目的:探究X-染色体连锁凋亡抑制蛋白相关因子1(XAF1)对人胃肠道间质瘤(GIST)细胞中半胱氨酸蛋白酶-1(Caspase 1)介导的细胞焦亡的影响及机制.方法:实时荧光定量 PCR 和 West-ern blot检测人正常胃黏膜上皮细胞系(RGM-1)和 GIST 细胞系(GIST-T1、GIST-430、GIST-882)中XAF1 的表达水平;采用脂质体介导转染法将pcDNA3.1-XAF1 重组质粒染进GIST-882 细胞,以构建高表达XAF1 的GIST-882 细胞.GIST-882 细胞分为对照组、pcDNA3.1 组(转染 pcDNA3.1 空载体质粒)、pcDNA3.1-XAF1 组(转染pcDNA3.1-XAF1 重组质粒)、pcDNA3.1-XAF1+Rap 组(转染 pcDNA3.1-XAF1 重组质粒并给予自噬激活剂雷帕霉素处理),免疫荧光染色检测各组细胞内微管相关蛋白 1 轻链3(LC3)表达情况,Western blot 检测各组细胞中 LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值与 Beclin1 蛋白表达水平,ELISA法检测各组细胞上清中白细胞介素,IL-1β、IL-18 含量,乳酸脱氢酶(LDH)释放实验检测各组细胞LDH释放率,Western blot检测各组细胞中Caspase-1 及其活化形式 cleaved-Caspase-1、NOD 样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)、消皮素 D(GSDMD)蛋白表达水平.结果:与RGM-1 细胞比较,GIST-T1、GIST-430、GIST-882 细胞中XAF1 mRNA和蛋白相对表达量显著减少(P<0.05);细胞转染后,pcD-NA3.1-XAF1 组GIST-882 细胞中XAF1 mRNA和蛋白相对表达量均显著高于pcDNA3.1 组、对照组(P<0.05).与对照组比较,pcDNA3.1-XAF1 组 GIST-882 细胞内 LC3 荧光强度明显减弱,LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值、Beclin1 蛋白相对表达量显著减少(P<0.05),细胞上清液 IL-1β、IL-18 含量及 LDH 释放率显著升高(P<0.05),Caspase-1、cleaved-Caspase-1、NLRP3、GSDMD蛋白相对表达量也显著增加(P<0.05);与pcDNA3.1-XAF1 组比较,pcDNA3.1-XAF1+Rap 组 GIST-882 细胞内 LC3 荧光强度明显增强,LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值、Beclin1 蛋白相对表达量显著增加(P<0.05),同时,细胞上清液 IL-1β、IL-18 含量及LDH释放率显著下降(P<0.05),Caspase-1、cleaved-Caspase-1、NLRP3、GSDMD 蛋白相对表达量也显著减少(P<0.05).结论:XAF1 在 GIST 细胞中表达下降,提高 XAF1 表达能通过抑制自噬从而促进Caspase 1 介导的GIST细胞焦亡,发挥抗肿瘤作用.

目的 探讨缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)与X染色体连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)在人卵巢癌中的表达及意义.方法 用免疫组织化学技术法检测人正常卵巢组织标本10 例、良性卵巢肿瘤标本10 例、交界性卵巢肿瘤标本10 例及恶性卵巢癌组织标本30 例中HIF-1α和XIAP的表达情况;培养人卵巢癌细胞系SKOV3,向细胞培养瓶中加入HIF-1α激动剂和抑制剂,提取细胞总RNA,用RT-PCR技术观察XIAP和HIF-1α 基因表达变化.结果 XIAP、HIF-1α在恶性上皮性卵巢癌组及交界性肿瘤组表达率均明显高于良性卵巢肿瘤组(P<0.05).恶性上皮性卵巢癌组织中HIF-1α与XIAP在临床分期晚期(Ⅲ期和Ⅳ期)组的阳性表达率明显高于临床分期早期(Ⅰ期和Ⅱ期)组(P<0.05),与患者年龄、病理分型和淋巴结转移无关(P>0.05).在恶性上皮性卵巢癌中HIF-1α与XIAP呈正相关(P<0.05).随缺氧时间延长,SKOV3 细胞系中HIF-1αmRNA表达量渐增;低氧24h时HIF-1αmRNA表达量达高峰,36h时HIF-1αmRNA表达量有所回落;添加HIF-1α抑制剂雷帕酶素后,HIF-1αmRNA表达量明显减少,XIAPmRNA亦减少.SKOV3 细胞系中XIAP mRNA随HIF-1αmRNA而变化.结论 HIF-1α和XIAP可能参与了恶性卵巢肿瘤的发生;HIF-1α和XIAP的高表达可能提示预后不良;HIF-1α对XIAP可能存在调控作用,两者可能协同促进卵巢癌的发生.

