目的:评价右美托咪定对机械通气相关性肺损伤(VILI)大鼠细胞外信号调节激酶(ERK)/钠钾ATP酶(Na ＋-K ＋-ATPase)信号通路的影响。 方法:清洁级健康雄性SD大鼠48只，体重270～320 g，4～5月龄，采用随机数字表法分为4组( n＝12)：对照组(C组)、VILI组(V组) 、右美托咪定组(D组)和右美托咪定＋育亨宾(α 2肾上腺素能受体阻断剂)组(DY组) 。C组不行机械通气，自主呼吸空气4 h；V组机械通气(通气频率40次/min，V T 40 ml/kg，I∶E 1∶1，PEEP 0，FiO 2 21%)4 h；D组机械通气前20 min静脉输注右美托咪定5.0 μg/kg，机械通气期间以5.0 μg·kg -1· h -1的速率静脉输注，DY组给予右美托咪定前10 min时静脉注射育亨宾0.1 mg/kg，其余处理同D组。机械通气4 h时，取血标本和肺组织，测定肺湿/干重(W/D)比值与肺通透指数(LPI)，观察肺组织病理学结果，测定肺泡内液体清除率(AFC)。采用Western blot法检测肺组织ERK、磷酸化ERK(p-ERK)、Na ＋-K ＋-ATPase的表达水平。 结果:与C组比较，V组与DY组肺组织LPI和W/D比值升高，AFC降低，p-ERK表达上调，Na ＋-K ＋-ATPase表达下调( P<0.05) ，D组上述指标差异无统计学意义( P>0.05)；与V组比较，D组肺组织LPI和W/D比值降低，AFC升高，p-ERK表达下调，Na ＋-K ＋-ATPase表达上调( P<0.05)，肺组织病理学损伤减轻，DY组上述指标差异无统计学意义( P>0.05)；与D组比较，DY组肺组织LPI和W/D比值升高，AFC降低，p-ERK表达上调，Na ＋-K ＋-ATPase表达下调( P<0.05)，肺组织病理学损伤加重。 结论:右美托咪定减轻大鼠VILI的机制可能与激动α 2肾上腺素能受体，抑制ERK/Na ＋-K ＋-ATPase信号通路有关。

成纤维细胞生长因子受体（FGFR）2基因融合是胆管癌发生的重要机制。靶向FGFR2的药物成为晚期胆管癌的主要治疗方法。以英菲替尼和培米替尼为代表的三磷酸腺苷竞争性FGFR抑制剂可有效延缓肿瘤进展，延长患者生存期，是FGFR2融合型晚期胆管癌患者的首选药物。然而，几乎所有经英菲替尼治疗的晚期胆管癌患者最终都产生耐药，需要联用其他药物治疗。福巴替尼可作为发生V564F突变的英菲替尼耐药性胆管癌患者的后线药物；对于丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）信号通路异常激活所致英菲替尼耐药胆管癌患者，MAPK抑制剂与热休克蛋白90抑制剂可作为新的治疗选择。

