目的:探究S100A6对肺癌细胞株Calu-6增殖、迁移、凋亡等的生物学行为影响。方法:实验性研究。构建S100A6过表达慢病毒载体，和空载体同时转染至Calu-6肺癌细胞株。转染成功后(RT-PCR、Western-blot确认S100A6过表达)，使用MTT、Transwell和流式细胞术实验技术分别检测Calu-6/S100A6实验组(Calu-6/S100A6)、Calu-6/空载体对照组(Calu-6/neo)、Calu-6空细胞对照组(Calu-6)的细胞增殖能力、细胞迁移和侵袭能力、细胞凋亡和周期，比较3组差异。将3组细胞注入裸鼠皮下(15只)，每周测定小鼠成瘤体积。结果:Calu-6肺癌细胞株转染S100A6后与Calu-6/neo、Calu-6组比较，Calu-6/S100A6组的增殖、迁移和侵袭能力均呈减弱趋势，细胞凋亡能力增强，细胞周期G1期延长，S期缩短( P<0.05)。实验5周后测定Calu-6/S100A6组肿瘤体积明显小于Calu-6/neo和Calu-6组( P值均<0.05)。 结论:S100A6抑制Calu-6肺癌细胞的生长，同时减弱Calu-6细胞株的成瘤能力。在细胞水平上，S100A6有抑癌功能。

目的:观察长链非编码RNA RP11-38P22在非小细胞肺癌(NSCLC)细胞株中表达水平的变化、对细胞生长和转移的影响以及调控的途径，探讨RP11-38P22在NSCLC的作用机制。方法:2019年1月至2019年6月深圳市人民医院胸外科获取56对成对的NSCLC组织和相邻癌旁组织。通过实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测RP11-38P22在56例肺癌组织以及多个肺癌细胞株中的表达变化，并分析其表达水平的变化与NSCLC临床病理特征的相关性。将RP11-38P22过表达和敲低表达的A549和H1299细胞均设为实验组，将转染空载体病毒(即未干扰RP11-38P22表达的)的A549和H1299细胞设为对照组。改变RP11-38P22在细胞株A549和H1299的表达，通过细胞计数试剂盒(CCK-8)实验评估RP11-38P22对细胞生长的影响。通过流式细胞术、划痕实验及Transwell实验评估RP11-38P22对细胞凋亡、迁移和侵袭的影响。此外，通过免疫印迹技术探讨RP11-38P22发挥作用是否与p53通路相关。采用 t检验比较两组的平均值，两组以上比较使用方差分析，使用Kaplan-Meier分析和对数秩检验比较生存数据。 结果:与癌旁组织相比较，RP11-38P22在肺癌组织中的表达明显降低(正常组织比腺癌组织为 t＝2.266， P<0.05；正常组织比鳞癌组织为 t＝2.313， P<0.05)，且其表达的高低与肿瘤大小显著相关( χ2＝4.758， P<0.05)。与正常细胞(HBE)相比，5种NSCLC细胞系中，RP11-38P22表达也显著性下降，差异有统计学意义(A549细胞为 F＝45.674， P<0.01；H1299细胞为 F＝38.568， P<0.01；PC9细胞为 F＝23.337， P<0.05；H460细胞为 F＝18.459， P<0.05；Calu3细胞为 F＝22.102， P<0.05)。RP11-38P22过表达能够显著抑制A549和H1299细胞系的增殖能力[72 h A549细胞增殖率为对照组(110.275±5.663)%，实验组(65.735±3.706)%， F＝16.342， P<0.05；72 h H1299细胞增殖率为对照组(125.357±6.733)%，实验组(76.857±3.935)%， F＝11.360， P<0.05]，并促进细胞的凋亡[A549细胞凋亡率为对照组(2.031±0.032)%，实验组(35.078±2.512)%， F＝50.231， P<0.01；H1299细胞凋亡率为对照组(1.872±0.022)%，实验组(31.265±1.206)%， F＝41.232， P<0.01]。RP11-38P22敲低表达可增加A549和H1299细胞的迁移[A549细胞划痕面积为对照组(571.235±17.006) μm 2，实验组(705.150±32.238) μm 2， F＝19.258， P<0.05；H1299细胞划痕面积为对照组(430.786±12.135) μm 2，实验组(681.547±30.246) μm 2， F＝16.345， P<0.05]和A549细胞侵袭能力(对照组231.235±7.206，实验组345.121±16.201， F＝11.331， P<0.05)；而过表达使得A549细胞的迁移[A549细胞划痕面积为对照组(572.585±19.125) μm 2，实验组(278.870±12.215) μm 2， F＝15.873， P<0.05]和侵袭能力显著降低，差异有统计学意义[对照组226.772±10.268，实验组125.323±5.819， F＝14.548， P<0.05]。此外，在RP11-38P22敲低表达的细胞中p53的表达显著降低，差异有统计学意义(对照组1.000±0.056，实验组0.377±0.036， t＝3.209， P<0.05)。 结论:长链非编码RNA RP11-38P22通过调控p53途径影响NSCLC细胞的生长和转移。

