目的:探讨X染色体连锁的凋亡抑制蛋白(XIAP)、高迁移率族蛋白1(HMGB1)及波形蛋白(Vimentin)在胃癌中的表达及意义。方法:采用免疫组织化学法检测：2016年6月至2019年1月杭州市大江东医院84例胃癌组织及癌旁正常组织中XIAP、HMGB1及Vimentin的表达，并分析三者与临床病理参数的关系，应用SPSS 17.0统计软件分析。结果:XIAP在胃癌组织中(65.48%，55/84)的阳性表达率高于癌旁正常组织(17.86%，15/84， χ2＝50.837， P<0.05)，差异有统计学意义，HMGB1在胃癌组织中(75.00%，63/84)的阳性表达率高于癌旁正常组织(9.52%，8/84， χ2＝73.791， P<0.05)，差异有统计学意义，Vimentin在胃癌组织中(70.23%，59/84)的阳性表达率高于癌旁正常组织(20.24%，17/84， χ2＝42.384， P<0.05)，差异有统计学意义。Ⅲ～Ⅳ期XIAP、HMGB1及Vimentin阳性表达率显著高于Ⅰ～Ⅱ期( χ2＝12.574、9.821， P<0.05)，差异有统计学意义，有淋巴结转移XIAP、HMGB1及Vimentin阳性表达率显著高于无淋巴结转移( χ2＝23.290、25.337， P<0.05)，差异有统计学意义。而胃癌组织中XIAP、HMGB1及Vimentin阳性表达率与年龄、性别、肿瘤大小及分化程度无关。胃癌组织中XIAP与HMGB1表达呈正相关( r＝0.597， P<0.01)，XIAP与Vimentin表达呈正相关( r＝0.621， P<0.01)，HMGB1与Vimentin表达呈正相关( r＝0.634， P<0.01)。 结论:XIAP、HMGB1及Vimentin在胃癌组织中高表达，有助于判断胃癌发生及恶性程度。

目的:探究X-染色体连锁凋亡抑制蛋白相关因子1(XAF1)对人胃肠道间质瘤(GIST)细胞中半胱氨酸蛋白酶-1(Caspase 1)介导的细胞焦亡的影响及机制.方法:实时荧光定量 PCR 和 West-ern blot检测人正常胃黏膜上皮细胞系(RGM-1)和 GIST 细胞系(GIST-T1、GIST-430、GIST-882)中XAF1 的表达水平;采用脂质体介导转染法将pcDNA3.1-XAF1 重组质粒染进GIST-882 细胞,以构建高表达XAF1 的GIST-882 细胞.GIST-882 细胞分为对照组、pcDNA3.1 组(转染 pcDNA3.1 空载体质粒)、pcDNA3.1-XAF1 组(转染pcDNA3.1-XAF1 重组质粒)、pcDNA3.1-XAF1+Rap 组(转染 pcDNA3.1-XAF1 重组质粒并给予自噬激活剂雷帕霉素处理),免疫荧光染色检测各组细胞内微管相关蛋白 1 轻链3(LC3)表达情况,Western blot 检测各组细胞中 LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值与 Beclin1 蛋白表达水平,ELISA法检测各组细胞上清中白细胞介素,IL-1β、IL-18 含量,乳酸脱氢酶(LDH)释放实验检测各组细胞LDH释放率,Western blot检测各组细胞中Caspase-1 及其活化形式 cleaved-Caspase-1、NOD 样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)、消皮素 D(GSDMD)蛋白表达水平.结果:与RGM-1 细胞比较,GIST-T1、GIST-430、GIST-882 细胞中XAF1 mRNA和蛋白相对表达量显著减少(P<0.05);细胞转染后,pcD-NA3.1-XAF1 组GIST-882 细胞中XAF1 mRNA和蛋白相对表达量均显著高于pcDNA3.1 组、对照组(P<0.05).与对照组比较,pcDNA3.1-XAF1 组 GIST-882 细胞内 LC3 荧光强度明显减弱,LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值、Beclin1 蛋白相对表达量显著减少(P<0.05),细胞上清液 IL-1β、IL-18 含量及 LDH 释放率显著升高(P<0.05),Caspase-1、cleaved-Caspase-1、NLRP3、GSDMD蛋白相对表达量也显著增加(P<0.05);与pcDNA3.1-XAF1 组比较,pcDNA3.1-XAF1+Rap 组 GIST-882 细胞内 LC3 荧光强度明显增强,LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值、Beclin1 蛋白相对表达量显著增加(P<0.05),同时,细胞上清液 IL-1β、IL-18 含量及LDH释放率显著下降(P<0.05),Caspase-1、cleaved-Caspase-1、NLRP3、GSDMD 蛋白相对表达量也显著减少(P<0.05).结论:XAF1 在 GIST 细胞中表达下降,提高 XAF1 表达能通过抑制自噬从而促进Caspase 1 介导的GIST细胞焦亡,发挥抗肿瘤作用.

