瘤进行更准确的诊断分型，并为临床提供更精准的预后分层信息，也为少见的B-NHL特异性异常的研究提供遗传学证据。

目的:比较靶向相对分子质量1.8×10 4转位蛋白(TSPO)的分子探针 N， N-二乙基-2-[2-(4- 18F-氟苯基)-5，7-二甲基吡唑[1，5-a]并嘧啶-3-基]乙酰胺( 18F-FDPA)和 18F-(R)-( N-仲丁基)-3-氟甲基- N-甲基-4-苯基喹啉-2-甲酰胺(LW223)用于探测兔腹主动脉粥样硬化易损斑块(VAP)的可行性和效能。 方法:选取9只健康新西兰大白兔，用完全随机法分为3组(每组3只)：正常对照组(A组)、VAP组(B组)和VAP治疗组(C组)，分别于造模后第12、16和24周末注射 18F-FDPA和 18F-LW223，并于注射后40～50 min行活体腹主动脉PET/CT和同机CT血管成像(CTA)。所有显像结束后，处死全部动物，行腹主动脉病理学及免疫荧光检测。采用重复测量方差分析(Bonferroni法)和配对 t检验分析数据。 结果:18F-FDPA在3组不同时间点(第12、16和24周末) PET/CTA同机显像中，靶本比(TBR；腹主动脉病灶/左心室血池)值间差异均有统计学意义( F值：68.09～144.88，均 P<0.001)。在第12周末显像中，3组腹主动脉区域均无明显显像剂摄取增高灶。在第16和24周末显像中，B组腹主动脉局部的摄取均高于同期时间点的C组(均 P<0.05)和A组(均 P<0.001)；C组腹主动脉局部的摄取高于同期时间点的A组(均 P<0.01)。3组不同时间点PET/CTA图像中，腹主动脉区域均无明显 18F-LW223摄取增高灶。在上述3个不同时间点，3组 18F-FDPA和 18F-LW223的TBR值间差异均有统计学意义( t值：2.88～36.79，均 P<0.05)。病理HE、免疫荧光CD68和TSPO染色显示，B组 18F-FDPA高摄取易损斑块处巨噬细胞浸润数量多于C组。 结论:与 18F-LW223相比， 18F-FDPA可用于早期探测兔腹主动脉易损斑块，并可评估降脂药物干预后易损斑块稳定性的变化。

目的:探讨不同CD8和细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4（CTLA-4）表达特征间皮瘤患者的生存期及其死亡危险因素，为病情进展及其临床结局评价提供新线索。方法:于2016年11月，采用回顾性临床病例研究设计，选择经临床组织病理学确诊的47例间皮瘤及其组织标本为研究对象，采集临床病理资料、石棉接触史和生存信息；以苏木素伊红染色法和免疫组化染色法对组织标本进行淋巴细胞浸润程度、5-甲基胞嘧啶（5-mC）、CTLA-4、CD8和细胞核增殖抗原（Ki-67）指标的检测，分析不同CD8和CTLA-4蛋白表达特征患者生存期和死亡危险因素，并分析Ki-67表达对不同CD8和CTLA-4蛋白和基因表达特征间皮瘤患者生存期的影响。结果:47例患者中，63.8%（30/47）的病例以少或中等程度淋巴细胞浸润为主，CTLA-4、CD8、5-mC和Ki-67免疫组化分值分别为92.97（54.95，120.65）、72.41（36.62，89.82）、11.09（3.40，52.89）和5.88（2.41，11.48）。CD8 高表达CTLA-4 高表达患者的5-mC表达水平高于CD8 高表达CTLA-4 低表达组（ P<0.01）。27例随访信息完整间皮瘤患者的总体中位生存期为0.83±0.29年，CD8 高表达CTLA-4 高表达和CD8 高表达CTLA-4 低表达组患者的中位生存期分别为0.58±0.51年和0.83±0.30年（ P=0.521）。在CD8 高表达CTLA-4 低表达组患者中，Ki-67免疫组化分值≥5.88是间皮瘤患者独立死亡危险因素（ HR=8.40， P=0.01）。在不同CD8和CTLA-4蛋白表达特征下，在CD8 高表达CTLA-4 低表达组患者中，Ki-67高和低表达者的中位生存期分别为0.57±0.11年和2.31±0.46年，两组间差异有统计学意义（ P<0.01）。在不同CD8和CTLA-4 mRNA表达特征下，在CD8 高表达CTLA-4 低表达组患者中，Ki-67 mRNA高和低表达者的中位生存期分别为1.20±0.36年和3.38±0.43年，两组间差异有统计学意义（ P=0.018）。 结论:当CD8高表达伴随CTLA-4低表达时，间皮瘤病例可能伴随DNA去甲基化现象。随着Ki-67表达增强，其生存期缩短，死亡风险升高。