目的:探讨信号素4C (SEMA4C)在巨噬细胞中的高表达影响早期肺腺癌发生淋巴结转移的机制及临床价值。方法:收集2019年12月至2021年12月来自郑州大学第一附属医院的16例T1期肺腺癌患者(8例有淋巴结转移，8例无淋巴结转移)的肿瘤组织和邻近正常肺组织进行转录组测序，通过癌症基因组图谱(TCGA)和基因表达数据库(GEO)数据库下载数据集作为外部验证队列。采用实时定量反转录聚合酶链反应(qPCR)、蛋白质印迹法(Western blot)等方法分析SEMA4C相对表达量，并使用CIBERSORT算法和R语言程序包进行数据处理和分析。采用 t检验比较两组间差异基因，采用Kaplan-Meier法 χ2检验比较两组间生存函数差异。 结果:M0巨噬细胞高浸润组病人的生存率低于低浸润组[TCGA：(81.92±10.50)个月比(95.98±11.80)个月， χ2＝6.778， P<0.01；GSE68465：(72.74±5.89)个月比(96.69±6.15)个月， χ2＝5.413， P<0.05]。SEMA4C在3个队列中转移组和高浸润组表达高于无转移组和低浸润组(测序队列：30.68±8.02比23.72±4.76， t＝2.912， P<0.01；TCGA：44.08±22.45比24.93±11.64， t＝2.734， P<0.01；GSE68465：908.61±363.72比822.00±312.53， t＝1.978， P<0.05)。qPCR结果示M0巨噬细胞表达高于肺腺癌细胞和M1、M2巨噬细胞(M0巨噬细胞μ＝23.880比A549细胞系μ＝3.085， t＝21.340， P<0.001、Calu-3细胞系μ＝0.462， t＝24.032， P<0.001、H1975细胞系μ＝2.930， t＝21.510， P<0.001、M1巨噬细胞μ＝5.303， t＝16.043， P<0.001、M2巨噬细胞μ＝8.120， t＝15.934， P<0.001)；Western blot结果示M0巨噬细胞表达高于单核THP-1和M1、M2巨噬细胞(M0巨噬细胞μ＝1.216比THP-1细胞系μ＝1.000， t＝32.940， P<0.001、M1巨噬细胞μ＝0.485， t＝15.992， P<0.001、M2巨噬细胞μ＝0.394， t＝42.545， P<0.001)。 结论:SEMA4C是潜在的趋化M0巨噬细胞浸润从而引起早期肺腺癌发生淋巴结转移的关键基因。

目的:探讨Circular RNAs(hsa_circ_0078767)通过调控miR-330-3p/p53信号通路,对肺癌细胞铁死亡的影响.方法:用qRT-PCR法检测四种人类肺癌细胞系(HCC827、A-549、Calu-3和H1975)和一种正常肺上皮细胞系BEAS-2B中hsa_circ_0078767的表达;转染hsa_circ_0078767的过表达载体(oe-circ)于A-549和H1975细胞内;RNA FISH确定hsa_circ_0078767的胞质定位;CCK-8、集落形成、EdU染色、FACS分析和流式细胞仪分别检测A-549和H1975细胞的活性、增殖、凋亡和ROS情况;铁测定试剂盒检测细胞铁含量;Western blot 检测细胞中 miR-330-3p、cleaved Caspase3 和 cleaved PARP 的表达;RNA pull-down实验分析hsa_circ_0078767与miR-330-3p的结合位点的结合效率;RNA结合蛋白免疫沉淀(RIP)实验检测hsa_circ_0078767和miR-330-3p的mRNA水平;双荧光素酶报告基因实验检测hsa_circ_0078767 与 miR-330-3p 的靶向关系;皮下注射 A-549-vector 和 A549-oe-circ 细胞(1 × 106 个)到六周大的雄性裸鼠腹部,建立活体异种移植动物模型.结果:我们发现hsa_circ_0078767在肺癌细胞中低表达以及hsa_circ_0078767在肺癌恶性发展过程中对铁死亡的调控功能.在过表达hsa_circ_0078767的肺癌细胞中发现铁、Fe2+和ROS水平升高.铁死亡诱导剂erastin会降低细胞活力,而过表达hsa_circ_0078767会加强erastin对肺癌细胞的抑制作用.在机制方面,hsa_circ_0078767可通过海绵吸附miR-330-3p来影响p53的表达.上调miR-330-3p及敲降p53可逆转hsa_circ_0078767过表达对肺癌细胞的作用.结论:hsa_circ_0078767可能通过miR-330-3p/p53轴促进肺癌细胞铁死亡从而抑制肺癌进展.

