目的 分析circLRP6调节miR-31-5p/高迁移率族蛋白A1(HMGA1)轴对高糖诱导的肾小管上皮细胞损伤的影响.方法 体外培养人肾小管上皮HK-2细胞,分为对照组、高糖组、高糖+si-NC组、高糖+si-circLRP6组、高糖+si-circLRP6+miR-NC组、高糖+si-circLRP6+miR-31-5p inhibitor组、高糖+si-circLRP6+miR-31-5p inhibitor+si-NC组、高糖+si-circLRP6+miR-31-5p inhibitor+ si-HMGA1组,对照组置于含5.5 mmol/L葡萄糖的DMEM培养基内培养,其余各组置于含25 mmol/L葡萄糖的DMEM培养基内培养,并通过Lipofectamine 2000将相应质粒转染至HK-2细胞内,实时定量PCR测定细胞circLRP6、miR-31-5p、HMGA1mRNA水平,试剂盒测定细胞上清液白细胞介素-6(IL-6)水平、肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平、乳酸脱氢酶(LDH)活性以及丙二醛(MDA)含量;流式细胞仪观察细胞凋亡;Western blotting测定细胞HMGA1、Bax、Bcl-2蛋白表达;双荧光素酶报告基因实验分析miR-31-5p与circLRP6、HMGA1的靶向关系.结果 与对照组相比,高糖组HK-2细胞circLRP6水平升高,细胞增殖抑制率、IL-6、TNF-α、LDH、MDA、细胞凋亡率、Bax蛋白表达升高,Bcl-2蛋白表达降低(均P＜0.05);与高糖组相比,高糖+si-circLRP6组HK-2细胞增殖抑制率、IL-6、TNF-α、LDH、MDA、细胞凋亡率、Bax蛋白表达降低,Bcl-2蛋白表达升高(均P＜0.05);与高糖+si-circLRP6组相比,高糖+ si-circLRP6+miR-31-5p inhibitor组HK-2细胞增殖抑制率、IL-6、TNF-α、LDH、MDA、细胞凋亡率、Bax蛋白表达升高,Bcl-2蛋白表达降低(均P＜0.05);与高糖+si-circLRP6+miR-31-5p inhibitor组相比,高糖+si-circLRP6+miR-31-5p inhibitor+si-HMGA1组HK-2细胞增殖抑制率、IL-6、TNF-α、LDH、MDA、细胞凋亡率、Bax蛋白表达降低,Bcl-2蛋白表达升高(均P＜0.05).miR-31-5p与circLRP6、HMGA1均具有靶向关系.结论 沉默circLRP6可能通过上调miR-31-5p,抑制HMGA1表达,对高糖诱导的肾小管上皮细胞损伤发挥保护作用.

目的:探究环状RNA circ_0000989在视网膜母细胞瘤(retinoblastoma,RB)中的表达情况,及其对RB细胞功能的影响和调控机制.方法:采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测RB组织和细胞中circ_0000989的表达水平.采用CCK-8和Transwell检测circ_0000989过表达质粒和miR-183-5p mimics对细胞增殖、迁移和侵袭的影响.采用Western blot检测circ_0000989和miR-183-5p对LRP6表达水平的影响.采用双荧光素酶报告基因分析circ_0000989对miR-183-5p的调控.结果:RB组织和细胞中circ_0000989表达显著上调.circ_0000989可以显著促进RB细胞的增殖、迁移和侵袭;而miR-183-5p可减弱此作用.双荧光素酶报告基因和Western blot显示circ_0000989通过吸附miR-183-5p促进LRP6的表达.结论:circ_0000989通过调控miR-183-5p/LRP6轴促进RB细胞增殖、迁移和侵袭,为临床RB患者的诊断和治疗提供了潜在的分子靶点.

背景:研究表明环状RNA(circRNA)是广泛存在于多种组织中的内源性非编码RNA,可充当microRNA(miRNA)的"海绵"调节哺乳动物的基因表达.但circRNA在骨质疏松症中的表达特征和分子机制以及其潜在的circRNA-miRNA-mRNA调控网络尚未有相关报道.目的:基于骨质疏松相关非编码RNA高通量测序数据,构建互作网络及功能富集分析,筛选可能通过竞争性内源RNA(ceRNA)机制,并对筛选出的参与骨质疏松发生发展的circRNA进行功能和机制验证.方法:利用GEO数据库中的骨质疏松非编码RNA高通量测序数据,构建circRNA-miRNA-mRNA网络.随后,对miRNA预测的共表达靶基因进行GO和KEGG分析.采用人间充质干细胞诱导成骨细胞分化,qRT-PCR和Western blot检测筛选出的circ_0076906和其靶向的miR-29b及骨糖蛋白mRNA和蛋白的表达,碱性磷酸酶活性和茜素红染色检测骨形成情况,荧光素酶报告实验以检测基因之间的相互作用.结果 与结论:①实验从GEO数据库中最终筛选了5个共表达circRNA(如circ_0076906,circ_0004276和circ_0003060等)、10个共表达miRNA(如miR-183-5p,miR-29b和hsa-miR-15b-3p等)以及241个共表达mRNA(如骨糖蛋白基因、SMARCC1和LRP6等),并成功构建了骨质疏松相关circRNA-miRNA-mRNA网络;②GO分析结果揭示了78个生物过程,其主要包括成骨细胞增殖、凋亡和迁移等功能;③KEGG分析FoxO信号通路和PI3K-AKT信号通路传导途径与骨质疏松发生发展密切相关;④对筛选出的差异显著同时有靶向关系的circ_0076906、miR-29b和骨糖蛋白验证结果显示,circ_0076906、miR-29b及骨糖蛋白基因在疏松症患者和对照组骨组织和血清中均呈差异表达,circ_0076906可诱导成骨分化,其沉默可抑制人间充质干细胞的成骨相关基因(骨钙素和RUNX2)表达,circ_0076906可充当miR-29b调节的骨糖蛋白基因表达的海绵;⑤上述数据说明,实验成功构建了骨质疏松circRNA-miRNA-mRNA网络,筛选出的circ_0076906和其靶向的miR-29b及骨糖蛋白基因可能在骨质疏松进展中发挥重要作用;实验进一步证实了人间充质干细胞中circ_0076906通过竞争性抑制miR-29b从而促进骨糖蛋白表达,缓解骨质疏松症并促进成骨分化.该研究方案经新疆医科大学第七附属医院伦理委员会批准,批准号:XY20190501-1.