目的:探讨长链非编码RNA（long non-coding RNA，LncRNA）核仁小RNA宿主基因6（SNHG6）对前列腺肿瘤干细胞增殖、凋亡及化疗敏感性的影响及其机制。方法:采用流式分选技术从前列腺肿瘤细胞PC-3中分选出CD44 +CD24 -肿瘤干细胞和非CD44 +CD24 -细胞，采用实时荧光定量PCR检测两种细胞中SNHG6和微小RNA（miR）-26a表达，5-溴脱氧尿嘧啶核苷（BrdU）法检测细胞增殖，流式细胞仪检测细胞凋亡，四甲基偶氮唑盐（MTT）法检测细胞对顺铂的化疗敏感性，免疫印迹法（Western blot）检测细胞中细胞核增殖相关抗原（Ki67）、B淋巴细胞瘤-2基因（Bcl-2）和Bcl-2相关X蛋白（Bax）蛋白表达；双荧光素酶报告基因实验检测SNHG6、miR-26a和zeste基因增强子同源物2（EZH2）的靶向关系，Western blot检测miR-26a模拟物对EZH2蛋白表达的影响。 结果:与非CD44 + CD24 -细胞比较，SNHG6在CD44 +CD24 -细胞中的表达水平明显升高（ P<0.05）；与NC-siRNA组[（1.00±0.06）%、（96.85±6.48）%、（0.72±0.06）%、（0.43±0.03）%、（5.32±0.15）%、（0.35±0.03）]比较，SNHG6-siRNA组细胞中SNHG6表达水平（0.25±0.03）、细胞增殖活力（75.36±5.1）%和细胞中Ki67（0.38±0.03）、Bcl-2蛋白（0.21±0.02）表达水平均明显降低，而miR-26a表达水平、细胞凋亡率（13.83±2.36）%和Bax蛋白（0.48±0.03）表达水平均明显升高，且细胞对顺铂化疗敏感性明显增强（ P<0.05）；miR-26a是SNHG6的靶基因，而EZH2是miR-26a的靶基因，miR-26a模拟物可使EZH2蛋白表达水平降低。 结论:SNHG6在前列腺肿瘤干细胞中表达上调，干扰其表达可抑制肿瘤干细胞增殖，促进细胞凋亡，并增强肿瘤干细胞对顺铂的敏感性，其作用机制可能与靶向调控miR-26a/EZH2轴有关。

目的:探讨热休克蛋白B7(HSPB7)对前列腺癌增殖、迁移的影响及其作用机制。方法:使用肿瘤基因组图谱(TCGA)和基因表达数据库(GEO)数据库比较2006年到2021年525例前列腺癌和83例正常组织中基因HSPB7的差异表达。将人前列腺癌细胞系22RV1和DU145分为对照组和实验组，分别转染空质粒和HSPB7质粒，转染2 d后，采用细胞计数试剂盒(CCK-8)法、平板克隆形成实验、5-乙炔基-2’脱氧尿嘧啶核苷(EdU)染色实验验证细胞的增殖能力；采用划痕愈合实验和Transwell实验验证细胞的迁移能力，采用蛋白质印迹法分析去基化药物5-Aza-dC以及抑癌基因p53与HSPB7的靶向关系。两实验组间比较采用独立样本 t检验，多实验组间比较采用方差分析。 结果:对照组细胞EdU着色细胞比例高于实验组[22RV1：(13.250±0.508)%比(7.439±0.172)%， t＝10.840， P<0.05；DU145：(31.280±0.680)%比(7.708±0.369)%， t＝30.460， P<0.05]、培养96 h后吸光度高于实验组(22RV1：1.742±0.563比1.315±0.651， F＝16.520， P<0.05；DU145：1.960±0.443比1.578±0.469， F＝28.850， P<0.05)、克隆形成数高于实验组(22RV1：407.700±5.548比164.700±7.839， t＝25.300， P<0.05；DU145：503.700±6.438比301.300±5.783， t＝23.380， P<0.05)、划痕愈合率高于实验组[22RV1：(20.690±0.8903)%比(3.458±0.6731)%， t＝15.440， P<0.05；DU145：(51.620±2.460)%比(29.400±2.508)%， t＝6.323， P<0.05]、迁移细胞数高于实验组(22RV1：78.250±7.420比23.750±2.869， t＝6.851， P<0.05；DU145：218.000±6.285比58.000±5.492， t＝19.170， P<0.05)。抑癌基因P53过表达组HSPB7蛋白表达量高于对照组(22RV1：1.025±0.020比1.999±0.057， t＝16.130， P<0.05；DU145：1.043±0.040比2.350±0.057， t＝18.870， P<0.05)。 结论:HSPB7在前列腺癌组织中被甲基化从而导致表达下调，HSPB7通过抑制前列腺癌细胞增殖和迁移从而抑制前列腺癌的进展，且这种作用受到抑癌基因p53的调控。