目的 研究人肺腺癌细胞A549和Calu-3中OMA1基因表达水平及其对细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡的作用,并探讨其作用机制.方法 检测不同人肺腺癌细胞和正常肺上皮细胞中OMA1基因和蛋白表达水平.分别在Calu-3(OMA1表达水平最高)和A549(OMA1表达水平最低)细胞进行OMA1沉默和过表达,测定各组细胞OMA1基因和蛋白表达、细胞增殖情况、迁移能力、侵袭能力和细胞凋亡率,及其对各组细胞中PI3K/AKT信号通路的影响.结果 不同人肺腺癌细胞中OMA1基因和蛋白表达水平较正常肺上皮细胞均显著降低,其中在Calu-3细胞表达水平最高,在A549细胞中表达水平最低.Calu-3细胞转染shOMA1后OMA1基因和蛋白表达水平显著降低,增殖能力、迁移能力和侵袭能力显著升高,细胞凋亡率、PI3K/AKT信号通路相关基因和蛋白表达显著降低.A549细胞转染oeOMA1后OMA1基因和蛋白表达水平显著升高,增殖能力、迁移能力和侵袭能力显著降低,细胞凋亡率、PI3K/AKT信号通路相关基因和蛋白表达显著升高.结论 OMA1在肺腺癌细胞中低表达,OMA1可能通过调节PI3K/AKT信号通路相关基因和蛋白的表达发挥对肺腺癌细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡的抑制作用.

目的 探索云暴露系统用于吸入毒理体外暴露实验的可行性.方法 采用高、中、低(800、400、200 mg·L-1)3个浓度的脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)通过云暴露系统对气液界面(air-liquid interface,ALI)培养的Calu-3细胞进行暴露,磷酸盐缓冲液(phosphate buffer solution,PBS)暴露作阴性对照组,暴露1次,另取高浓度LPS溶液暴露5次,暴露结束后3 h和24 h分别检测Calu-3细胞的活性、乳酸脱氢酶(LDH)释放量、跨上皮电阻值(TEER)、黏蛋白MUC5AC以及炎症因子IL-6、IL-8、TNF-α表达.结果 与PBS阴性对照组相比,高、中、低3种浓度的LPS气液界面暴露于Calu-3细胞模型后,细胞的活性、LDH释放量无显著变化,但细胞电阻值降低,细胞的屏障功能受损;随着暴露浓度的升高,LPS促进细胞黏蛋白MUC5AC的表达,使细胞IL-6、IL-8表达下降,TNF-α表达上升;随着暴露频率的增加,LPS会抑制黏蛋白的表达,使IL-6表达上升;暴露频率增加的同时延长暴露后的检测时间会使细胞IL-8、TNF-α表达上升.结论ALT云暴露的方式可以有效反映细胞对阳性受试物的反应,此体外暴露方法可以用于后续暴露实验来评价化合物的吸入毒性.

目的:研究长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)AL022344.4对人肺腺癌细胞H157和A549侵袭及迁移的影响.方法:选取TCGA_LUAD和GTEx_LUNG两个公共数据库中公开数据集对lncRNA AL022344.4表达数据进行生物信息学分析;qRT-PCR检测人正常支气管上皮细胞HBEC及肺腺癌细胞(H157、A549、H1299、H1975、CALU-3)中AL022344.4的相对表达量.慢病毒感染及质粒转染构建AL022344.4敲低H157细胞及过表达AL022344.4的A549细胞,qRT-PCR检测AL022344.4在两种细胞系中的表达;采用细胞划痕实验和Transwell实验检测AL022344.4敲低及过表达对肺腺癌细胞迁移、侵袭能力的影响;采用蛋白印迹法检测E-Cadherin、N-Cadherin、Vimentin、α-SMA、MMP9和ZEB1蛋白质表达水平.结果:生物信息学分析发现lncRNA AL022344.4在肺腺癌中较匹配的癌旁组织表达更高,qRT-PCR表明其在肺腺癌细胞中的表达亦高于正常支气管上皮细胞,差异有统计学意义(P＜0.01);qRT-PCR表明AL022344.4敲低H157细胞系及过表达A549细胞系构建成功;细胞划痕和Transwell实验显示过表达AL022344.4促进A549细胞的迁移和侵袭,敲低AL022344.4抑制H157细胞迁移和侵袭;蛋白印迹法结果显示,过表达 AL022344.4 促进 N-Cadherin、α-SMA、Vimentin、MMP9 和 ZEB1 表达,降低 E-Cadherin表达;敲低 AL022344.4 促进 E-Cadherin 表达,降低 N-Cadherin、Vimentin、α-SMA、MMP9 和 ZEB1 表达.结论:lncRNA AL022344.4 通过促进 ZEB1 表达调控 E-Cadherin、N-Cadherin、Vimentin 和 α-SMA,协同MMP9共同促进肺腺癌细胞的侵袭和迁移.