目的 探讨环状RNA低密度脂蛋白受体相关蛋白6(circ-LRP6)对卵巢癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及其分子机制.方法 选取44例卵巢癌患者的癌组织及癌旁组织,培养正常人卵巢上皮细胞HUM-CELL-0088及卵巢癌细胞系SKOV3、OVCAR3、A2780,采用实时荧光定量PCR检测卵巢癌组织和细胞中circ-LRP6、微小RNA-515-5p(miR-515-5p)的表达水平;双荧光素酶报告实验检测miR-515-5p与circ-LRP6之间的靶向关系;将circ-LRP6干扰表达载体、miR-515-5p过表达载体、miR-515-5p抑制表达载体与circ-LRP6干扰表达载体转染至卵巢癌细胞SKOV3中,蛋白质印迹法(Western blotting)检测细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)、基质金属蛋白酶(MMP)2、MMP9、白细胞介素6受体(IL-6R)蛋白的表达;CCK-8法检测SKOV3细胞活性;Transwell小室法检测细胞迁移和侵袭.结果 与癌旁组织及HUM-CELL-0088细胞相比,卵巢癌组织和SKOV3、OVCAR3、A2780细胞系中circ-LRP6表达水平显著升高,miR-515-5p表达水平显著降低(P<0.05).双荧光素酶报告实验证实circ-LRP6可靶向负调控miR-515-5p的表达.低表达circ-LRP6或过表达miR-515-5p均可抑制Cyclin D1、MMP2、MMP9、IL-6R的表达,降低细胞活性,抑制细胞迁移和侵袭(P<0.05).同时,抑制circ-LRP6和miR-515-5p表达可上调SKOV3细胞中Cyclin D1、MMP2、MMP9、IL-6R的表达,增强细胞活性,促进细胞迁移和侵袭(P<0.05).结论 抑制circ-LRP6表达可能通过上调miR-515-5p抑制IL-6,从而抑制卵巢癌SKOV3细胞的增殖、迁移和侵袭.

目的 分析体液游离细胞环状RNA LRP6(circ-LRP6)对食管鳞状细胞癌(ESCC)诊断和预后的评估效能.方法 选取2017年8月至2020年2月56例在我院接受根治性切除手术的ESCC患者和50例健康对照组人群的血清、尿液、唾液样本.采用实时荧光定量PCR(qPCR)检测游离细胞circ-LRP6表达.采用受试者工作特征(ROC)曲线评价体液游离细胞circ-LRP6诊断ESCC的效能.分析circ-LRP6表达与患者临床特征和预后的关系.结果 ESCC患者的血清[4.90(2.27,9.91)vs.0.64(0.24,1.04)]、尿液[2.31(0.89,5.26)vs.0.43(0.16,1.07)]、唾液[0.78(0.14,2.83)vs.0.08(0.03,0.26)]游离细胞circ-LRP6均显著高于健康对照组(P<0.001).ROC曲线结果显示,血清、尿液、唾液游离细胞circ-LRP6诊断ESCC的曲线下面积分别为0.897、0.803、0.793.TNM分期和T分期与3种体液游离细胞circ-LRP6表达均有关(P<0.05).血清、尿液和唾液中游离细胞circ-LRP6水平检测ESCC的灵敏度分别为80.6％、72.5％和80.4％,联合灵敏度为97.1％,高于常规肿瘤标志物的诊断敏感性(P<0.05).Kaplan-Meier生存曲线结果显示,血清、尿液、唾液游离细胞circ-LRP6高表达者的3年总生存率均较低表达者低(P<0.05).多因素Cox风险比例回归模型结果显示,SCC-Ag及血清、尿液、唾液游离细胞circ-LRP6表达均为影响ESCC患者OS的独立预后因素(P<0.05).结论 血清、尿液、唾液游离细胞circ-LRP6表达均对可切除ESCC有良好诊断及预测预后效能.