目的:探讨组蛋白脱乙酰酶6（HDAC6）抑制剂Tubastatin A对人皮肤成纤维细胞（HSF）增殖及运动性的影响及其可能的分子机制。方法:采用实验研究方法。取对数生长期HSF，按随机数字表法分为阴性对照组及1 μmol/L Tubastatin A组、5 μmol/L Tubastatin A组、10 μmol/L Tubastatin A组。阴性对照组加入含终体积分数0.1%二甲基亚砜的DMEM培养液（以下简称完全培养液），其余3组分别加入含相应终物质的量浓度Tubastatin A的完全培养液。常规培养24 h后，采用细胞计数试剂盒8（CCK-8）法和5-乙炔基-2'-脱氧尿嘧啶核苷（EdU）染色检测细胞增殖活力；在活细胞工作站下观察细胞3 h内运动范围，计算细胞曲线运动速度；采用蛋白质印迹法检测胞外信号调节激酶1/2（ERK1/2）及磷酸化ERK1/2（p-ERK1/2）的蛋白表达量，并计算p-ERK1/2与ERK1/2比值，以此表示ERK1/2活性。CCK-8法行细胞增殖活力检测样本数为6，其余实验样本数为3。对数据行单因素方差分析及LSD检验。结果:培养24 h后，CCK-8法和EdU染色显示，与阴性对照组比较，1 μmol/L Tubastatin A组、5 μmol/L Tubastatin A组、10 μmol/L Tubastatin A组细胞增殖活力均显著下降（ P<0.01）。培养24 h后，CCK-8法显示，与1 μmol/L Tubastatin A组比较，10 μmol/L Tubastatin A组细胞增殖活力显著下降（ P<0.05）；EdU染色显示，与1 μmol/L Tubastatin A组比较，5 μmol/L Tubastatin A组、10 μmol/L Tubastatin A组细胞增殖活力显著下降（ P<0.05或 P<0.01）。观察3 h内，1 μmol/L Tubastatin A组、5 μmol/L Tubastatin A组、10 μmol/L Tubastatin A组细胞运动范围较阴性对照组明显缩小。观察3 h内，阴性对照组细胞曲线运动速度为（0.780±0.028）μm/min，明显快于1 μmol/L Tubastatin A组、5 μmol/L Tubastatin A组、10 μmol/L Tubastatin A组细胞的（0.594±0.023）、（0.469±0.028）、（0.391±0.021）μm/min（ P<0.01）；1 μmol/L Tubastatin A组细胞曲线运动速度明显快于5 μmol/L Tubastatin A组和10 μmol/L Tubastatin A组（ P<0.01）；5 μmol/L Tubastatin A组细胞曲线运动速度明显快于10 μmol/L Tubastatin A组（ P<0.05）。培养24 h后，与阴性对照组比较，1 μmol/L Tubastatin A组、5 μmol/L Tubastatin A组、10 μmol/L Tubastatin A组细胞ERK1/2的活性显著下降（ P<0.01）；与1 μmol/L Tubastatin A组比，5 μmol/L Tubastatin A组和10 μmol/L Tubastatin A组细胞ERK1/2的活性显著下降（ P<0.01）；与5 μmol/L Tubastatin A组比较，10 μmol/L Tubastatin A组细胞ERK1/2的活性显著下降（ P<0.05）。 结论:HDAC6抑制剂Tubastatin A可能通过抑制ERK1/2活性，从而抑制HSF增殖及运动。

