目的:探讨依托咪酯对脂多糖（lipopolysaccharide, LPS）诱导心肌细胞炎症、凋亡的影响及其可能作用机制。方法:将体外培养的大鼠心肌细胞H9c2采用随机数字表法分为5组（每组3个复孔，每组实验重复3次）：正常对照组（Con组）、脂多糖组（LPS组）、脂多糖+20 μmol/L依托咪酯组（E-L组）、脂多糖+50 μmol/L依托咪酯组（E-M组）、脂多糖+100 μmol/L依托咪酯组（E-H组）。Con组正常培养，LPS组加入含浓度1 mg/L LPS的杜氏改良培养基（dulbecco's modified eagle medium, DMEM）培养24 h，E-L组、E-M组、E-H组分别使用不同浓度（20、50、100 μmol/L）依托咪酯与1 mg/L LPS的DMEM培养液培养24 h。再次选取正常培养的心肌细胞采用随机数字表法分为两组（每组3个复孔，每组实验重复3次）：脂多糖+100 μmol/L依托咪酯+anti-微RNA（microRNA, miR）-NC组（anti-miR-NC组）和脂多糖+100 μmol/L依托咪酯+anti-miR-214-3p组（anti-miR-214-3p组）。anti-miR-NC组和anti-miR-214-3p组分别将anti-miR-NC和anti-miR-214-3p转染至心肌细胞，加入含有100 μmol/L依托咪酯与1 mg/L LPS的DMEM培养液培养24 h。ELISA法检测TNF-α、IL-6、IL-1β水平，流式细胞术检测细胞凋亡率，实时荧光定量PCR（quantitative real-time PCR, qRT-PCR）检测miR-214-3p与转导素β1X连锁受体蛋白质1（transducin β-like 1X related protein 1, TBL1XR1）的表达量，双荧光素酶报告实验验证miR-214-3p与TBL1XR1的靶向调控关系，Western blot法检测TBL1XR1、B淋巴细胞瘤-2（B-cell lymphoma-2, Bcl-2）相关蛋白（Bcl-2-associated X protein, Bax）、Bcl-2的表达量。结果:与Con组比较，LPS组TNF-α、IL-6、IL-1β、Bax水平以及细胞凋亡率、TBL1XR1 mRNA表达升高（ P<0.05），Bcl-2蛋白水平和miR-214-3p表达降低（ P<0.05）；与LPS组比较，E-L组、E-M组、E-H组TNF-α、IL-6、IL-1β、Bax水平以及细胞凋亡率、TBL1XR1 mRNA表达呈剂量依赖性降低（ P<0.05），Bcl-2蛋白水平和miR-214-3p表达呈剂量依赖性升高（ P<0.05）；E-L组、E-M组、E-H组两两比较差异有统计学意义（ P<0.05）。miR-214-3p可负向调控TBL1XR1的表达（ P<0.05）。与anti-miR-NC组比较，anti-miR-214-3p组TNF-α、IL-6、IL-1β、Bax水平以及细胞凋亡率升高（ P<0.05），Bcl-2蛋白水平降低（ P<0.05）。 结论:依托咪酯可通过调控miR-214-3p/TBL1XR1分子轴从而抑制LPS诱导的心肌细胞炎症及凋亡。

目的:研究氢气对肺腺癌A549细胞凋亡的影响及作用机制。方法:本研究为实验研究。常规培养A549细胞，当细胞数量达到实验需要时，采用随机数字表法将细胞分为对照组、20%氢气组、40%氢气组、60%氢气组。对各氢气组细胞分别使用20%、40%、60%氢气干预，干预结束后收集各组细胞使用流式细胞仪检测细胞凋亡情况。使用蛋白质印迹法检测各组A549细胞中X连锁凋亡抑制因子(XLP2)、胱天蛋白酶3(Caspase3)、胱天蛋白酶7(Caspase7)的表达。9只5~6周雄性裸鼠皮下成瘤造模，采用随机数字表法将荷瘤鼠分为空白对照组、氢气组(给予60%浓度氢气吸入，1次/d，4 h/次)、顺铂组(4 mg/kg腹腔注射顺铂，1次/周)，每组3只。免疫组织化学比较3组肿瘤组织中XLP2、Caspase3、Caspase7的表达。结果:对照组、20%氢气组、40%氢气组、60%氢气组细胞凋亡率分别为(1.270±0.096)%、(2.250±0.076)%、(3.080±0.040)%、(7.760±0.050)%，差异有统计学意义( F＝5 186.17， P＝0.001)；与对照组比较，其余3组的细胞凋亡率均升高(均 P<0.001)。