目的:分析北京及周边地区以肝病为首发表现的肝豆状核变性（WD）患儿的临床特征及基因突变情况。方法:本研究为回顾性单中心研究。回顾性收集并分析2018年3月至2022年3月在首都儿科研究所附属儿童医院体检以肝病为首发表现的35例WD患儿的临床资料及基因检测结果，并根据致病基因突变类型分组比较患儿的临床特征。结果:35例WD患儿中，男 24例，女11例，中位确诊年龄为5.5（4.0，7.5）岁。所有患儿均有转氨酶增高，其中33例（94.3%）为入托、入学或其他疾病常规体检时发现转氨酶升高，就诊前2周内均无发热、咳嗽，无反复呕吐、腹痛、腹泻，无皮肤黄染，无肢体震颤、步态不稳等不适，仅1例有恶心症状；其余2例中，1例11岁患儿因浮肿就诊，经检查患儿已出现肝硬化门脉高压食管静脉曲张；另1例7岁患儿因恶心、黄疸就诊，以急性肝衰竭起病。33例（94.3%）患儿铜蓝蛋白水平<100 mg/L，16例（45.7%）患儿24 h尿铜>100 μg，2例（5.7%）患儿24 h尿铜<40 μg。35例患儿乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒、巨细胞病毒、EB病毒等病原学检测均阴性，自身免疫性肝炎抗体均阴性。33例体检发现转氨酶异常的WD患儿中，5例（15.2%）腹部超声检查结果未见异常，余患儿存在不同程度肝大、脾大、肝实质回声增强等表现。35例患儿共检测到34种不同的ATP7B等位基因突变，最常见的基因突变位点依次为8号外显子c.2333G>T（P.R778L）、11号外显子c.2621C>T（p.A874V）及13号外显子c.2975C>T（p.P992L）。含有无义、移码或剪接突变的患儿与仅存在错义突变的患儿相比，年龄、转氨酶及24 h尿铜水平比较差异均无统计学意义（ Z=-1.00， t=-0.16， Z=-1.14， Z=-1.03，均 P>0.05）。 结论:儿童WD起病隐匿，对转氨酶升高的患儿需警惕本病，及时进行铜蓝蛋白及尿铜检测，不同基因型WD患儿临床表型未见差异。

目的:基于单细胞转录组测序分析百草枯（PQ）诱导的帕金森病（PD）样小鼠大脑小胶质细胞亚群差异基因和相关信号通路，为阐明PQ致动物大脑PD样改变的机制研究提供线索。方法:于2021年9月，将6周龄C57BL/6雄性小鼠6只随机分为对照组和实验组（每组3只），分别以生理盐水、10.0 mg/kg PQ进行腹腔注射，每3天1次，连续10次注射造模。染毒结束后取小鼠大脑，进行10× Genomics单细胞转录组测序。根据基因表达特征筛选小胶质细胞亚群，进行基因本体（GO）富集分析和京都基因与基因组百科全书（KEGG）富集分析。进一步筛选实验组和对照组间小胶质细胞亚群的差异基因，利用生物信息学工具进行功能显著性富集分析。采用0、60、90 μmol/L的PQ溶液处理小鼠小胶质细胞（BV2细胞），通过实时荧光定量PCR实验验证差异基因己糖激酶2（Hk2）、ATPase H+转运V0亚基b（Atp6v0b）、神经调节蛋白1（Nrg1）的表达情况。结果:根据特征基因肌醇多磷酸-5-磷酸酶d（Inpp5d）和转化生长因子β受体1（Tgfbr1）将Cluster 7和Cluster 20亚群识别为小胶质细胞亚群，且该亚群反映小胶质细胞活化M2表型。生物信息学分析结果显示，所识别小胶质细胞亚群特征基因均富集到内吞作用；在分子功能方面主要富集跨膜受体蛋白激酶活性和细胞因子结合等功能。Cluster 7亚群上调基因主要富集于溶酶体通路、内吞作用等通路；下调基因主要富集于神经退行性疾病等信号通路。Cluster 20亚群上调基因主要富集于与PD相关的信号通路；下调基因主要富集于环磷酸腺苷（cAMP）信号传导途径、神经系统发育、突触功能等信号通路。实时荧光定量PCR检测结果显示，与0 μmol/L比较，90 μmol/L PQ溶液处理后BV2细胞的Hk2 mRNA和Atp6v0b mRNA表达水平升高，Nrg1 mRNA表达水平降低，差异均有统计学意义（ P<0.05）。 结论:小胶质细胞在PQ诱导的PD样小鼠模型中被激活，且向M2表型极化，其功能与溶酶体（内吞）、突触功能及PD相关信号通路的调节有关。

