目的:探讨hsa_circ_0000670通过调控miR-515-5p/SIX1分子轴促进胃癌进展的分子机制。方法:收集2014—2015年南通大学附属如皋医院收治的35例胃癌患者的胃癌及癌旁正常组织，采用实时荧光定量聚合酶链反应法和Western blot法分别检测胃癌组织、癌旁正常组织、人胃上皮细胞GES-1、胃癌细胞AGS、HGC-27中circ_0000670、miR-515-5p、SIX1的表达水平；采用Pearson相关分析分析circ_0000670与miR-515-5p、miR-515-5p与SIX1、circ_0000670与SIX1的相关性。采用Kaplan-Meier法和Log rank检验分析circ_0000670低表达组(17例)和circ_0000670高表达组(18例)患者的生存情况。采用平板克隆形成实验检测细胞增殖能力，流式细胞术检测细胞周期及凋亡率，采用划痕实验、Transwell实验检测细胞迁移及侵袭能力，双荧光素酶报告实验检测circ_0000670与miR-515-5p、miR-515-5p与SIX1的靶向关系。分别将sh-NC、sh-circ_0000670转染至HGC-27细胞，将细胞注射入裸鼠体内，检测移植瘤体积及重量，并检测移植瘤组织中circ_0000670、miR-515-5p及SIX1蛋白的表达水平，Western blot法检测E-cadherin、Vimentin蛋白表达水平。结果:胃癌组织及细胞系中circ_0000670、SIX1的表达水平高于癌旁正常组织及胃上皮细胞GES-1，miR-515-5p的表达水平低于癌旁正常组织及胃上皮细胞GES-1(均 P<0.05)。circ_0000670低表达组患者5年生存率(82.4%)高于circ_0000670高表达组(28.7%， P＝0.034)。circ_0000670与miR-515-5p、miR-515-5p与SIX1呈负相关( r分别为－0.846、－0.615，均 P<0.001)，circ_0000670与SIX1呈正相关( r＝0.814， P<0.001)。转染si-circ_0000670或转染miR-515-5p mimic可减弱胃癌细胞AGS、HGC-27增殖、迁移及侵袭能力(均 P<0.05)，阻滞细胞于G 0/G 1期，增加细胞凋亡能力，提高E-cadherin蛋白表达水平，降低S期细胞比例及Vimentin蛋白表达水平(均 P<0.05)。双荧光素酶报告实验证实，circ_0000670可靶向调控miR-515-5p，miR-515-5p可靶向调控SIX1。共转染si-circ_0000670与miR-515-5p inhibitor可逆转转染si-circ_0000670对细胞增殖、迁移、侵袭、细胞周期及凋亡的作用(均 P<0.05)；共转染miR-515-5p mimic与pcDNA-SIX1可逆转转染miR-515-5p mimic对细胞增殖、迁移、侵袭、细胞周期及凋亡的作用(均 P<0.05)。sh-circ_0000670组小鼠移植瘤体积及重量[分别为(299.20±47.58)mm 3和(289.80±48.73)g]低于sh-NC组[分别为(596.20±125.46)mm 3和(538.00±114.39)g，均 P<0.05]，sh-circ_0000670组小鼠移植瘤组织中circ_0000670和SIX1表达水平降低，miR-515-5p的表达水平升高(均 P<0.05)。 结论:敲降circ_0000670的表达可通过调控miR-515-5p/SIX1分子轴从而减弱胃癌细胞增殖、迁移及侵袭能力，诱导细胞周期阻滞于G 0/G 1期及促进细胞凋亡。

