目的:探讨采用siRNA干扰嗜乳脂蛋白亚家族成员A3(BTN3A3)对脑胶质瘤细胞凋亡的影响。方法:实验采用胶质瘤细胞株(HS683、U251)以及原代胶质瘤细胞，均设立阴性对照组(NC组)以及转染不同序列siRNA的Si-1组(转染1序列)和Si-2组(转染2序列)。应用蛋白质免疫印迹方法分析不同胶质瘤细胞株、小胶质细胞株(HMC3)中BTN3A3的表达情况。通过转染siRNA敲减BTN3A3后，采用流术细胞术分析各细胞株中细胞凋亡的变化情况。分离培养手术切除的脑胶质瘤组织，获得原代胶质瘤细胞后，采用蛋白质免疫印迹方法分析原代细胞中BTN3A3的表达水平；通过转染siRNA敲减BTN3A3后，采用流式细胞术分析原代细胞的细胞凋亡变化情况。结果:BTN3A3在HS683(1.12±0.03)和U87-MG细胞(1.08±0.05)中的表达水平显著高于HMC3细胞(0.66±0.02)(均 P<0.01)。U251细胞Si-1组、Si-2组BTN3A3的表达水平分别为0.11±0.01、0.12±0.01，均低于NC组(0.21±0.01)(均 P<0.01)；HS683细胞Si-1组、Si-2组BTN3A3的表达水平分别为0.77±0.03、0.78±0.04，均低于NC组(1.01±0.03)(均 P<0.01)。敲减BTN3A3后，与NC组相比，HS683细胞的早期凋亡比率(NC组：31.6%，Si-1组：53.7%，Si-2组：63.3%)、U251细胞的晚期凋亡比率(NC组：10.4%，Si-1组：18.9%，Si-2组：26.5%)升高。BTN3A3在原代胶质瘤细胞中的表达水平高于HMC3细胞(分别为0.75±0.07和0.55±0.06， P<0.05)。采用siRNA敲减后，原代胶质瘤细胞中BTN3A3的表达水平降低(NC组：0.90±0.01，Si-1组：0.44±0.01，Si-2组：0.49±0.02，Si-1组和Si-2组与NC组相比，均 P<0.01)，晚期细胞凋亡比率升高(NC组：12.3%，Si-1组：22.6%，Si-2组：18.2%)。 结论:采用siRNA干扰BTN3A3可促进胶质瘤细胞株、原代胶质瘤细胞的凋亡。

嗜乳脂蛋白(BTN)基因是一组主要的组织相容性复合体相关基因，嗜乳脂蛋白第三亚家族成员一(BTN3A1)是BTN家族7个成员之一，在多种疾病的病理生理、发生发展过程中具有重要作用，可以通过调节T细胞的免疫功能抑制抗肿瘤的发生发展。目前对BTN3A1与肿瘤的主要研究集中在血液系统疾病，但已有研究表明，其与部分实体肿瘤有一定联系。本文旨在总结BTN3A1在各种疾病中的作用，并作一综述。

嗜乳脂蛋白(butyrophilin，BTN)最初发现于乳脂球膜，是免疫球蛋白超家族的受体蛋白，其胞外段与免疫检查点B7蛋白家族同源，因而受到免疫学家的关注。近年来，有研究发现BTN参与调控天然和获得性T细胞免疫反应，尤其是该家族成员BTN3A1(CD277)具有活化Vγ9Vδ2 T细胞的功能，可能是免疫检查点的新靶点。现对BTN家族的发现、命名、结构及其对T细胞的免疫调节作用进行综述。

目的 制备BTN3A3单克隆抗体并鉴定.方法 用含小鼠IgG2a Fc标签的BTN3A3重组蛋白BTN3A3-mFc作为抗原免疫BALB/c小鼠,通过细胞融合获得杂交瘤细胞.用含人IgG1 Fc标签的BTN3A3重组蛋白BTN3A3-hFc作为检测原,筛选分泌BTN3A3单抗的杂交瘤细胞株.利用Western印迹法和间接免疫荧光对上述单抗进行鉴定.结果 共获得7株可稳定分泌BTN3A3单抗的杂交瘤细胞株.ELISA、Western印迹法和间接免疫荧光结果显示上述抗体可特异性地识别BTN3A3.结论 获得可应用于ELISA、Western印迹法及免疫荧光的BTN3A3单抗,为BTN3A3的功能性研究奠定了基础.