目的 观察不同浓度中药荜茇活性成分荜茇酰胺作用不同时间对胃癌MKN45细胞增殖的影响,并探讨其可能的作用机制.方法 将培养至对数期的胃癌细胞株MKN45用不同浓度的荜茇酰胺处理后,选择10μmol/L荜茇酰胺用于后续实验,设定空白对照组、3 mmol/L抗氧化剂N-乙酰-L-半胱氨酸(NAC)组、10μmol/L荜茇酰胺组和3 mmol/L NAC预处理+10μmol/L荜茇酰胺组.采用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法测定细胞活性;采用流式细胞仪检测细胞周期、细胞凋亡率、活性氧簇(ROS)水平;采用蛋白质免疫印迹试验(Western Blot)检测通路中相关蛋白p21、X染色体连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)、剪切聚腺苷二磷酸-核糖多聚酶(PARP)、天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-9(caspase-9)的表达情况.结果 ① 细胞活性:荜茇酰胺可抑制MKN45细胞活性,其作用呈浓度和时间的正相关性(均r>0.8,P<0.05);②G1期阻滞:荜茇酰胺可诱导MKN45细胞G1期阻滞,其作用呈浓度正相关性(均r>0.8,P<0.05),0、5、7.5、10μmol/L荜茇酰胺作用下G1期细胞为(35.33±3.56)％、(41.42±4.04)％、(48.78±5.24)％、(55.12±5.78)％;③ 细胞凋亡:荜茇酰胺可诱导MKN45细胞凋亡,其作用呈浓度依赖性,0、5、7.5、10μmol/L荜茇酰胺作用下细胞凋亡率分别为(9.21±2.13)％、(13.82±3.45)％、(19.66±4.73)％、(25.21±5.05)％;④caspase细胞凋亡途径:0、5、7.5、10μmol/L荜茇酰胺可下调抗凋亡蛋白XIAP表达,上调剪切caspase-9及剪切PARP表达(XIAP为0.432±0.101、0.120±0.022、0.023±0.005、0.005±0.001,剪切caspase-9为0.003±0.001、0.007±0.001、0.225±0.049、0.649±0.132,剪切PARP为0.005±0.001、0.014±0.003、0.428±0.152、0.895±0.111);即荜茇酰胺可激活caspase依赖性凋亡途径,其作用呈浓度依赖性;⑤ROS-p53细胞凋亡途径:荜茇酰胺能上调ROS、p53、p21、p53凋亡调控因子(PUMA)表达,其作用呈浓度依赖性,经NAC处理后,ROS水平降低为(850.48±124.53)U/L,MKN45细胞活性上升为(73.45±6.12)％,p53降低为0.732±0.152、剪切PARP蛋白表达降低为0.487±0.108.结论 荜茇酰胺可抑制胃癌细胞MKN45增殖,降低其活性,阻滞细胞周期G1期,诱导凋亡,可能的作用机制为提高细胞ROS水平,激活p53与caspase凋亡途径有关.

目的:研究X-染色体连锁凋亡抑制蛋白(X-chromosome-linked inhibitior of apoptosis protein,XIAP)相关因子1(XIAP associated factor 1,XAF1)在口腔鳞癌组织中的表达及临床意义,进一步观察过表达XAF1对口腔鳞癌CAL27细胞增殖、克隆形成和凋亡的影响.方法:应用免疫组织化学方法检测64例口腔鳞癌及14例正常口腔黏膜组织标本中XAF1蛋白的表达,分析XAF1表达水平与患者临床病理特征的相关性.CAL27细胞转染XAF1表达质粒,Real-time PCR检测转染24 h时XAF1 mRNA的表达;倒置显微镜观察细胞形态变化;CCK8和平板克隆实验检测过表达XAF1对细胞生长的影响;流式细胞仪和Western Blot检测细胞凋亡的影响.结果:XAF1蛋白在口腔鳞癌组织表达较正常口腔黏膜上皮组织降低.XAF1的表达与患者的TNM分期相关.过表达XAF1抑制口腔鳞状细胞癌CAL27细胞的增殖和克隆形成,凋亡细胞百分比和cleaved-PARP表达增加.结论:XAF1在口腔鳞癌组织中表达降低,可能与口腔鳞癌的进展相关.过表达XAF1抑制口腔鳞状细胞癌细胞的生长,促进细胞凋亡.