目的:探讨去氧鬼臼毒素（DPPT）是否通过调控长链非编码RNA ZFPM2-AS1（LncRNA ZFPM2-AS1）/微小RNA-515-5p（miR-515-5p）分子轴而抑制结肠癌细胞增殖、迁移及侵袭。方法:体外培养人结肠癌LoVo细胞，随机分为Control组、DPPT-L组、DPPT-M组、DPPT-H组。甲基噻唑基四唑（MTT）检测细胞增殖；Transwell小室实验检测迁移及侵袭；实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测ZFPM2-AS1、miR-515-5p的表达水平；LoVo细胞中转染pcDNA-ZFPM2-AS1，采用上述方法检测细胞增殖、迁移及侵袭；双荧光素酶报告实验验证ZFPM2-AS1、miR-515-5p的靶向关系；蛋白免疫印迹法（Western blot）检测细胞周期蛋白1（CyclinD1）、基质金属蛋白酶-2（MMP-2）、基质金属蛋白酶-9（MMP-9）、P21的表达量。结果:与Control组比较，DPPT-L组、DPPT-M组、DPPT-H组细胞存活率降低（ P<0.05），迁移细胞数、侵袭细胞数减少（ P<0.05），CyclinD1、MMP-2、MMP-9蛋白水平降低（ P<0.05），P21蛋白水平升高（ P<0.05），ZFPM2-AS1表达水平降低（ P<0.05），miR-515-5p表达水平升高（ P<0.05），且DPPT-L组、DPPT-M组、DPPT-H组上述指标比较，差异均有统计学意义（ P<0.05）；ZFPM2-AS1可靶向结合miR-515-5p；与DPPT-H+pcDNA组比较，DPPT-H+pcDNA-ZFPM2-AS1组细胞存活率升高（ P<0.05），迁移细胞数、侵袭细胞数增多（ P<0.05），CyclinD1、MMP-2、MMP-9蛋白水平升高（ P<0.05），P21蛋白水平降低（ P<0.05）。 结论:DPPT可能通过下调ZFPM2-AS1的表达及上调miR-515-5p的表达从而抑制结肠癌细胞增殖、迁移及侵袭。

目的:探讨微小RNA-515-5p（miR-515-5p）是否可靶向内凝集素2（lectin 2，ITLN2）影响子宫内膜异位症（endometriosis，EMT）子宫内膜基质细胞（endometrial stromal cells，ESCs）的增殖、迁移和侵袭。方法:收集2020年12月至2021年12月期间在济宁医学院附属医院生殖医学科就诊治疗的24例EMT患者的在位内膜和异位内膜组织及18例行腹腔镜手术的非EMT患者的正常内膜组织。RT-qPCR检测内膜组织miR-515-5p、 ITLN2 mRNA相对表达量；Western blotting法检测内膜组织中ITLN2蛋白表达量。原代分离、培养EMT患者的ESCs，利用Lipofectamine 2000试剂转染ESCs，并将其分为空白组、miR-515-5p抑制剂组、miR-515-5p抑制剂阴性对照（negative control，NC）组，CCK-8法检测细胞增殖情况；划痕愈合和Transwell实验分别评估细胞迁移、侵袭能力；双荧光素酶报告基因检测miR-515-5p和ITLN2的靶向关系；RT-qPCR技术检测各组细胞miR-515-5p、 ITLN2 mRNA相对表达量；Western blotting技术检测ITLN2、白细胞介素（interleukin，IL）-1β、IL-6及肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）蛋白相对表达量。 结果:EMT患者在位和异位子宫内膜组织miR-515-5p相对表达量显著高于正常子宫内膜组织（均 P<0.001）， ITLN2 mRNA相对表达量显著低于正常子宫内膜组织，异位子宫内膜组织 ITLN2 mRNA相对表达量显著低于在位子宫内膜组织（均 P<0.001），EMT患者异位子宫内膜组织ITLN2蛋白质水平显著低于EMT在位和正常子宫内膜组织（均 P<0.001），EMT患者在位子宫内膜组织ITLN2蛋白质水平显著低于正常子宫内膜组织（ P<0.001）。miR-515-5p抑制剂组细胞存活率［（54.71±2.78）%］、划痕愈合率［（38.31±3.78）%］及侵袭数［（286.67±25.15）个］、miR-515-5p相对表达量、IL-1β、IL-6、TNF-α蛋白相对表达量均显著低于空白组［（100.00±0.00）%， P<0.001；（84.08±5.14）%， P<0.001；（515.67±22.19）个， P<0.001； P<0.001； P=0.012； P=0.010； P<0.001］， ITLN2 mRNA和蛋白相对表达量均显著高于空白组（ P<0.001； P<0.001）。经生物信息学分析和双荧光素酶报告基因检测， ITLN2为miR-515-5p的潜在靶基因。 结论:降低miR-515-5p水平可抑制EMT患者ESCs增殖、迁移和侵袭，这可能与靶向提高ITLN2表达进而降低炎症因子水平有关。