对照组、20%氢气组、40%氢气组、60%氢气组中XLP2的相对表达量分别为(0.355±0.012)、(0.300±0.016)、(0.303±0.019)、(0.231±0.022)，差异有统计学意义( F＝7.33， P＝0.011)；与对照组比较，其余3组XLP2的相对表达量均降低(均 P<0.05)。对照组、20%氢气组、40%氢气组、60%氢气组中Caspase7的相对表达量分别为(0.123±0.008)、(0.225±0.009)、(0.335±0.002)、(0.449±0.007)，差异有统计学意义( F＝1 181.95， P<0.001)；与对照组比较，其余3组XLP2的相对表达量均增高(均 P<0.05)。对照组、20%氢气组、40%氢气组、60%氢气组中Caspase3的相对表达量分别为(1.174±0.130)、(1.136±0.167)、(1.194±0.111)、(1.169±0.179)，差异无统计学意义( F＝0.05， P＝0.984)。XLP2主要在细胞质中表达，氢气组、顺铂组、空白对照组中XLP2的表达量分别为(0.041±0.012)、(0.024±0.001)、(0.090±0.033)，差异有统计学意义( F＝8.44， P＝0.018)；氢气组、顺铂组XLP2的表达量均较空白对照组降低(均 P<0.05)，氢气组与顺铂组之间XLP2的表达量比较差异无统计学意义( P>0.05)。Caspase7主要在细胞质中表达，在氢气组、顺铂组、空白对照组中Caspase7的表达量分别为(0.204±0.004)、(0.234±0.007)、(0.122±0.003)，差异有统计学意义( F＝372.42， P<0.001)；氢气组、顺铂组Caspase7的表达量均较空白对照组升高(均 P<0.05)，顺铂组Caspase7的表达量较氢气组升高( P<0.05)。Caspase3主要在胞浆中表达，空白对照组、氢气组、顺铂组中Caspase3的表达量分别为(0.255±0.024)、(0.273±0.109)、(0.287±0.046)，差异无统计学意义( F＝0.16， P＝0.853)。 结论:氢气可促进肺腺癌A549细胞凋亡，降低XLP2在肺腺癌A549细胞和瘤组织中的表达，提高Caspase7在肺腺癌A549细胞和瘤组织中表达。氢气可能通过影响XLP2和Caspase7蛋白表达量，发挥其促进肺癌A549细胞凋亡的作用。

[目的]探讨加减补阳还五汤是否通过沉默信息调节因子 1(SIRT1)途径激活自噬改善糖尿病肾病(DKD)小鼠肾组织损伤.[方法]将DKD小鼠随机分为模型组、中药组,db/m组小鼠作为正常组.给药 8周后,检测小鼠血糖(FBG)、糖化血红蛋白(HBA1c)、总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、尿素氮(BUN)、肌酐(Scr)、尿微量白蛋白(mALB)水平;实时定量反转录聚合酶连锁反应(qRT-PCR)和免疫组化检测小鼠肾组织Wilms肿瘤基因 1(WT1)、nephrin及podocin的表达;蛋白质免疫印迹法(Western blot)检测小鼠肾组织SIRT1、人微管相关蛋白轻链 3B(LC3B)、自噬相关蛋白 7(Agt7)、自噬受体蛋白p62(P62)、Bcl-2 同源结构域蛋白抗体(Beclin1)、B细胞淋巴瘤因子 2(Bcl-2)、BCL-2相关X蛋白(Bax)、半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)蛋白表达;同时光镜观察肾脏病理形态学变化.[结果]中药干预后,小鼠肾脏病理改变轻于模型组;尿微量白蛋白(mAlb)、血脂(TC、TG)下降,肾功能(BUN、Scr)改善;同时抑制了肾组织P62、Bax、Caspase-3 表达,上调了SIRT1、Beclin-1、Agt7、Bcl-2、LC3B-Ⅱ/LC3B-Ⅰ的表达,并改善了肾组织足细胞标志蛋白WT1、nephrin及podocin的表达(P＜0.05或P＜0.01),但对血糖水平无明显影响(P＞0.05).[结论]加减补阳还五汤可通过增强DKD小鼠肾脏细胞自噬,并抑制其凋亡,保护足细胞,进而发挥肾脏保护作用.其中SIRT1 途径可能是其促进自噬的潜在途径.