银屑病是一种常见的慢性复发性炎症性皮肤病, 其病因和发病机制目前尚不清楚.根据发病年龄常将银屑病分为早发型银屑病和晚发型银屑病, 其中早发型银屑病与遗传的相关性较晚发型银屑病强, 且家族史通常阳性.HLA-Cw*0602、角质形成素、嗜乳脂样蛋白2、内质网氨基肽酶1、血管内皮生长因子等是影响早发型银屑病发病的基因.白细胞介素1是影响晚发型银屑病发病的基因.深入探究遗传因素在不同亚型银屑病中的作用, 对明确银屑病发病机制、制定合理的治疗措施、降低复发率及提高生活质量有重要意义.

目的 探讨解整合素-金属蛋白酶33(ADAM33)、嗜乳脂蛋白样3(BTNL3)基因在支气管哮喘患者中的表达特点及意义.方法 选取2017年1月至2018年1月在我院住院治疗的支气管哮喘急性发作患者87例(观察组),其中轻度患者29例,中度患者36例,重度患者22例,同时选取健康志愿者90例作为对照组,采用实时荧光定量PCR检测ADAM33和BTNL3 mRNA表达,同时检测血清免疫球蛋白E(IgE)、嗜酸性粒细胞(EOS)计数和白细胞介素-4(IL-4).结果 观察组ADAM33 mRNA相对表达量为3.01 ±0.20,明显高于对照组(P＜0.05),而BTNL3 mRNA相对表达量为0.42 ±0.12,明显低于对照组(P＜0.05);观察组EOS计数、IgE和IL-4分别为(0.41-±0.10)×109/L、357.64±56.21IU/mL和126.48±78.94pg/mL,明显高于对照组(P＜0.05);不同病情患者ADAM33 mRNA、BTNL3 mRNA和IL-4比较差异有统计学意义(P＜0.05),其中重度患者ADAM33 mRNA和IL-4明显高于轻度和中度患者(P＜0.05),而BTNL3 mRNA明显低于轻度和中度患者(P＜0.05);ADAM33 mRNA与IL-4呈正相关(r=0.541,P＜0.05),BTNL3 mRNA与IL-4、ADAM33 mRNA呈负相关(r=-0.622和-0.464,P＜0.05).结论 ADAM33、BTNL3在不同严重程度支气管哮喘患者中表达有所差异,两者存在一定相关性,同时可能与Th2类细胞因子有关.

目的 初步探讨嗜乳脂蛋白3A1(BTN3A1)在结核杆菌耐热抗原(MTB-HAg)诱导的人外周血Vγ9Vδ2 T细胞活化增殖中的作用.方法 人外周血单个核细胞(PBMC)先加BTN3A1阻断性抗体作用3h,再分别用MTB-HAg和磷酸类抗原(PAg)刺激培养24h后收集细胞,用流式细胞术检测Vγ9Vδ2 T细胞中CD69表达;或刺激20h后收集细胞,检测Vγ9Vδ2 T细胞中1型辅助性T(Th1)细胞因子γ干扰素(IFN-γ)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)产生细胞比例;或刺激后,在含白细胞介素2(IL-2)培养液中培养10 d后,收集细胞检测Vγ9Vδ2 T细胞扩增比例及增殖活性.结果 MTB-HAg刺激后,Vγ9Vδ2 T细胞中CD69平均荧光强度和阳性细胞比例在BTN3A1阻断组均明显下降(为刺激组的13.84％和43.00％);而PAg阻断组的CD69平均荧光强度和阳性细胞比例显著被抑制(为刺激组的3.10％,4.47％和9.53％,10.91％).MTB-HAg刺激后Vγ9Vδ2T细胞中IFN-γ和TNF-α产生细胞比例在BTN3A1阻断组显著减少,Vγ9Vδ2 T细胞扩增数量和细胞增殖活性在BTN3A1阻断组也显著减少或降低.与PAg阻断组明显被抑制的结果相似.结论 BTN3A1促进MTB-HAg诱导的外周血Vγ9Vδ2 T细胞活化增殖.