背景与目的:二线化疗方案治疗胃癌疗效欠佳,贝伐珠单抗属于抗血管生成分子靶向抗癌药物,信迪利单抗是一种国产的程序性死亡蛋白-1(programmed death-1,PD-1)抑制剂,两者结合是临床治疗胃癌的新方向.本研究旨在探究贝伐珠单抗辅助PD-1抑制剂治疗胃癌对血清miR-20a-5p和miR-515-3p的影响.方法:选取2019年1月—2021年7月于南京医科大学第四附属医院就诊的84例胃癌患者进行回顾性研究,根据治疗方案的不同将其分为观察组和对照组(每组各42例),对照组给予二线化疗方案治疗,观察组在对照组基础上给予贝伐珠单抗联合PD-1抑制剂(信迪利单抗)治疗,比较两组的客观缓解率(objective response rate,ORR)、疾病控制率(disease control rate,DCR)、血清肿瘤标志物、免疫功能指标、血清miR-20a-5p、miR-515-3p及不良反应总发生率.本研究已通过南京医科大学第四附属医院伦理委员会的伦理审批(批件号:20230531--K061).结果:观察组的ORR(69.05%)和DCR(85.71%)均高于对照组(40.48%、64.29%).观察组治疗后的血清糖类抗原12-5(carbohydrate antigen 12-5,CA12-5)、癌胚抗原(carcinoembryonic antigen,CEA)及细胞角蛋白19片段抗原21-1(cytokerantin-19-fragment antigen 21-1,CYFRA21-1)水平均低于对照组.观察组治疗后的CD4+T淋巴细胞、CD4+/CD8+T淋巴细胞比值均高于对照组,CD8+T淋巴细胞低于对照组,差异均有统计学意义(P＜0.05).观察组治疗后的血清miR-20a-5p、miR-515-3p水平均低于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05).观察组(28.57%)的不良反应总发生率与对照组(38.10%)相比,差异无统计学意义(P＞0.05).结论:贝伐珠单抗辅助信迪利单抗可有效地提高胃癌治疗效率,改善免疫功能,降低血清miR-20a-5p、miR-515-3p及肿瘤标志物表达量,且不会增加不良反应,效果显著.

目的 探讨溪黄草对circ_0091579/miR-515-5p及肺癌细胞A549 增殖和凋亡的影响.方法 将肺癌A549 细胞分为对照组、溪黄草(20、40、80 mg/L)组、si-circ_0091579 组、si-NC组、pcDNA-circ_0091579 组、pcDNA组、溪黄草+pcDNA-circ_0091579 组.CCK-8、平板克隆实验、流式细胞术检测A549 细胞抑制率、克隆形成数以及凋亡率.qRT-PCR检测circ_0091579 和miR-515-5p表达.双荧光素酶报告实验验证circ_0091579 和miR-515-5p相互作用.结果 溪黄草显著降低A549 细胞的增殖和克隆形成能力,促进细胞凋亡,诱导cleaved-Caspase-3 表达上调及circ_0091579 下调,且呈质量浓度依赖性.下调circ_0091579 可降低A549 细胞的增殖和克隆形成能力,促进细胞凋亡,诱导cleaved-Caspase-3表达上调.上调circ_0091579 可逆转溪黄草对A549 细胞的增殖抑制和凋亡促进功能.circ_0091579 和miR-515-5p直接特异性结合.结论 溪黄草可抑制肺癌细胞A549 增殖,诱导其凋亡,其机制与下调circ_0091579/miR-515-5p途径有关.

目的:探讨长链非编码RNA(lncRNA)GATA3反义RNA1(GATA3-AS1)靶向miR-515-5p对儿童急性淋巴细胞白血病(ALL)细胞增殖和凋亡的影响.方法:RT-qPCR检测对照者和ALL患儿血浆中GATA3-AS1和miR-515-5p 的表达水平.将人 ALL 细胞 Jurkat 分为 si-GATA3-AS1、si-NC、miR-NC、miR-515-5p,si-GATA3-AS1+anti-miR-NC和si-GATA3-AS1+anti-miR-515-5p共6组.CCK-8法检测细胞增殖,流式细胞术分析细胞凋亡,双荧光素酶报告实验用于确定GATA3-AS1和miR-515-5p的靶向关系.结果:ALL患儿血浆中GATA3-AS1表达水平显著高于对照者(P＜0.001),miR-515-5p表达水平显著低于对照者(P＜0.001).与si-NC组比较,si-GATA3-AS1组细胞抑制率、凋亡率、miR-515-5p表达水平显著升高(P＜0.001).与miR-NC组比较,miR-515-5p组细胞抑制率、凋亡率显著升高(P＜0.001).GATA3-AS1 与 miR-515-5p 直接特异性结合.与 si-GATA3-AS1+anti-miR-NC 组比较,si-GATA3-AS1+anti-miR-515-5p组细胞抑制率、凋亡率显著降低(P＜0.001).结论:下调GATA3-AS1可通过靶向上调miR-515-5p的表达抑制儿童ALL细胞增殖,并诱导细胞凋亡.