目的:探讨发状分裂增强子 1(HES-1)对胆固醇刺激下内皮细胞的影响及潜在机制.方法:应用Ea.hy926细胞构建HES-1过表达细胞和HES-1基因敲除细胞.将细胞分为CH组(胆固醇刺激)、GO 组(HES-1过表达+胆固醇刺激)、GD组(HES-1低表达+胆固醇刺激)和NC组(空白对照组).采用流式细胞术检测细胞凋亡情况.采用蛋白质印迹检测凋亡相关蛋白表达水平以及无翼型MMTV家族整合位点(Wnt)/磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)/β-连锁蛋白(β-catenin)信号通路相关蛋白表达水平.采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测血管生成相关因子表达水平.结果:与NC组比较,所有胆固醇处理组凋亡细胞占比显著增加(均 P＜0.05).与CH组比较,GO组凋亡细胞占比显著增加(P＜0.05).与NC组比较,CH组和GO组B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)相关X蛋白(Bax)、半胱天冬酶3(Caspase-3)、Caspase-9、p-BIM/BIM表达显著升高,Bcl-2 表达显著降低(均 P＜0.05);GD组Bax、Caspase-9 表达显著升高,Bcl-2、Caspase-3 表达显著降低(均 P＜0.05).与CH 组比较,GO 组Bax、Caspase-9表达显著升高,Bcl-2表达显著降低(均 P＜0.05);GD组Bax、Bcl-2、Caspase-3、Caspase-9、磷酸化Bcl-2相互作用细胞死亡介质(p-BIM)/BIM表达显著降低(均 P＜0.05).与GO组比较,GD组Bax、Caspase-3、Caspase-9、p-BIM/BIM表达显著降低(均 P＜0.05).与NC组比较,C H组和GO组转化生长因子-β(TGF-β)、胰岛素样生长因子(IGF)、血管内皮生长因子α(VEGF-α)、血小板衍生生长因子(PDGF)表达显著降低(均 P＜0.05);GD组PDGF表达显著降低(P＜0.05).与CH组比较,GO组TGF-β、IGF、VEGF-α、PDGF表达显著降低(均 P＜0.05);GD组TGF-β、IGF、PDGF表达显著升高(均 P＜0.05).与 GO 组比较,GD 组 TGF-β、IGF、VEGF-α、PDGF 表达显著升高(均 P＜0.05).与 NC 组比较,CH 组 HES-1 表达显著升高,p-AKT/AKT、c-myc表达显著降低(均 P＜0.05);GO组HES-1表达显著升高,Wnt、p-AKT/AKT、β-catenin、c-myc表达显著降低(均 P＜0.05);GD组HES-1、Wnt、β-catenin、c-myc表达显著降低,p-AKT/AKT显著升高(均 P＜0.05).与CH组比较,GO组 HES-1表达显著升高,Wnt、p-AKT/AKT、β-catenin、c-myc表达显著降低(均 P＜0.05);GD组 HES-1、Wnt、β-catenin表达显著降低,p-AKT/AKT、c-myc表达显著升高(均 P＜0.05).与GO 组比较,GD组 HES-1 表达显著降低,Wnt、p-AKT/AKT、β-catenin、c-myc表达显著升高(均 P＜0.05).结论:HES-1 过表达可抑制Wnt/PI3K/AKT/β-catenin信号通路,促进细胞凋亡,抑制血管生成相关因子的表达.