目的 探究抑制X染色体连锁的凋亡抑制蛋白(XIAP)、第二个线粒体衍生的半胱氨酸蛋白酶激活剂(Smac)表达与乳腺癌新辅助化疗(NACT)后腋窝淋巴结(ALN)阳性病理完全缓解(pCR)及预后的相关性.方法 选取2019年6月至2021年6月期间唐山市妇幼保健院收治的195例乳腺癌ALN阳性患者纳入乳腺癌组,所有患者均进行N ACT,N ACT前所有患者均进行活检穿刺取病灶组织.另同期选取195例经进行乳腺活检穿刺,且病理证实为良性乳腺结节的患者,纳入对照组.采用免疫组化法检测患者XIAP、Smac表达水平.根据乳腺癌患者NACT疗效分为pCR组及非pCR组,收集患者临床资料,采用单因素和多因素Logistic回归模型分析NACT后ALN阳性患者非pCR的影响因素,采用Kaplan Meier法分析不同XIAP、Smac表达情况患者的生存预后情况.结果 乳腺癌组病灶组织XIAP低表达占比低于对照组,Smac低表达高于对照组(P＜0.05);195例患中72例患者NACT后pCR,pCR发生率为36.92％;非pCR组AJCC Ⅲ期、原发病灶直径＞3.5 cm、ALN数量≥4个、ALN pN1～pN2期、XIAP高表达及Smac低表达占比均高于pCR组(P＜0.05);Logistic回归分析模型结果显示,AJCCⅢ期、ALN数量≥4个、ALN pN1～pN2期、XIAP高表达及Smac低表达是乳腺癌患者NACT后ALN阳性非pCR的独立危险因素(P＜0.05,OR＞1);乳腺癌患者随访时间12～36个月,中位随访时间26个月,Kaplan Meier生存分析显示,XIAP低表达者3年累积生存率为94.9％,高于XIAP高表达者的90.4％(Log rank x2=4.931,P=0.026);Smac低表达者3年累积生存率为89.8％,低于Smac高表达的94.0％(Log rank x2=4.534,P=0.033).结论 乳腺癌ALN阳性患者组织中XIAP异常高表达,Smac异常低表达,XIAP高表达及Smac低表达是乳腺癌患者NACT后ALN阳性非pCR的独立危险因素,XIAP低表达、Smac高表达患者生存率更高,预后更好.