目的 探讨X染色体连锁的凋亡抑制蛋白(XIAP)、转化生长因子-β1(TGF-β1)和波形蛋白(vimentin)在乳腺癌中的表达情况及临床意义.方法 选取82例乳腺癌患者的乳腺癌组织标本及其癌旁正常组织标本.采用免疫组织化学染色法检测不同组织中XIAP、TGF-β1和vimentin的阳性表达情况,分析乳腺癌组织中XIAP、TGF-β1和vimentin的阳性表达情况与患者临床特征的关系,并对乳腺癌组织中XIAP、TGF-β1和vimentin表达的相关性进行分析.结果 XIAP、TGF-β1、vimentin在乳腺癌组织中的阳性表达率均明显高于癌旁正常组织,差异均有统计学意义(P﹤0.01).TNM分期为Ⅲ～Ⅳ期、有淋巴结转移乳腺癌患者乳腺癌组织中XIAP、TGF-β1和vi-mentin的阳性表达率均高于TNM分期为Ⅰ～Ⅱ期、无淋巴结转移的乳腺癌患者,差异均有统计学意义(P﹤0.05).不同年龄、肿瘤直径、肿瘤分化程度乳腺癌患者乳腺癌组织中XIAP、TGF-β1和vimentin的阳性表达率比较,差异均无统计学意义(P﹥0.05).Pearson相关性分析结果显示,乳腺癌组织中XIAP与TGF-β1的表达、XIAP与vimentin的表达、TGF-β1与vimentin的表达均呈明显正相关(r=0.543、0.584、0.657,P﹤0.01).结论 XIAP、TGF-β1和vimentin在乳腺癌组织中的表达水平较高,可作为判断乳腺癌发生和淋巴结转移的参考指标.

细胞凋亡异常是导致肿瘤化疗耐药的重要因素之一.目前研究证实,X染色体连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)在细胞凋亡抑制中扮演关键角色.在多数化疗耐药的妇科肿瘤细胞中,XIAP过表达,XIAP相关因子1(XAF1)则低表达或缺失.现有研究结果发现,顺铂耐药卵巢癌中,XAF1可拮抗XIAP的抗凋亡作用,逆转XIAP对细胞的保护作用.笔者拟针对XIAP、XAF1与妇科肿瘤化疗耐药关系的研究现状进行阐述,旨在为临床防治肿瘤化疗耐药提供新思路.

目的 探讨miR-135b-3p对甲状腺癌细胞迁移、侵袭和放射敏感性的影响以及其可能的调控机制.方法 培养正常甲状腺细胞Nthy-ori 3-1、甲状腺癌细胞K1和TPC-1,RT-qPCR检测细胞中miR-135b-3p表达,Western blot检测细胞中X染色体连锁凋亡抑制蛋白相关因子1(XAF1)表达.转染anti-miR-135b-3p至TPC-1细胞抑制miR-135b-3p表达,Transwell、Western blot及克隆形成实验分别检测抑制miR-135b-3p表达对TPC-1细胞迁移和侵袭、E-cadherin和MMP-2蛋白表达及对TPC-1细胞放射敏感性的影响.双荧光素酶报告基因实验验证miR-135b-3p与XAF1之间的靶向调控关系.结果 与Nthy-ori 3-1细胞相比,K1和TPC-1细胞中miR-135b-3p表达水平显著升高(P<0.05),XAF1蛋白表达水平显著降低(P<0.05).抑制miR-135b-3p表达可抑制TPC-1细胞的迁移和侵袭能力(P<0.05),促进TPC-1细胞E-cadherin蛋白表达(P<0.05),抑制MMP-2蛋白表达(P<0.05),增强TPC-1细胞的放射敏感性(P<0.05).miR-135b-3p靶向负调控XAF1表达.抑制XAF1表达可降低抑制miR-135b-3p表达对TPC-1细胞迁移、侵袭及放射敏感性的影响.结论 miR-135b-3p通过下调XAF1表达促进甲状腺癌细胞的迁移和侵袭能力,并降低其放射增敏性,是甲状腺癌的潜在治疗靶点.