目的 总结以克罗恩病为主要临床表现的X连锁凋亡抑制因子(XIAP)缺陷病例的临床特点.方法 报道2016年5月浙江大学医学院附属儿童医院消化科收治的1例XIAP缺陷患儿的缶床表现、治疗、转归和基因测序结果,并以“克罗恩病”“XIAP”为检索词,检索2006年1月至2017年6月中文数据库及PUBMED数据库进行文献复习.结果 患儿男,6岁1月龄,因反复便血2个月余,加重伴发热腹痛2周入院.既往1年余前曾有“噬血细胞综合征、癫痫”病史.入院后完善相关检查,血常规提示轻度贫血(血红蛋白108 g/L);超敏C反应蛋白(86 rg/L)及红细胞沉降率(46 mm/lh)均升高;粪常规白或脓细胞及红细胞阳性;血生化提示低白蛋白血症(25.2 g/L),转氨酶(丙氨酸转氨酶175 U/L、天冬氨酸转氨酶229 U/L)升高,甘油三酯(4.41 mmol/L)升高,铁蛋白(＞1 650.0 μg/L)升高;小肠磁共振水成像:部分结肠、回肠肠壁增厚、强化.胶囊内镜:空肠黏膜多发小溃疡.肠镜提示结肠多发溃疡.肠镜病理:回肠末端及全结肠黏膜慢性活动性炎,部分伴小片坏死溃疡.骨髓细胞学检查可见少量吞噬细胞.诊断为“噬血细胞综合征、克罗恩病、败血症、癫痫、重度营养不良、低蛋白血症”,儿童克罗恩病活动指数(PCDAI)评分37.5分.基因检测发现XIAP基因存在半合子突变c.910G＞TchrX:123022501 p.G304X.父母均未检测出突变.该患儿经英夫利昔单抗治疗及巯嘌呤、糖皮质激素口服,病情缓解,PCDAI评分0分.文献检索共9篇,其中中文0篇,英文9篇,共有111例患者,炎症性肠病样表现约占33.3％,可相继或同时存在噬血细胞综合征、脾肿大等临床表现,单一治疗措施效果欠佳.结论 XIAP缺陷患儿表现多样,在临床表现复杂、对治疗不敏感的男性炎症性肠病患儿中行基因检测,对指导治疗及判断预后有重要意义.

目的 PDCD5和XIAP均为细胞凋亡关键分子,然而晚期胃癌奥沙利铂化疗与PDCD5和XIAP表达水平相关性尚不明确.本研究探讨奥沙利铂对胃癌组织细胞凋亡及凋亡诱导因子程序性细胞死亡蛋白-5(programmed cell death 5,PDCD5)和凋亡抑制因子X-连锁凋亡抑制蛋白(X-linked inhibitor of apoptosis protein,XIAP)表达水平的影响.方法 将活性良好的1×107个MGC-803人胃癌细胞接种于裸鼠背部皮下,制备裸鼠胃癌荷瘤模型,HE染色分析肿瘤组织病理形态学.根据实验目的,将荷瘤小鼠随机分为奥沙利铂组、生理盐水组和空白组,每组6只,接种胃癌细胞2周后,奥沙利铂组予以腹腔给药(25 mg/kg),生理盐水组予以腹腔注射生理盐水(25 mg/kg),空白组不予以特殊处理.每周1次,给药6次后处死动物,剥离肿瘤并组织匀浆,实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR,qPCR)检测各分组细胞凋亡诱导因子PDCD5和凋亡抑制因子XIAP基因表达,蛋白质印迹法评估各组PDCD5和XIAP蛋白表达,并对比分析各分组肿瘤组织质量以评估治疗效果,TUNEL染色检测肿瘤组织内细胞凋亡情况.实验数据采用单因素多样本方差分析.结果 MGC-803人胃癌细胞皮下接种裸鼠2周即可成瘤,成瘤大小约1.5 cm×2.0 cm.qPCR结果显示,与生理盐水组、空白组相比,奥沙利铂组显著上调细胞凋亡诱导因子PDCD5基因表达(F=49.452,P<0.001),降低凋亡抑制因子XIAP基因表达水平,F=12.467,P=0.001.蛋白质印迹法证实,与空白组或生理盐水组相比,奥沙利铂组高表达PDCD5蛋白(F=89.954,P<0.001),低表达XIAP蛋白,F=13.032,P=0.001.处死裸鼠后,对比各分组肿瘤组织重量,奥沙利铂组化疗能使裸鼠MGC-803人胃癌移植瘤体积显著缩小,F=9.828,P=0.002.TUNEL染色证实奥沙利铂组移植瘤内细胞凋亡水平最高,F=117.148,P<0.001.结论 奥沙利铂化疗能显著增加小鼠胃癌组织内凋亡诱导因子PDCD5表达,同时也明显降低凋亡抑制因子XIAP表达,可促进胃癌组织细胞凋亡.

