目的 探讨锌指蛋白ZNF407在黑色素瘤(melanoma)中的表达和功能,及对黑色素瘤迁移与侵袭的影响和作用机制.方法 自2015年 1 月至 2021 年 1 月,收集重庆市中医院皮肤科的黑色素瘤临床样本 42 例和 20 例正常色素痣组织,以黑色素瘤组织和细胞系为研究对象,通过免疫蛋白印迹实验和实时荧光PCR检测ZNF407 在黑色素瘤组织中相对表达,实时荧光PCR检测ZNF407 在黑色素瘤细胞系中相对表达;Pearson相关性检测分析ZNF407 与TGF-β1 在黑色素瘤中的表达相关性;以黑色素瘤细胞系A375细胞为研究对象进行ZNF407基因过表达,分别转染pcDNA3.1(+)-Flag-ZNF407(实验组)和pcDNA3.1(+)-Flag-Vector(对照组),未转染为空白对照组.Transwell实验验证实验组和对照组中A375 细胞迁移和侵袭的影响;半定量PCR和实时荧光PCR检测ZNF407 对细胞上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)相关mRNA表达水平的影响,免疫蛋白印迹实验检测ZNF407 对EMT相关蛋白表达水平的影响;免疫蛋白印迹实验检测ZNF407 对TGF-β信号通路的影响.结果 免疫蛋白印迹实验和实时荧光PCR显示:与色素痣细胞组织相比,ZNF407蛋白和mRNA在黑色素瘤组织中表达下调(P<0.001);实时荧光PCR显示:与正常色素痣细胞相比,ZNF407 mRNA在黑色素瘤细胞中表达下调(P<0.001).Transwell迁移实验显示:与对照组相比,实验组穿出小室细胞数(116±17)低于对照组(265±27,P<0.01)和空白对照组细胞(259±28,P<0.01);侵袭实验显示:实验组穿出小室细胞数(82±14)低于对照组(215±31,P<0.01)和空白对照组细胞(209±32,P<0.01).免疫蛋白印迹实验显示:过表达ZNF407 后,实验组Vimentin、N-cadherin、Twist和MMP7的蛋白表达下调;E-cadherin的蛋白表达上调(P＜0.001);半定量PCR和实时荧光PCR显示:过表达ZNF407后,实验组中干细胞标记物ABCG2、Snail2和OCT4 mRNA表达下调(P＜0.001).Pearson相关性分析显示:黑色素瘤组织中ZNF407 mRNA与TGF-β1的表达呈负相关(P=0.033,r=-0.714).免疫蛋白印迹实验显示:与对照组和空白对照组蛋白水平相比,实验组中TGF-β1、p-Smad1、p-Smad2、p-Smad3、p-Smad4和c-Myc蛋白表达水平降低.结论 ZNF407蛋白和mRNA在黑色素瘤中表达下调,对ZNF407基因过表达能抑制黑色素瘤细胞系的细胞迁移和侵袭;ZNF407基因过表达后可抑制TGF-β/Smad信号及通路下游靶分子的表达,能作为重要的抑癌基因参与其发生发展.

目的 应用单核苷酸多态性微阵列技术对一例不明原因的孤独症患儿进行全基因组拷贝数变异分析.方法 对患儿及其父母进行拷贝数变异分析,用定量PCR进行验证,并分析缺失片段所包含的基因的功能与临床表型的关系.结果 微阵列检测发现患儿18号染色体长臂末端(18q22.3q23区)存在7.1 Mb的缺失(hg39:70 650 318-78 014 582),涉及FBXO15、ZNF407、ZADH2、TSHZ1、MBP、ADNP2等26个基因,其父母未见同样的异常.将患儿与文献报道的其他有孤独症表型的18q缺失的病例进行比较,提示ZNF407可能是引起孤独症表型的关键基因.结论 本例患儿的孤独症表型与18号染色体微缺失有关,该区域内的ZNF407可能是导致孤独症表型的关键基因.全基因组拷贝数变异分析对明确孤独症的遗传学病因具有重要的价值.

目的 利用癌症基因组图谱(TCGA)数据库,筛选结肠癌显著差异表达进而显著影响结肠癌患者预后的基因突变群.方法 从TCGA数据库下载结肠癌单核苷酸突变数据和表达谱数据,在R 3.5.0环境下,利用wilcoxon秩和检验法筛选单核苷酸突变后表达显著差异的基因,利用survival程序包筛选单核苷酸突变后显著影响生存预后的基因,最后将两者结果取交集,为突变后表达水平有显著性差异合并生存率有显著差异的基因.对该基因群进行瀑布图可视化,分析其主要突变类型、突变影响、突变和临床病理因素相关性.结果 共发现42个差异具有统计学意义的基因,包括MBD6,BCR,ZNF407,ZC3H18等,主要突变类型为错义突变,部分突变基因和TNM分期、性别相关.结论 挖掘结肠癌显著差异表达合并生存率显著差异的突变基因,有助于帮助我们深入理解结肠癌发生、发展过程中的关键基因突变群,从而从整体上把控基因突变群对结肠癌发生、发展、转归的影响,并为将来的调控机制研究提供参考,有可能作为结肠癌预后标志物和治疗靶点应用于临床.

Zinc finger GATA like protein-1(ZGLP1)是位于细胞核内的一种核转录因子结合蛋白,在哺乳动物性腺发育过程中调控生殖细胞和体细胞的相互作用.为了研究ZGLP1在鱼类中的功能,我们以弓背青鳉(Oryzias curvinotus)为研究对象,对弓背青鳉zglp1基因进行了 PCR扩增、分子克隆、序列特征分析,并对其时空表达模式进行了反转录-PCR(reverse-transcription PCR,RT-PCR)检测.结果显示,在弓背青鳉卵巢组织 cDNA 中扩增获得了 zglp1 两种转录产物(orcuzglp 1x1和orcuzglp 1x2).orcuzglp 1x1 长 1 739 bp,包含一个1 665 bp的开放阅读框(ORF),预测编码蛋白含554个氨基酸(aa),蛋白分子量为61.40 kDa;orcuzglp 1x2长 1 629 bp,ORF 长 1 407 bp,编码蛋白含468 aa,蛋白分子量为51.81 kDa.orcuzglp 1x2相对于orcuzglp 1x1在N端缺失86 aa,orcuzglp1s在C端含有两个锌指结构(Znf1,Znf2),Znf1和典型的GATA锌指DNA结合基序高度同源.多序列比对结果显示Znf1在物种间较为保守,而Znf2的保守性较低.系统进化树分析结果表明Zglp1在进化上和物种进化保持一致.RT-PCR结果显示orcuzglp 1s主要表达于成熟卵巢组织以及胚胎发育早期(卵裂期).综上所述,弓背青鳉zglp1可能在卵子发生及胚胎卵裂过程中发挥一定作用.