耳石是附着于内耳椭圆囊、球囊囊斑上的钙盐结晶（主要成分为碳酸钙，还有少部分磷酸钙等），是囊斑的重要组成部分，在维持前庭器官正常功能方面不可或缺。耳石调节蛋白，如质膜钙ATP酶异构体2（plasma membrane Ca 2+-ATPase isoform 2，PMCA2）、Pendrin蛋白、碳酸酐酶（carbonic anhydrase，CA）、瞬时感受器电位V家族5/6（transient receptor potential vanilloid 5/6，TRPV5/6）等，在耳石的形成和维持过程中发挥重要作用。这些调节蛋白的表达异常、功能缺陷可导致耳石微环境Ca 2+、HCO 3-分泌障碍、内淋巴pH值下降及Ca 2+-HCO 3-比例失调，引起耳石形态结构、功能发生变化，从而导致前庭疾病（如良性阵发性位置性眩晕）。本文对耳石调节蛋白相关研究进行了总结，为相关基础及临床研究提供思路。

ATP6V1B2(ATPase H ＋ transporting V1 subunit B2)基因突变可导致显性遗传性耳聋-甲发育不全(dominant deafness and onychodystrophy，DDOD，MIM124480)综合征和Zimmermann-Laband综合征2(ZLS2，MIM616455)。DDOD综合征的患者临床表现为先天性感音神经性耳聋和甲发育不良，最新研究表明患者还存在学习和认知问题。ZLS2综合征的患者表现为牙龈异常增生、甲发育不良和智力障碍，但是若突变位点偏向ATP6V1B2蛋白中心，则突出表现为智力障碍和癫痫，而没有明显的牙龈异常增生和甲发育不良。ATP6V1B2基因编码液泡型质子转运ATPase蛋白(vacuolar proton transporter ATPase，V-ATPase)V1结构域的中B2亚基，V-ATPase对维持细胞内和细胞器正常的酸碱环境至关重要。目前认为该基因的致病性变异所导致的V-ATPase功能障碍和溶酶体酸化异常可能是DDOD综合征和ZLS2发病的分子基础。对Atp6v1b2 c．1516C>T基因敲入小鼠的深入研究发现：Atp6v1b2 Arg506X / Arg506X的小鼠存在明显认知障碍，海马CA1区受损可能是其病理基础。B2亚基和E亚基的相互作用减弱可能是V-ATPase功能障碍的潜在分子机制。深入分析比较ATP6V1B2基因致病突变所导致的疾病表型，并对致病突变进行功能研究有着重要的意义。

