目的:评价钙离子-钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ-环腺苷酸反应元件结合蛋白(Ca 2＋-CaMKⅡ-CREB)信号通路在U50488H减轻CPB致大鼠围术期神经认知障碍(PND)中的作用。 方法:清洁级健康成年雄性SD大鼠40只，体重350～400 g，采用随机数字表法分为4组( n＝10)：对照组(S组)、CPB组(C组)、CPB＋κ受体激动剂U50488H组(U组)和CPB＋CaMKⅡ特异性抑制剂KN93＋U50488H组(K组)。S组仅进行动静脉穿刺置管，其余各组建立无血预充心脏不停跳CPB模型。U组CPB前30 min时静脉注射U50488H 1.5 mg/kg；K组CPB前60 min时侧脑室注射10 μmol/L KN93 5 μl，CPB前30 min时静脉注射U50488H 1.5 mg/kg。术后第3天采用Morris水迷宫实验测试大鼠认知功能。然后处死大鼠取海马组织，采用Western blot法检测磷酸化CaMKⅡ(p-CaMKⅡ)、磷酸化CREB (p-CREB)和脑源性神经营养因子(BDNF)的表达水平，采用RT-PCR法检测CaMKⅡ、CREB、BDNF的mRNA表达水平。 结果:与S组比较，C组、U组和K组逃避潜伏期延长，穿越原平台次数减少，海马p-CaMKⅡ、p-CREB、CaMKⅡmRNA、CREB mRNA、BDNF及其mRNA表达下调( P<0.05)；与C组比较，U组逃避潜伏期缩短，穿越原平台次数增加，海马p-CaMKⅡ、p-CREB、CaMKⅡmRNA、CREB mRNA、BDNF及其mRNA表达上调( P<0.05)，K组上述指标差异无统计学意义( P>0.05)；与U组比较，K组逃避潜伏期延长，穿越原平台次数减少，海马p-CaMKⅡ、p-CREB、CaMKⅡmRNA、CREB mRNA、BDNF及其mRNA表达下调( P<0.05)。 结论:U50488H减轻CPB致大鼠PND的机制与激活Ca 2＋-CaMKⅡ-CREB信号通路有关。

目的 通过观察κ-阿片受体(KOR)激动剂U50488H对心肺转流(CPB)大鼠肺组织NLRP3炎症小体和细胞焦亡的影响,探讨U50488H减轻CPB致急性肺损伤(ALI)的可能机制.方法 24只成年雄性清洁级SD大鼠,350～450 g,随机分为假手术组(Sham组)、CPB组和CPB+KOR激动剂组(U50448H组),每组8只.U50448H组于CPB前30 min静脉注射1.5 mg/kg U50488H.分别于CPB后0 h、1 h和2 h各时点行动脉血气分析,计算肺泡-动脉氧分压差(AaDO2)和呼吸指数(RI).三组大鼠均在停CPB后2 h时处死,取完整右肺下叶,采用重力法测定血管外肺水(EVLW),HE染色观察肺组织形态学变化.采用ELISA方法检测血浆脂多糖(LPS)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素(IL)-6和IL-4 的含量,Western blot测定肺组织GSDMD-C、GSDMD-N和NLRP3、半胱氨酸天冬氨酸酶前体(pro-Caspase-1)蛋白的表达.结果 CPB组大鼠在CPB后 0 h、1 h和 2 h各时点的AaDO2 和RI、LPS明显高于Sham组(P<0.05);U50488 组三个时点的AaDO2 和RI、LPS明显低于CPB组(P<0.05).与Sham组比较,CPB组大鼠EVLW、血浆TNF-a 和IL-6、肺组织GSDMD-C、GSDMD-N和NLRP3、pro-Caspase-1表达明显增高,血浆IL-4水平明显降低,其差异有统计学意义(P<0.05);而U50488组上述指标与Sham组无明显差异(P>0.05).CPB组大鼠出现了严重的肺损伤和肺泡内充血/出血,并伴有广泛的炎症细胞浸润,U50448H组肺损伤明显减轻.结论 KOR激动剂U50488H对CPB所致ALI期间NLRP3炎性小体诱导的细胞焦亡具有抑制作用,从而减轻了CPB后的肺损伤.