目的 探讨Smac多肽对肺腺癌细胞耐药性的影响及作用机制.方法 培养肺腺癌细胞株A549并诱导产生耐紫杉醇耐药A549/Taxol细胞,分为用Smac多肽处理的观察组及用Smac反向多肽处理的对照组.记录两组细胞增殖活力、细胞内凋亡基因表达量及细胞内耐药基因表达量.结果 两组培养12 h、18 h、24 h的细胞增殖活力比较差异均有统计学意义(P<0.05).与对照组比较,细胞培养24 h后,观察组细胞内Livin、X连锁凋亡抑制蛋白、多耐药基因、肺耐药相关蛋白、拓扑异构酶Ⅱ、谷胱甘肽-s-转移酶-π 的mRNA表达量均显著降低,含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(Caspase)-3、Caspase-7、Caspase-9的mRNA表达量均显著升高,比较差异有统计学意义(P<0.05).结论 Smac多肽通过下调凋亡抑制蛋白及耐药基因的表达来改善肺腺癌细胞的紫杉醇耐药性.

目的 探讨X连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)基因与卵巢癌对紫杉醇耐药的相关性.方法 以5、10、20、40、80、160、320 ng/mL的紫杉醇处理卵巢癌紫杉醇敏感细胞A2780和耐药细胞A2780/T,噻唑蓝(MTT)比色法检测各组细胞的抑制率(IR),逆转录实时荧光定量PCR(RT-qPCR)、蛋白质印记(Western blot)检测紫杉醇100 ng/mL处理A2780和A2780/T细胞后XIAP基因和蛋白的表达;将A2780/T细胞分为空转染组(转染空载体质粒)、小干扰RNA(siRNA)-XIAP(siRNA-XIAP)组(转染siRNA-XIAP质粒)、非特异性转染组(转染非特异性质粒)、空白对照组(不转染质粒),RT-qPCR和Western blot检测各组细胞XIAP基因和蛋白的表达,并加入含不同质量浓度的紫杉醇(0、1 000、1 500、2 000、2 500 ng/mL),流式细胞仪检测细胞凋亡率.结果 不同质量浓度紫杉醇处理后,A2780细胞IR随紫杉醇质量浓度的增加而增高(P＜0.05),A2780/T细胞IR无明显变化.紫杉醇100 ng/mL处理A2780和A2780/T细胞后,A2780细胞XIAP mRNA的表达低于紫杉醇未处理组(P＜0.05),A2780/T细胞中XIAP mRNA的表达与紫杉醇未处理组差异无统计学意义(P＞0.05),但A2780/T细胞XIAPmRNA和蛋白表达均高于A2780紫杉醇处理组(P均＜0.05);siRNA-XIAP组XIAP mRNA和蛋白的表达均低于其他各组(P＜0.05),在紫杉醇2 000 ng/mL及2 500 ng/mL作用下,siRNA-XIAP组凋亡率高于其他各组(P＜0.05).结论 卵巢癌对紫杉醇耐药与XIAP基因的高表达有关,特异性的siRNA可通过降低XIAP的表达,促进细胞凋亡,增加耐药癌细胞对紫杉醇的敏感性.