目的:探究硫化氢的抗癫痫机制即调控环磷酸鸟苷/蛋白激酶G（cGMP/PKG）信号通路对三磷酸腺苷敏感性钾通道（KATP）亚基Kir6.2表达的影响。方法:将60只SD大鼠按随机数字表法分为6个组（每组10只）：（1）正常对照组；（2）癫痫组；（3）硫化氢供体干预组；（4）硫化氢供体加PKG抑制剂（KT5823）组；（5）硫化氢供体加KATP抑制剂（格列本脲）组；（6）硫化氢供体正常对照组。采用腹腔注射戊四氮致大鼠癫痫发作，记录潜伏期、首次发作级别、持续时间；记录癫痫发作时海马脑电图的变化；采用 蛋白质印迹法和实时荧光定量聚合酶链反应法检测海马组织中PKG、Kir6.2 mRNA和蛋白的表达水平，酶联免疫吸附测定法检测海马组织中cGMP、磷酸化PKG的浓度。结果:癫痫组出现Ⅳ~Ⅴ级发作，级别为4.500（4.000，4.875）级，潜伏期短［（10.37±8.21） min］， 持续时间长［（69.50±24.37） s］。与癫痫组相比，硫化氢供体干预组的发作级别降低（ P=0.004），潜伏期延长（ P<0.001）和持续时间缩短（ P<0.001）。硫化氢供体加PKG抑制剂组与硫化氢供体干预组相比，潜伏期缩短（ P<0.001），持续时间延长（ P<0.001）。硫化氢供体干预组癫痫波明显减少，波幅与癫痫组相比差异有统计学意义（ P<0.001）；硫化氢供体加PKG抑制剂组与硫化氢供体干预组相比癫痫波增加，波幅增大（ P<0.001）。组间比较结果提示，各组PKG mRNA和蛋白的表达水平存在差异（分别为 n=5， H=26.714， P<0.001和 n=5， F=30.597， P<0.001）；其中与正常对照组相比，癫痫组PKG mRNA（分别为1.000±0.001和0.782±0.064， P=0.023）和蛋白（分别为0.550±0.037和0.145±0.020， P=0.042）的表达水平显著下降。组间比较结果提示，各组Kir6.2 mRNA和蛋白的表达水平存在差异（分别为 n=5， H=27.761， P<0.001和 n=5， F=60.659， P<0.001）；其中与正常对照组相比，癫痫组Kir6.2 mRNA（分别为1.000±0.001和0.897±0.033， P=0.004）和蛋白（分别为0.384±0.035和0.215±0.016， P=0.024）的表达水平显著下降，cGMP（ P<0.001）、磷酸化PKG（ P<0.001）的浓度降低；与癫痫组相比，硫化氢供体干预组PKG mRNA（ P=0.047）、Kir6.2 mRNA（ P=0.011）、PKG 蛋白（ P<0.001）和Kir6.2蛋白（ P<0.001）的表达水平则上升，cGMP、磷酸化PKG的浓度升高（均 P<0.001）；尤其是与硫化氢干预组相比，硫化氢供体加PKG抑制剂组PKG mRNA（ P=0.015）、Kir6.2 mRNA（ P=0.013）、PKG 蛋白（ P=0.027）和Kir6.2蛋白（ P=0.017）的表达水平下降，cGMP（ P=0.005）、磷酸化PKG（ P<0.001）的浓度降低。 结论:硫化氢可抑制大鼠癫痫发作，其机制之一可能与激活海马中cGMP/PKG信号通路上调KATP通道亚基Kir6.2的表达从而降低海马的兴奋性有关。

目的 探究激肽释放酶-10(KLK10)在甲状腺乳头状癌(PTC)进展中的作用和调节机制.方法 实时荧光定量PCR和蛋白免疫印迹法检测PTC患者组织和细胞系中KLK10表达水平.通过CCK-8和Annexin-V/PI凋 亡检测试剂盒分别检测细胞活力和凋亡率.此外,测定各组细胞葡萄糖消耗、乳酸产生和ATP浓度.蛋白免疫印迹检测FAK/SRC/PI3K/AKT轴相关蛋白表达.结果 与正常组相比,PTC组织和细胞中KLK10 mRNA和蛋白水平增加,具有显著性差异(P＜0.01).沉默KLK10细胞活力较对照组减弱,而细胞凋亡较对照组增强.同时,与si-NC组相比,si-KLK10组葡萄糖消耗、乳酸产生和ATP浓度均减少,具有显著性差异(P＜0.01).而KLK10过表达组的结果与沉默KLK10组相反.此外,与对照组相比,KLK10过表达组FAK、SRC、PI3K和AKT的磷酸化水平增加.结论 KLK10通过FAK/SRC/PI3K/AKT轴调节甲状腺乳头状癌患者葡萄糖代谢和恶性进展.