目的 探讨口腔腺样囊性癌(ACC)患者血清miR-24、X染色体连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)mRNA表达情况,及其与患者预后的关系.方法 选取2010年6月-2016年2月张家口市第一医院口腔ACC患者60例(口腔ACC组),以60名体检健康者作为正常对照组.收集所有研究对象的血清样本和ACC患者的癌组织、癌旁组织(距肿瘤组织边缘≥5 cm)样本,以及临床资料.检测血清和组织中miR-24、XIAP mRNA的相对表达量.采用Pearson相关分析评估miR-24与XIAP的相关性.对ACC患者进行随访.采用Kaplan-Meier生存曲线和Log-rank x2检验分析血清miR-24、XIAP相对表达量与口腔ACC患者预后的关系.采用Cox回归分析评估影响口腔ACC患者预后的危险因素.结果 与正常对照组比较,口腔ACC组血清miR-24相对表达量显著降低(P＜0.05),XIAP mRNA相对表达量显著升高(P＜0.05).与癌旁组织比较,癌组织miR-24相对表达量显著降低(P＜0.05),XIAP mRNA相对表达量显著升高(P＜0.05).口腔ACC患者血清miR-24与XIAPmRNA呈负相关(r=-0.486,P＜0.05).分别以口腔ACC患者血清miR-24和XIAP mRNA相对表达量的均值作为临界值,分为高表达组和低表达组.miR-24低表达组、XIAP mRNA高表达组神经侵袭和淋巴转移患者例数分别显著多于miR-24高表达组、XIAP mRNA低表达组(P＜0.05).Kaplan-Meier生存曲线分析结果显示,miR-24低表达组、XIAP mRNA高表达组累积生存率分别显著低于miR-24高表达组、XIAP mRNA低表达组(Log-rank x2值分别为7.212、8.568,P值分别为0.007、0.003).Cox回归分析结果显示,有神经侵袭、XIAP mRNA高表达是口腔ACC患者预后不良的独立危险因素(P＜0.05),miR-24高表达是口腔ACC患者预后的独立保护因素(P＜0.05).结论 口腔ACC患者血清miR-24和XIAP表达均与预后相关,或可作为新的口腔ACC预后评估生物标志物.

目的 探讨缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)与X染色体连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)在人卵巢癌中的表达及意义.方法 用免疫组织化学技术法检测人正常卵巢组织标本10 例、良性卵巢肿瘤标本10 例、交界性卵巢肿瘤标本10 例及恶性卵巢癌组织标本30 例中HIF-1α和XIAP的表达情况;培养人卵巢癌细胞系SKOV3,向细胞培养瓶中加入HIF-1α激动剂和抑制剂,提取细胞总RNA,用RT-PCR技术观察XIAP和HIF-1α 基因表达变化.结果 XIAP、HIF-1α在恶性上皮性卵巢癌组及交界性肿瘤组表达率均明显高于良性卵巢肿瘤组(P<0.05).恶性上皮性卵巢癌组织中HIF-1α与XIAP在临床分期晚期(Ⅲ期和Ⅳ期)组的阳性表达率明显高于临床分期早期(Ⅰ期和Ⅱ期)组(P<0.05),与患者年龄、病理分型和淋巴结转移无关(P>0.05).在恶性上皮性卵巢癌中HIF-1α与XIAP呈正相关(P<0.05).随缺氧时间延长,SKOV3 细胞系中HIF-1αmRNA表达量渐增;低氧24h时HIF-1αmRNA表达量达高峰,36h时HIF-1αmRNA表达量有所回落;添加HIF-1α抑制剂雷帕酶素后,HIF-1αmRNA表达量明显减少,XIAPmRNA亦减少.SKOV3 细胞系中XIAP mRNA随HIF-1αmRNA而变化.结论 HIF-1α和XIAP可能参与了恶性卵巢肿瘤的发生;HIF-1α和XIAP的高表达可能提示预后不良;HIF-1α对XIAP可能存在调控作用,两者可能协同促进卵巢癌的发生.