目的 观察子宫内膜癌组织X染色体连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)、线粒体促凋亡蛋白(Smac)、X染色体连锁凋亡抑制蛋白相关因子1(XAF-1)表达变化,并探讨其临床意义.方法 选择子宫内膜癌患者90例,取手术切除的子宫内膜癌组织及其配对的癌旁正常组织,采用RT-qPCR法检测XIAP、Smac、XAF-1 mRNA表达.比较子宫内膜癌组织与癌旁正常组织XIAP、Smac、XAF-1 mRNA表达差异.分析子宫内膜癌组织XIAP、Smac、XAF-1 mRNA表达与患者临床病理特征的关系以及三者之间的关系.结果 子宫内膜癌组织XIAP mRNA相对表达量高于癌旁正常组织,Smac、XAF-1 mRNA相对表达量低于癌旁正常组织(P均＜0.05).子宫内膜癌组织XIAP、Smac、XAF-1 mRNA相对表达量均与子宫肌层浸润、临床分期、组织分化程度、淋巴结转移有关(P均＜0.05),而与年龄、肿瘤直径、病理类型无关(P均＞0.05).子宫内膜癌组织XIAP mRNA相对表达量与Smac、XAF-1 mRNA相对表达量均呈负相关关系(r分别为-0.615、-0.667,P均＜0.01),Smac mRNA相对表达量与XAF-1 mRNA相对表达量呈正相关关系(r =0.697,P＜0.01).结论 子宫内膜癌组织XIAP表达上调,Smac、XAF-1表达下调,三者表达变化可能共同促进肿瘤的发生、发展.

目的 探讨上皮性卵巢癌组织中X染色体连锁的凋亡抑制蛋白(XIAP)、缺氧诱导因子-1a(HIF-1a)表达及临床意义.方法 收集上皮性卵巢癌组织标本92例作为研究对象,同时选取良性卵巢肿瘤60例、正常卵巢44例作为对照,采用免疫组化染色法检测XIAP、HIF-1a表达,对比3组在XIAP、HIF-1a表达上的差异.结果 上皮性卵巢癌XIAP、HIF-1a阳性表达率分别为81.52％和68.48％,明显高于良性卵巢肿瘤和正常卵巢(P<0.05);良性卵巢肿瘤和正常卵巢XIAP、HIF-1a阳性表达率比较差异无统计学意义(P>0.05).FIGO分期Ⅲ ～Ⅳ期患者XIAP阳性表达率为97.62％、HIF-1a阳性表达率为92.86％,均明显高于Ⅰ～Ⅱ期患者(P<0.05);上皮性卵巢癌组织XIAP与HIF-1a表达呈正相关(γs=0.340,P<0.05).结论 上皮性卵巢癌组织中XIAP、HIF-1a表达上调,与FIGO分期有关,两者间表达存在正相关关系.

目的 研究甲基莲心碱对腺样囊性癌生长的作用及其作用机制.方法 涎腺腺样囊性癌细胞SACC-83随机分为对照组、甲基莲心碱低剂量组、甲基莲心碱中剂量组、甲基莲心碱高剂量组.甲基莲心碱低、中、高剂量组分别用10,20,40μmol·L-1甲基莲心碱处理细胞,对照组细胞用等量的培养基处理.以噻唑蓝(MTT)法检测各组细胞增殖情况;以流式细胞术检测各组细胞凋亡情况;以Transwell检测细胞迁移;以蛋白质印迹(Western Blot)法检测高温需求因子A2(Omi/HtrA2)、X染色体连锁的凋亡抑制蛋白(XIAP)表达水平以及增殖、凋亡、迁移相关蛋白表达水平.结果 对照组和甲基莲心碱低、中、高剂量组细胞凋亡率分别为(3.31±0.68)％,(13.43±1.76)％,(24.71±2.43)％和(42.37±2.95)％,迁移细胞数分别为134.18±8.28,94.86±6.90,68.81±6.43和50.24±5.27.对照组细胞中Omi/HtrA2蛋白、XIAP蛋白、细胞周期蛋白D1(CyclinD1)、切割型胱天蛋白酶-3(cleaved caspase-3)蛋白和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)蛋白的表达水平分别为0.91±0.08,0.73±0.03,0.78±0.09,0.22±0.04和0.93±0.07,不同剂量甲基莲心碱作用后Omi/HtrA2蛋白、XIAP蛋白、CyclinD1蛋白和MMP-9蛋白的表达水平明显降低,cleaved caspase-3蛋白表达水平明显升高,差异均有统计学意义(均P<0.05),且甲基莲心碱对SACC-83细胞的作用具有剂量依赖性.结论 甲基莲心碱可以通过调控Omi/HtrA2和XIAP蛋白对腺样囊性癌细胞的生长起到抑制作用.