目的 观察不同浓度中药荜茇活性成分荜茇酰胺作用不同时间对胃癌MKN45细胞增殖的影响,并探讨其可能的作用机制.方法 将培养至对数期的胃癌细胞株MKN45用不同浓度的荜茇酰胺处理后,选择10μmol/L荜茇酰胺用于后续实验,设定空白对照组、3 mmol/L抗氧化剂N-乙酰-L-半胱氨酸(NAC)组、10μmol/L荜茇酰胺组和3 mmol/L NAC预处理+10μmol/L荜茇酰胺组.采用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法测定细胞活性;采用流式细胞仪检测细胞周期、细胞凋亡率、活性氧簇(ROS)水平;采用蛋白质免疫印迹试验(Western Blot)检测通路中相关蛋白p21、X染色体连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)、剪切聚腺苷二磷酸-核糖多聚酶(PARP)、天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-9(caspase-9)的表达情况.结果 ① 细胞活性:荜茇酰胺可抑制MKN45细胞活性,其作用呈浓度和时间的正相关性(均r>0.8,P<0.05);②G1期阻滞:荜茇酰胺可诱导MKN45细胞G1期阻滞,其作用呈浓度正相关性(均r>0.8,P<0.05),0、5、7.5、10μmol/L荜茇酰胺作用下G1期细胞为(35.33±3.56)％、(41.42±4.04)％、(48.78±5.24)％、(55.12±5.78)％;③ 细胞凋亡:荜茇酰胺可诱导MKN45细胞凋亡,其作用呈浓度依赖性,0、5、7.5、10μmol/L荜茇酰胺作用下细胞凋亡率分别为(9.21±2.13)％、(13.82±3.45)％、(19.66±4.73)％、(25.21±5.05)％;④caspase细胞凋亡途径:0、5、7.5、10μmol/L荜茇酰胺可下调抗凋亡蛋白XIAP表达,上调剪切caspase-9及剪切PARP表达(XIAP为0.432±0.101、0.120±0.022、0.023±0.005、0.005±0.001,剪切caspase-9为0.003±0.001、0.007±0.001、0.225±0.049、0.649±0.132,剪切PARP为0.005±0.001、0.014±0.003、0.428±0.152、0.895±0.111);即荜茇酰胺可激活caspase依赖性凋亡途径,其作用呈浓度依赖性;⑤ROS-p53细胞凋亡途径:荜茇酰胺能上调ROS、p53、p21、p53凋亡调控因子(PUMA)表达,其作用呈浓度依赖性,经NAC处理后,ROS水平降低为(850.48±124.53)U/L,MKN45细胞活性上升为(73.45±6.12)％,p53降低为0.732±0.152、剪切PARP蛋白表达降低为0.487±0.108.结论 荜茇酰胺可抑制胃癌细胞MKN45增殖,降低其活性,阻滞细胞周期G1期,诱导凋亡,可能的作用机制为提高细胞ROS水平,激活p53与caspase凋亡途径有关.

目的 研究慢病毒介导的连锁的泛素特异肽酶9(USP9X)基因RNA干扰对人胰腺癌细胞系裸鼠皮下移植瘤的影响.方法 将靶向USP9X基因的干扰小RNA(siRNA)慢病毒(LV-siRNA-USP9X)和阴性对照慢病毒(LV-siRNA-NC)转染至SW1990细胞,并分别作为siUSP9X组和siNC组,未转染细胞作为对照组,分别将3组细胞系接种至裸鼠皮下,比较3组裸鼠接种第30天的移植瘤生长情况和瘤体重量.蛋白质印记(Western blot)法和免疫组织化染色检测3组裸鼠皮下移植瘤中survivin蛋白的表达情况,TUNEL法检测细胞凋亡指数(AI).结果siUSP9X组USP9X蛋白的相对表达量均明显低于siNC组和对照组,差异均有统计学意义(P﹤0.01),干扰效率约为90％.siUSP9X组裸鼠的肿瘤体积明显小于siNC组和对照组裸鼠,且随着接种时间的延长,差异越来越明显.在接种第30天时,siUSP9X组裸鼠瘤体重量均小于siNC组和对照组裸鼠,抑瘤率为52％.siUSP9X组sur-vivin蛋白的相对表达量和阳性表达率均低于siNC组和对照组,AI均高于siNC组和对照组,差异均有统计学意义(P﹤0.05).结论 慢病毒介导的 USP9X 基因沉默可明显抑制人胰腺癌细胞系裸鼠皮下移植瘤的生长,该现象可能与其下调 survivin 蛋白的表达并促进细胞凋亡有关,USP9X 有可能成为胰腺癌基因治疗的一个新靶点.