目的 探讨大鼠颅脑损伤后线粒体Omi/HtrA2信号通路在大鼠神经细胞凋亡中的作用.方法 90只大鼠按随机数字表法分成假手术组、颅脑损伤组和UCF-101干预组,每组30只,然后每组按照12、24、48 h三个时间点分成三个亚组,每个亚组10只.使用大鼠自由落体颅脑损伤动物模型,UCF-101干预组大鼠在模型形成前0.5 h按1.5μmol/kg的剂量腹腔注射UCF-101,其余两组大鼠腹腔注射1 mL的等渗NaCl溶液.按照12、24、48 h三个时间点每组分批断头处死10只大鼠,分离海马组织.采用末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记(TUNEL)测定法检测各组大鼠海马组织神经细胞凋亡情况,Western-blotting检测Omi/HtrA2、X染色体连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)、pro-caspase-3、pro-caspase-9和剪切聚腺苷二磷酸-核糖多聚酶(PARP)蛋白表达,四肽荧光底物法检测caspase-3和caspase-9蛋白活性.结果 三组大鼠海马神经细胞凋亡比例,Omi/HtrA2、pro-caspase-3、pro-caspase-9、剪切PARP和XIAP蛋白表达以及caspase-3和caspase-9蛋白活性比较,差异均有统计学意义(F=217.742、107.139、145.748、133.970、103.029、65.112、142.772、96.187,P均<0.05).12、24、48 h时颅脑损伤组大鼠凋亡的海马神经细胞比例,Omi/HtrA2、pro-caspase-3、pro-caspase-9和剪切PARP蛋白表达以及caspase-3和caspase-9蛋白活性均较假手术组显著升高(P均<0.05);而UCF-101干预组大鼠凋亡的海马神经细胞比例,Omi/HtrA2、pro-caspase-3、pro-caspase-9和剪切PARP蛋白表达以及caspase-3和caspase-9蛋白活性均较颅脑损伤组显著下降(P均<0.05).各时间点颅脑损伤组大鼠海马组织XIAP蛋白表达均较假手术组显著下降(P均<0.05),而UCF-101干预组大鼠海马组织XIAP蛋白表达均较颅脑损伤组显著升高(P均<0.05).结论 Omi/HtrA2介导的线粒体途径可能参与大鼠颅脑损伤后神经细胞凋亡的发生过程,而UCF-101可有效抑制神经细胞凋亡.

目的 观察不同浓度中药荜茇活性成分荜茇酰胺作用不同时间对胃癌MKN45细胞增殖的影响,并探讨其可能的作用机制.方法 将培养至对数期的胃癌细胞株MKN45用不同浓度的荜茇酰胺处理后,选择10μmol/L荜茇酰胺用于后续实验,设定空白对照组、3 mmol/L抗氧化剂N-乙酰-L-半胱氨酸(NAC)组、10μmol/L荜茇酰胺组和3 mmol/L NAC预处理+10μmol/L荜茇酰胺组.采用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法测定细胞活性;采用流式细胞仪检测细胞周期、细胞凋亡率、活性氧簇(ROS)水平;采用蛋白质免疫印迹试验(Western Blot)检测通路中相关蛋白p21、X染色体连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)、剪切聚腺苷二磷酸-核糖多聚酶(PARP)、天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-9(caspase-9)的表达情况.结果 ① 细胞活性:荜茇酰胺可抑制MKN45细胞活性,其作用呈浓度和时间的正相关性(均r>0.8,P<0.05);②G1期阻滞:荜茇酰胺可诱导MKN45细胞G1期阻滞,其作用呈浓度正相关性(均r>0.8,P<0.05),0、5、7.5、10μmol/L荜茇酰胺作用下G1期细胞为(35.33±3.56)％、(41.42±4.04)％、(48.78±5.24)％、(55.12±5.78)％;③ 细胞凋亡:荜茇酰胺可诱导MKN45细胞凋亡,其作用呈浓度依赖性,0、5、7.5、10μmol/L荜茇酰胺作用下细胞凋亡率分别为(9.21±2.13)％、(13.82±3.45)％、(19.66±4.73)％、(25.21±5.05)％;④caspase细胞凋亡途径:0、5、7.5、10μmol/L荜茇酰胺可下调抗凋亡蛋白XIAP表达,上调剪切caspase-9及剪切PARP表达(XIAP为0.432±0.101、0.120±0.022、0.023±0.005、0.005±0.001,剪切caspase-9为0.003±0.001、0.007±0.001、0.225±0.049、0.649±0.132,剪切PARP为0.005±0.001、0.014±0.003、0.428±0.152、0.895±0.111);即荜茇酰胺可激活caspase依赖性凋亡途径,其作用呈浓度依赖性;⑤ROS-p53细胞凋亡途径:荜茇酰胺能上调ROS、p53、p21、p53凋亡调控因子(PUMA)表达,其作用呈浓度依赖性,经NAC处理后,ROS水平降低为(850.48±124.53)U/L,MKN45细胞活性上升为(73.45±6.12)％,p53降低为0.732±0.152、剪切PARP蛋白表达降低为0.487±0.108.结论 荜茇酰胺可抑制胃癌细胞MKN45增殖,降低其活性,阻滞细胞周期G1期,诱导凋亡,可能的作用机制为提高细胞ROS水平,激活p53与caspase凋亡途径有关.