目的 观察κ-阿片受体(KOR)激动剂U50488H对体外循环诱导的大鼠肺损伤的影响,并探讨U50488H对肺保护的作用机制.方法 将24只SPF级SD大鼠随机分为假手术组(Sham组)、大鼠体外循环模型组(CPB组)和KOR激动剂在体外循环(CPB)模型中的干预组(U50448H组),每组8只.U50448H组于CPB前30 min静脉注射1.5 mg/kg U50488H,分别于CPB后0 h、1 h和2 h各时点行动脉血气分析,计算肺泡-动脉氧分压差(AaDO2)和呼吸指数(Respiratory index,RI).三组大鼠均在停CPB后2 h时处死,取完整右肺下叶,采用重力法测定血管外肺水(Extravascular lung water,EVLW),HE染色观察肺组织形态学变化.采用ELISA方法检测血浆脂多糖(LPS)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)和还原型谷胱甘肽(GSH)的含量,TUNEL法检测肺组织的细胞凋亡,Western blot测定肺组织GSDMD-C、GSDMD-N、NLRP3、ASC、pro-Caspase-1和pro-IL-1β蛋白的表达.结果 CPB组大鼠在CPB后0 h、1 h和2 h各时点的AaDO2和RI、LPS明显高于Sham组(P<0.05);U50488H组3个时点的AaDO2、RI、LPS均明显低于CPB组(P<0.05).与Sham组比较,CPB组大鼠EVLW,血浆MDA和GSH,肺组织的凋亡指数(AI),NLRP3、ASC、pro-Caspase-1和pro-IL-1β蛋白的表达明显增高,血浆SOD含量明显降低,差异均有统计学意义(P<0.05);而U50488H组上述指标与Sham组比较,差异无统计学意义(P>0.05).CPB组大鼠出现了严重的肺损伤和肺泡内充血/出血,并伴有广泛的炎症细胞浸润,U50448H组肺损伤明显减轻.结论 κ-阿片受体激动剂U50488H通过抑制肺组织中NLRP3/Caspase-1信号通路介导的炎症和氧化应激反应,从而减轻CPB后大鼠的肺损伤.

目的 探讨κ阿片受体(KORs)激动剂对体外循环(CPB)术后大鼠认知功能及海马组织p-tau、Aβ蛋白表达的影响.方法 选取40只清洁级成年雄性SD大鼠,采用随机数字表法分为假手术组(S组)、CPB组(C组)、CPB+KORs激动剂U50488H组(U组)、CPB+KORs拮抗剂Nor-BNI+KORs激动剂U50488H组(N组),每组10只.术前,各组大鼠均进行为期5 d(4次/d)的水迷宫训练.S组仅穿刺置管,不进行CPB;C组行动静脉穿刺置管,且进行CPB 1h;U组于CPB前30 min静脉注射U50488H 1.5 mg/kg,其余同C组;N组于CPB前1 h静脉注射Nor-BNI 2.0 mg/kg,其余同U组.CPB术后第3天水迷宫测试结束后,将大鼠放血处死后取海马组织,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测Aβ 蛋白含量,采用蛋白质印迹法(West-ern blot)检测p-tau蛋白表达情况.结果 与S组相比,其余3组大鼠逃避潜伏期均延长,穿越平台次数、目标象限游泳距离和停留时间均减少,海马组织中p-tau蛋白表达、Aβ蛋白含量均增加,差异有统计学意义(P＜0.05);与C组相比,U组大鼠逃避潜伏期缩短,穿越平台次数、目标象限游泳距离和停留时间增加,海马组织p-tau蛋白表达、Aβ蛋白含量降低,差异有统计学意义(P＜0.05);N组各项指标与C组相比,差异无统计学意义(P＞0.05).结论 KORs激动剂可减少海马组织中p-tau、Aβ蛋白表达,且或许由此发挥对CPB术后大鼠认知功能的保护作用.

目的 探讨U50488H对CPB诱发大鼠术后认知功能障碍的影响.方法 清洁级成年雄性SD大鼠48只,体重400～ 450 g,采用随机数字表法分为3组(n=16):假手术组(S组)、CPB组和CPB+U50488H组(U组).CPB组行CPB 60 min;U组于CPB前30 min时左侧脑室注射U50488H1.5 mg/kg,然后行CPB 60 min.于CPB后1d时,每组取8只大鼠,采集静脉血标本,采用ELISA法检测血清S100β蛋白、IL-1β和TNF-α的浓度,然后处死大鼠,取右侧海马组织,HE染色后光镜下观察病理学结果.于CPB后7d时,每组取8只大鼠,测定认知功能.结果 与S组比较,CPB组和U组血清S100β蛋白、IL-1β和TNF-α的浓度升高,逃避潜伏期延长,穿越原平台次数减少,目标象限游泳距离和停留时间缩短(P＜0.05);与CPB组比较,U组血清S100β蛋白、IL-1β和TNF-α的浓度降低,逃避潜伏期缩短,穿越原平台次数增加,目标象限的游泳距离和停留时间延长(P＜0.05),海马组织病理学损伤减轻.结论 U50488H可减轻CPB诱发大鼠术后认知功能障碍.