大量证据表明microRNA(miRNA)通过靶向调控靶基因的表达从而在肿瘤侵袭与转移中发挥重要作用.然而关于microRNA-216b-5p(miR-216b-5p)通过靶向嗜乳脂蛋白第3亚家族膜蛋白A2(butyrophilin subfamily 3 member A2,BTN3A2)促进胶质瘤侵袭与转移的机制尚不明确.本研究通过GSE15824与GSE4290差异表达分析筛选出同时在2个芯片中表达上调的BTN3A2(P＜0.05).生存曲线结果显示,高表达BTN3A2病人总生存期明显下降(P＜0.001).表达量分析结果显示,BTN3A2表达随WHO分级升高而升高(P＜0.05),同时1p/19q未联合缺失与IDH突变型病人BTN3A2表达升高(P＜0.001).基因集富集分析(gene set enrichment analysis,GSEA)结果显示,BTN3A2与众多癌症相关通路有关(P＜0.05);Western印迹结果显示,BTN3A2在7例胶质瘤组织和胶质瘤细胞系U87、U251和LN-229中表达上调,过表达miR-216b-5p(miR-216b-5p mimics)后BTN3A2蛋白表达水平降低;Transwell结果显示,转染BTN3A2干扰质粒(si-BTN3A2)和miR-216b-5p mimics后可以抑制LN-229细胞体外迁移与侵袭能力(P＜0.05);在线预测网站证实,miR-216b-5p为BTN3A2潜在靶基因;生存曲线结果显示,与低表达miR-216b-5p病人相比,高表达病人生存率明显上调(P = 0.025);荧光定量RT-PCR结果显示,miR-216b-5p在胶质瘤U87、U251和LN-229细胞中表达下降(P＜0.05);双荧光素酶结果显示,BTN3A2存在与miR-216b-5p的结合靶点(P＜0.05);综上所述,BTN3A2可能通过结合miR-216b-5p促进胶质瘤细胞LN-229的迁移以及侵袭.

目的:观察耳穴揿针治疗对剖宫产初产妇母乳喂养及泌乳功能的影响,并从乳脂分泌相关基因角度探讨其作用机制.方法:将100例剖宫产初产妇随机分为观察组(50例,脱落3例)和对照组(50例,剔除2例).对照组予产科常规护理;观察组在对照组基础上,给予耳穴揿针治疗 1 次,穴取内分泌、胸、胸椎、神门、交感等,取一侧耳穴,共持续3 d.比较两组初产妇治疗后泌乳启动时间、产后72 h泌乳充足率、产后42 d纯母乳喂养率、母乳喂养评分;实时荧光定量PCR法、Western blot法检测两组初产妇治疗后乳汁反式激活应答DNA结合蛋白(TDP-43)、嗜乳脂蛋白亚家族1成员A1(Btn1A1)、黄嘌呤脱氢酶(XDH)的mRNA及蛋白表达.结果:治疗后,观察组泌乳启动时间早于对照组(P＜0.01),母乳喂养评分高于对照组(P＜0.01);观察组产后72 h泌乳充足率为63.8%(30/47),高于对照组的41.7%(20/48,P＜0.05);观察组产后42 d纯母乳喂养率为72.3%(34/47),高于对照组的47.9%(23/48,P＜0.05).观察组乳汁TDP-43、Btn1A1 mRNA及蛋白表达高于对照组(P＜0.01);两组乳汁XDH mRNA及蛋白表达比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论:在常规护理基础上,加用耳穴揿针治疗可以提前启动剖宫产初产妇泌乳,提高产后泌乳充足率及产后纯母乳喂养率,其作用机制可能与上调TDP-43、Btn1A1表达有关.