目的 探究创伤后深静脉血栓形成(DVT)的遗传危险因素.方法 采用巢式病例对照研究.纳入50名创伤性下肢骨折后发生DVT患者和50名未发生DVT患者,两组患者的性别、年龄、骨折部位相匹配.创伤患者于术前行静脉造影检查以诊断是否发生DVT.应用全基因组关联分析(GWAS)筛选创伤性下肢骨折后术前DVT的遗传危险因素.用于GWAS的基因组DNA从白细胞中提取.结果 应用GWAS评估144个兴趣基因,包含2 662个单核苷酸变异(SNV),与表型之间的相关性.共发现10个基因与创伤后DVT发生显著相关:止血机制辅因子,包括THBD、F5、SERPIND1、ITGA2,维生素K依赖(VKD)羧化相关因子,包括GGCX、CALU,细胞色素P450家族成员,包括CYP1A1、CYP3A4、CYP2C19、CYP2B6.结论 创伤性下肢骨折后DVT可能受止血机制辅因子、VKD羧化相关因子和细胞色素P450家族成员的调控.

目的:通过下调 Gas6/MerTK 信号通路探究线粒体自噬在肺癌进展中的可能机制.方法:培养Calu-1 与A-427 细胞系,分为(1)对照组、Gas6 干预(下调Gas6)组,(2)对照组、雷帕霉素(自噬诱导剂,RAPA)组,Western blotting检侧Gas6、MerTK、LC3Ⅱ、Beclin1 蛋白表达水平,透射电镜观察细胞自噬小体,平板克隆检侧Calu-1 与A-427 细胞克隆能力,CCK-8 检测 Calu-1 与 A-427 细胞活力,细胞划痕实验检测Calu-1 与A-427 细胞的迁移能力,免疫荧光检测Calu-1 与A-427 细胞中LC3 表达水平.结果:与对照组相比,Gas6 干预组Calu-1 细胞与A-427 细胞的 Gas6、MerTK 蛋白水平显著降低(P<0.05),LC3Ⅱ、Beclin1 蛋白水平显著增加(P<0.05),且 Calu-1 细胞与 A-427 细胞中自噬小体形成,大量自噬空泡聚集,细胞克隆能力显著降低(P<0.05)、细胞活力显著降低(P<0.05)、细胞迁移距离显著减少(P<0.05).与对照组相比,RAPA 组 Calu-1 细胞与 A-427 细胞 LC3 蛋白表达增加(P<0.05),细胞克隆能力显著降低(P<0.05)、细胞活力显著降低(P<0.05)、细胞迁移距离显著减少(P<0.05).结论:下调Gas6/MerTK信号通路可诱导Calu-1 与A-427 细胞线粒体自噬,并抑制其增殖、活性和迁移能力.

研究芍药苷、薄荷脑对葛根素在细胞模型转运过程中对Calu-3细胞膜生理功能的影响.以Calu-3细胞作为模拟鼻黏膜组织的体外细胞模型,采用荧光漂白恢复技术及超微量酶活性检测方法,考察细胞膜流动性、Na+-K+-ATP酶和Ca2+-ATP酶活性,探索配伍药物促进葛根素转运的作用机制.结果表明,配伍低、中、高浓度薄荷脑或同时配伍低、中、高浓度芍药苷和薄荷脑时,与单独使用葛根素相比,Calu-3细胞膜荧光漂白恢复率显著升高,Na+-K+-ATP酶活性未发生明显改变,Ca2+-ATP酶活性显著增强,由此证实薄荷脑起到主要渗透促进作用,并且其作用机制可能与增加流动性、激活Ca2+-ATP酶活性密切相关.