目的:探索葡萄糖对滋养层细胞系HTR8/SVneo细胞Akt2基因甲基化和mRNA水平的影响及早孕期外周血Akt2 mRNA水平与孕前体质指数（BMI）和妊娠期糖尿病（GDM）的关系。方法:（1）构建GDM孕妇子宫内高血糖环境细胞模型，按培养液的葡萄糖浓度分为2.5、5.0、10.0、25.0、40.0 mmol/L 5组；使用实时荧光定量PCR技术检测Akt2 mRNA水平，质谱检测Akt2基因启动子区域的甲基化水平。（2）收集2014年12月至2016年7月在北京大学第一医院分娩的60例孕妇的早孕期外周血，根据其孕前BMI及有无GDM分为4组：超重非GDM组、超重GDM组、肥胖非GDM组和肥胖GDM组。实时荧光定量PCR技术检测4组孕妇早孕期外周血中Akt2 mRNA水平。结果:（1）随培养液中葡萄糖浓度的升高，Akt2 mRNA水平显著升高，呈浓度依赖性（ P均<0.05）。与25.0 mmol/L组相比，5.0 mmol/L组Akt2基因启动子区域的甲基化位点胞嘧啶-磷酸-鸟嘌呤二核苷酸（CpG）10、CpG23、CpG24.5，2.5 mmol/L组Akt2基因启动子区域CpG23、CpG24.5位点，10.0 mmol/L组Akt2基因启动子区域CpG10位点，均出现显著的甲基化水平的改变（ P均<0.05）；与5.0 mmol/L组相比，40.0 mmol/L组Akt2基因启动子区域CpG10位点出现显著的甲基化水平的改变（ P<0.05）。（2）与超重非GDM组［1.04（0.90~1.26）］比较，超重GDM组［2.10（1.85~2.28）］和肥胖GDM组［1.68（0.82~2.43）］Akt2 mRNA水平均升高，差异均有统计学意义（ P均<0.05）。与肥胖GDM组［1.68（0.82~2.43）］比较，超重GDM组［2.10（1.85~2.28）］Akt2 mRNA水平较高，肥胖非GDM组［1.00（0.71~2.17）］Akt2 mRNA水平较低，但差异均无统计学意义（ P均>0.05）。 结论:葡萄糖可能通过改变Akt2基因启动子区域的甲基化状态，从而影响Akt2 mRNA水平，且这种变化可能在GDM孕妇的早孕期已经出现，特别是在孕前BMI较低的孕妇中。

甲基胞嘧啶双加氧酶1(TET1)蛋白是一种5-甲基胞嘧啶(5-mC)羟化酶，属于人类α-酮戊二酸加氧酶TET蛋白家族。其功能是识别并结合到基因组5’-胞嘧啶-磷酸-鸟嘌呤基序(CpG)-3’二核苷酸密度高的区域如CpG岛，启动DNA去甲基化程序，维持DNA甲基化和去甲基化平衡，以保持基因组甲基化稳态，实现表观遗传调控。TET1表达和/或功能异常与肿瘤的发生和进展密切相关，在不同来源的肿瘤中可以表现为原癌基因或者抑癌基因属性。本文综述近年来TET1在肿瘤中的作用及机制的研究进展。

目的:探讨6q24新生儿暂时性糖尿病（6q24-related transient neonatal diabetes mellitus, 6q24-TNDM）的临床特征和分子遗传学特点。方法:回顾性分析2017年上海市儿童医院新生儿科收治的2例6q24-TNDM患儿的临床资料。采用焦磷酸测序方法，对6q24区域内甲基化差异修饰区域（differentially methylated region, DMR）中16个胞嘧啶-磷酸-鸟嘌呤二核苷酸（cytidine-phosphate-guanosine, CpG）位点的甲基化水平进行定量分析。结果:2例患儿均为男性，例1为5日龄，例2为11日龄，均为剖宫产娩出。例1胎龄37周 +4，出生体重2 340 g；例2胎龄38周 +2，出生体重2 600 g。2例均为小于胎龄儿，生后均因高血糖入院，体格检查见皮肤弹性略差，皮下脂肪偏少，入院时血糖分别为12.95和8.00 mmol/L，血胰岛素低于正常值（分别为<1.39和3.94 pmol/L），C-肽低于正常值（分别为0.05和0.14 nmol/L），尿糖阳性，尿酮体阴性，血清抗谷氨酸脱羧酶抗体、抗胰岛素抗体、胰岛细胞抗体阴性，胰腺大小正常。皮下注射胰岛素2周余，2例患儿好转出院，分别在生后69和42 d停用胰岛素，糖尿病缓解。2例患儿产前诊断提示染色体核型正常，单核苷酸多态性芯片提示6号染色体单亲二体，入院后二代测序均未检测到明确的致病性点突变。使用焦磷酸测序发现患儿6q24区域DMR中16个CpG位点的甲基化水平均低于10%（健康对照儿童相应位点的甲基化水平约为40%），呈现明显的低甲基化。 结论:对于出生时小于胎龄儿、高血糖时血胰岛素和C-肽水平低的TNDM患儿，采用焦磷酸测序技术对甲基化差异修饰区域中CpG位点的甲基化水平进行定量分析，可以对6q24-TNDM进行快捷直接诊断，有助于指导治疗和评估预后。