目的:探讨苦柯胺B(KB)对脂多糖(LPS)诱导的人单核细胞白血病THP-1细胞核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)/半胱氨酸蛋白酶-1(Caspase-1)/消皮素D(GSDMD)焦亡通路的调控作用.方法:THP-1细胞经100 ng/mL佛波酯(PMA)诱导24h成为巨噬细胞,采用CCK-8法检测KB对细胞活力的影响,确定合适的浓度用于后续实验;由LPS联合三磷酸腺苷(ATP)诱导建立巨噬细胞炎症损伤模型(LPS组),采用不同浓度KB及NLRP3炎症小体抑制剂MCC950处理细胞,通过实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测各组NLRP3、Caspase-1、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)、白细胞介素(IL)-1β、GSDMD及高迁移率族蛋白B1(HMGB-1)mRNA表达,采用western blotting法检测炎症小体组分及焦亡相关蛋白的表达,酶联免疫吸附试验(ELISA)测定细胞上清液IL-1β的含量,检测细胞上清液乳酸脱氢酶(LDH)释放量,Annexin-V-PE/7-AAD染色检测细胞凋亡.结果:KB浓度为12.5～400 μmol/L范围内对THP-1细胞活力无明显影响.与对照组(未处理细胞)比较,LPS组NLRP3、Caspase-1、IL-1β、GSDMD、HMGB-1 mRNA表达上调,经MCC950或KB处理后,上述mRNA表达水平较LPS组下降(均P＜0.05).与对照组比较,LPS组NLRP3、Caspase-1、Cleaved Caspase-1、GSDMD、GSDMD-NT、HMGB1蛋白表达量均较对照组升高,经MCC950或KB处理后上述蛋白表达下调,细胞培养上清液中IL-1β分泌量和LDH释放量降低(均P＜0.05),细胞凋亡减少.结论:KB可通过抑制NLRP3/Caspase-1/GSDMD通路介导的焦亡来改善LPS诱导的THP-1细胞炎症.

目的:探讨下调微小RNA-208a(miR-208a)对结直肠癌细胞5-氟尿嘧啶(5-FU)耐药的影响,阐明其相关分子机制.方法:采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测结直肠癌5-FU耐药细胞株HT-29/5-FU及其亲本HT-29细胞中miR-208a和分泌型卷曲相关蛋白1(SFRP1)mRNA表达水平.以HT-29/5-FU细胞为研究对象,将miR-208a抑制物(miR-208a inhibitor)质粒及其阴性对照质粒(inbibitor-NC)和SFRP1小干扰质粒(si-SFRP1)及其阴性对照质粒(si-NC)分别或同时转染至HT-29/5-FU细胞中,联合5-FU处理,将细胞分为空白组、inhibitor-NC组、miR-208a inhibitor组、miR-208a inhibitor+si-NC组和 miR-208a inhibitor+si-SFRP1 组.MTT 法检测各组细胞增殖活性并计算耐药指数,Annexin V-FITC/PI双染法结合流式细胞术检测不同浓度5-FU作用后各组细胞凋亡率,W estern blotting法检测各组细胞中SFRP1、β-连环蛋白(β-catenin)、P-糖蛋白(P-gp)和ATP结合盒B亚家族成员1转运蛋白(ABCB1)蛋白表达水平.双荧光素酶报告基因实验验证miR-208a与SFRP1的靶向关系.结果:与HT-29细胞比较,HT-29/5-FU细胞中miR-208a表达水平升高(P＜0.05),SFRP1 mRNA表达水平降低(P＜0.05).与 inhibitor-NC组比较,miR-208a inhibitor组细胞增殖活性降低(P＜0.05),耐药指数降低,细胞凋亡率升高(P＜0.05),细胞中β-catenin、P-gp和ABCB1蛋白表达水平降低(P＜0.05).双荧光素酶报告基因实验提示SFRP1是miR-208a靶基因,且miR-208a 可负向调控 SFRP1 的表达.与 miR-208a inhibitor+si-NC 组 比较,miR-208a inhibitor+si-SFRP1组细胞增殖活性升高(P＜0.05),耐药指数升高,细胞凋亡率降低(P＜0.05),细胞中β-catenin、P-gp和ABCB1蛋白表达水平升高(P＜0.05).结论:下调miR-208a可通过靶向上调SFRP1表达抑制Wnt信号通路的转导,进而改善HT-29/5-FU细胞对5-FU的耐药.