目的 探讨κ阿片受体(kappa opioid receptors,KORs)激动剂U50488H对心肺转流(CPB)后大鼠认知功能及α7烟碱型乙酰胆碱能受体(α7nAChR)表达的影响.方法 成年雄性SD大鼠32只,体重400～450 g,随机分为四组:Sham组(S组)、CPB组(C组)、CPB+ U50488H组(K组)、CPB+ KORs拮抗剂Nor-BNI+ U50488H组(N组),每组8只.四组大鼠于术前5d开始进行水迷宫训练,每天4次.S组不建模型,动静脉穿刺后进行机械通气60 min,其余三组CPB 60 min.术后1d进行Morris水迷宫实验,随后处死大鼠,采集血清,取海马组织.采用ELISA法检测血清IL-1β、TNF-α、S100β浓度、海马ACh含量及ChAT和AchE活性;采用Western blot法检测海马α7nAChR蛋白含量.结果 与S组比较,C、K和N组逃避潜伏期明显延长,穿越平台次数明显减少,目标象限游泳距离和停留时间明显缩短(P＜0.05);血清IL-1β、TNF-α和S100β浓度明显升高,海马α7nAChR蛋白含量明显降低(P＜0.05).与C组比较,K组逃避潜伏期明显缩短,穿越平台次数明显增多,目标象限游泳距离和停留时间明显延长(P＜0.05);血清IL-1β、TNF-α和S100β浓度明显降低,海马α7nAChR蛋白含量明显升高(P＜0.05).与S组比较,C组、N组海马Ach含量及ChAT活性明显降低,AchE活性明显升高.与C组比较,K组海马Ach含量及ChAT活性明显升高,AchE活性明显降低(P＜0.05).结论 KORs激动剂激活胆碱能抗炎通路,上调α7nAChR的表达,减轻炎症反应,从而改善CPB后大鼠认知功能.

目的:探讨脊髓ERK/c-Fos信号通路调控κ阿片受体(kappa-opioid receptors,KOR)在瑞芬太尼诱发大鼠术后痛觉过敏中的作用.方法:选择鞘内置管恢复良好的雄性SD大鼠36只,体重230～270 g,采用随机数字法分为6组(n=6):对照组(C组)、U50488H组(U组)、PD98059组(P组)、瑞芬太尼组(R组)、瑞芬太尼+U50488H组(RU组)、瑞芬太尼组+PD98059组(RP组).所有大鼠均行右侧跖底切开术;U组和RU组鞘内注射U50488H(50 nmol/10μl),P组和RP组鞘内注射PD98059(20μg/10μl),R组、RU组和RP组持续尾静脉泵注瑞芬太尼10μg·kg-1·min-1共30 min.每组大鼠于置管前(B-1),术前(B-2),术后1 h,2 h,4 h,1 d,2 d,3 d(PO 1 h,2 h,4 h,1 d,2 d,3 d)测定各组大鼠术侧后爪机械缩足阈(paw withdrawl threshold,PWT)和热缩足潜伏期(paw withdrawl latency,PWL).术后3 d疼痛行为学测试完毕后取腰膨大,应用Western-blot技术检测各组脊髓p-ERK1/2及c-Fos的表达;通过电镜观察各组脊髓背角突触可塑性变化.结果:与C组比较,U组和P组术后各时间点PWT、PWL无显著性变化(P>0.05),R组术后各时间点PWT、PWL明显降低(P<0.05);与R组相比,RU组和RP组术后各时间点PWT、PWL明显增加(P<0.05).与C组比较,U组和P组脊髓p-ERK1/2及c-Fos表达无明显变化(P>0.05),R组脊髓p-ERK1/2及c-Fos表达明显增加(P<0.05);与R组相比,RU组和RP组脊髓p-ERK1/2及c-Fos表达明显降低(P<0.05).电镜下观察发现:与C组比较,U组和P组脊髓背角突触数目、突触后致密物(postsynaptic density,PSD)厚度、突触间隙的宽度、突触活性区长度以及突触曲率无显著性变化(P>0.05),R组脊髓背角突触数目、PSD厚度、突触活性区长度以及突触曲率明显增加(P<0.05),突触间隙的宽度明显变窄(P<0.05);与R组相比,RU组和RP脊髓背角突触数目、PSD厚度、突触活性区长度以及突触曲率明显明显减少(P<0.05),突触间隙的宽度明显增加(P<0.05).结论:瑞芬太尼通过激活脊髓背角ERK/c-Fos信号通路,抑制脊髓KOR功能,增加脊髓背角突触结构可塑性变化,诱发大鼠术后痛觉过敏.