目的:研究X-染色体连锁凋亡抑制蛋白(X-chromosome-linked inhibitior of apoptosis protein,XIAP)相关因子1(XIAP associated factor 1,XAF1)在口腔鳞癌组织中的表达及临床意义,进一步观察过表达XAF1对口腔鳞癌CAL27细胞增殖、克隆形成和凋亡的影响.方法:应用免疫组织化学方法检测64例口腔鳞癌及14例正常口腔黏膜组织标本中XAF1蛋白的表达,分析XAF1表达水平与患者临床病理特征的相关性.CAL27细胞转染XAF1表达质粒,Real-time PCR检测转染24 h时XAF1 mRNA的表达;倒置显微镜观察细胞形态变化;CCK8和平板克隆实验检测过表达XAF1对细胞生长的影响;流式细胞仪和Western Blot检测细胞凋亡的影响.结果:XAF1蛋白在口腔鳞癌组织表达较正常口腔黏膜上皮组织降低.XAF1的表达与患者的TNM分期相关.过表达XAF1抑制口腔鳞状细胞癌CAL27细胞的增殖和克隆形成,凋亡细胞百分比和cleaved-PARP表达增加.结论:XAF1在口腔鳞癌组织中表达降低,可能与口腔鳞癌的进展相关.过表达XAF1抑制口腔鳞状细胞癌细胞的生长,促进细胞凋亡.

目的 使用银杏内酯B (ginkgolide B,GB)治疗大鼠颅脑损伤,揭示其对Omi/HtrA2介导的神经细胞凋亡线粒体途径的影响.方法 分设假手术组、脑外伤组和治疗组,30只大鼠随机分配,每组10只.脑外伤组和治疗组大鼠接受外力打击,假手术组大鼠不做外力打击.治疗组大鼠外伤后连续3天按照20mg/(kg·d)剂量腹腔注射GB,脑外伤组和假手术组大鼠连续@@3天腹腔注射1 ml 0.9％氯化钠溶液.外伤后第3天,检测海马组织凋亡神经细胞及Omi/HtrA2、X染色体连锁凋亡抑制蛋白(X-linked inhibitor of apoptosis protein,XIAP)、pro-caspase-3、pro-caspase-9和剪切聚腺苷二磷酸-核糖多聚酶(poly ADP-ribose polymerase,PARP)蛋白表达和caspase-3和caspase-9蛋白活性.结果 与假手术组比较,脑外伤组海马凋亡神经元比例、Omi/HtrA2、pro-caspase-3、pro-caspase-9和剪切PARP蛋白表达及caspase-3和caspase-9蛋白活性均显著升高(P＜0.01),XIAP蛋白表达显著下降(P＜0.01);与脑外伤组相比,治疗组海马凋亡神经元比例、Omi/HtrA2、pro-caspase-3、pro-caspase-9和剪切PARP蛋白表达及caspase-3和caspase-9蛋白活性均显著下降(P＜0.01),XIAP蛋白表达显著升高(P＜0.01).结论 GB可能通过抑制Omi/HtrA2介导的线粒体途径从而降低颅脑损伤大鼠神经细胞凋亡.

凋亡抑制蛋白(the inhibitor of apoptosis protein,IAP)家族有8位成员,包括X染色体连锁的凋亡抑制剂(X-linked inhibitor of apoptosis,XIAP),cIAP1,cIAP2,NLR家族(NAIP),livin,IAP相似蛋白2 (ILP2),BRUCE和survivin.Survivin是IAP家族中抗凋亡作用最强的成员,于1997年首次被发现.Survivin在正常组织、癌前组织、各种癌症中的表达率均不同,即survivin表达具有特异性,因此,它在肿瘤诊断、预后判断等方面成为核心.近年来survivin与肿瘤的关系受到越来越多人的重视,本文主要从survivin的结构、生物学特性,及其与肿瘤的关系方面对其进行阐述.