目的 探讨K-受体激动剂U50488H对体外循环(CPB)术后大鼠JAK2-STAT3信号通路及认知功能的影响.方法 选取60只SD大鼠为研究对象,随机分为假手术组(S组)、CPB组(C组)、U50488H组(K组),U50488H拮抗剂组(NK组),U50488H+AG490组(AG组),每组各12只.各组大鼠于CPB后1 d行水迷宫检测;酶联免疫吸附试验检测血清中炎症因子白介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)及S-100β蛋白的变化.蛋白印记法检测海马JAK2、STAT3及磷酸化JAK2、STAT3表达水平变化.结果 C组、K组、NK组及AG组S100-β、IL-6、TNF-α水平均显著高于S组(P<0.05).K组、AG组S100-β、IL-6、TNF-α水平均显著低于C组(P<0.05).C组、K组、NK组及AG组海马组织JAK2、p-JAK2、STAT3、p-STAT3水平均显著高于S组(P<0.05).K组、AG组JAK2、p-JAK2、STAT3、p-STAT3水平均显著低于C组(P<0.05).与C组比较,K组和AG组大鼠平均逃避潜伏期时间明显缩短,空间探索试验中进入目标象限的次数明显增多(P<0.05).结论 K-受体激动剂可在一定程度上减少CPB术后认知功能障碍发生,其机制可能与抑制JAK2-STAT3通路,减少炎症反应有关.

目的 探讨K受体激动剂对体外循环(CPB)后大鼠认知功能的保护作用.方法 选取健康成年清洁级雄性SD大鼠48只,按完全随机数字表法将其分为CPB手术组(C组)、CPB+K阿片受体激动剂(U50488H)组(K组)、CPB+U50488H+K阿片受体拮抗剂(Nor-BN)组(NK组)及CPB+U50488H+MAPK-ERK1/2通路特异阻断剂(U0126)组(UK组),每组各12只.应用Western-blot法观察各组大鼠海马组织NF-κB-p65、α7烟碱型胆碱能受体(α7nAChR)、p-erk蛋白水平的表达情况.结果 C组NF-KB-p65蛋白表达水平显著高于K组、NK组及UK组,且K组最低,组间比较,差异均有统计学意义(P<0.05).K组、NK组及UK组海马组织中α7nAChR蛋白表达水平均高于C组;NK组及UK组 α7nAChR表达水平均低于K组;NK组大鼠α7nAChR表达水平低于UK组;组间比较,差异均有统计学意义(P<0.05).K组p-erk蛋白表达水平高于C组、NK组及UK组,组间比较,差异有统计学意义(P<0.05).结论 K阿片受体激动剂对认知功能的保护与MAPK-erk1/2通路上调α7nAChR激活胆碱能抗炎通路有关,可激活α7nAChR,抑制核转录因子-κB蛋白表达,减少炎症反应,从而降低CPB所致术后认知功能障碍的发生率.

目的 探讨κ-阿片受体激动剂U50488H对体外循环术后大鼠认知功能与海马细胞凋亡的影响.方法 选取清洁级成年雄性SD大鼠48只,随机分为假手术组(S组)、体外循环组(C组)、U50488H+体外循环组(K组)及U50488H+特异性U50488H拮抗剂(Nor-BNI)+体外循环组(NK组),每组各12只.4组大鼠于麻醉置管/体外循环后1 d行水迷宫检测.酶联免疫吸附法检测血清中白细胞介素-6、中枢神经特异蛋白、肿瘤坏死因子α的浓度;免疫蛋白印记检测海马caspase-3表达的变化.结果 C组、K组、NK组的海马神经元凋亡阳性细胞积分吸光度值、caspase-3蛋白表达及血清白细胞介素-6、中枢神经特异蛋白、肿瘤坏死因子α浓度均高于S组; C组、NK组的海马神经元凋亡阳性细胞积分吸光度值、caspase-3蛋白表达及血清白细胞介素-6、中枢神经特异蛋白、肿瘤坏死因子α浓度均高于K组,组间比较,差异均有统计学意义(P ＜0.05).与S组比较,C组、K组、NK组大鼠逃避潜伏期时间明显延长,空间探索试验进入目标象限的次数明显减少;与C组比较,K组大鼠平均逃避潜伏期时间明显缩短,空间探索试验中进入目标象限的次数明显增多,差异有统计学意义(P ＜0.05).结论 U50488H可在一定程度降低体外循环诱发的大鼠海马细胞凋亡及炎症反应,对体外循环后认知功能有一定保护作用.