目的 探讨上皮性卵巢癌(EOC)组织中微小RNA-515-5p(miR-515-5p)、硫酸软骨素蛋白聚糖4(CSPG4)的表达及临床意义.方法 选取84例EOC患者,采用RT-qPCR法检测癌组织与癌旁组织中miR-515-5p、CSPG4 mRNA表达.采用Pearson相关系数分析EOC组织中miR-515-5p与CSPG4 mRNA表达的相关性.根据EOC组织中miR-515-5p、CSPG4 mRNA表达均值分为高、低表达者,采用Kaplan-Meier法绘制不同miR-515-5p、CSPG4 mRNA表达EOC患者的生存曲线.结果 与癌旁组织相比,卵巢癌组织中miR-515-5p表达低,CSPG4 mRNA表达高(P均<0.05).经TargetScan数据库预测miR-515-5p与CSPG4的3'-非翻译区210～216处存在结合位点,Pearson相关系数分析显示,EOC组织中miR-515-5p与CSPG4 mRNA表达呈负相关(r=-0.710,P<0.05).不同分化程度、国际妇产科联盟(FIGO)分期、淋巴结转移EOC组织中miR-515-5p、CSPG4 mRNA表达比较,差异均有统计学意义(P均<0.05).随访3年,84例EOC患者3年累积生存率为57.14%(48/84).K-M生存曲线分析显示,miR-515-5p高表达者累积生存率高于低表达者,CSPG4 mRNA高表达者累积生存率低于低表达者(P均<0.05).结论 EOC组织中miR-515-5p低表达和CSPG4 mRNA高表达,二者表达与分化程度、FIGO分期、淋巴结转移和预后有关;检测二者表达有助于判断EOC患者病情和预后评估.

目的 预测和印证调控蛋白激酶D1(PKD1)的微小RNA(miRNA),探讨其在蛙皮素诱导的大鼠急性胰腺炎(AP)中发挥的作用.方法 生物信息学软件预测PKD1的上游调控miRNA,并通过双荧光素酶报告基因和Western blot验证目标miRNA对PKD1表达的调控.采用蛙皮素(20μg/kg)腹腔注射(每隔1 h注射1次,连续6次)的方法构建AP模型.大鼠分为正常组(10只)、AP组(20只)和治疗组(20只),其中,正常组不做处理,AP组和治疗组分别在造模前腹腔注射对照miRNA和带CY5荧光基因的miRNA模拟体.AP组和治疗组各取10只在首次注射蛙皮素后6 h处死,其余在首次注射后24 h处死.所有动物下腔静脉采血检测血清淀粉酶、脂肪酶活力;采集胰腺组织包埋切片行免疫组织化学染色检测PKD1的表达,HE染色进行AP病理评分.结果 TargetSacn7.1软件预测miR-128-3p为PKD1潜在的调控miRNA,双荧光素酶报告基因和Western blot证实miR-128-3p与PRKD1 mRNA 3′UTR结合,抑制PKD1的蛋白表达.造模后6 h,AP组与治疗组血清淀粉酶和脂肪酶活力较正常组增高[13313.00(9424.00～15995.00)U/L、13552.00(10399.50～18408.25)U/L比1430.50(1214.25～1543.25)U/L;547.00(515.00～627.00)U/L、857.50(522.00～1222.25)U/L比34.00(32.50～34.75)U/L],差异均有统计学意义(χ2=8.715,P<0.05;χ2=9.115,P<0.05),提示造模成功.造模后24 h,治疗组PKD1免疫组织化学评分[0.50(0～2.75)分]较正常组[4.00(4.00～8.00)分]和AP组[4.00(3.75～8.00)分]均下降,差异有统计学意义(χ2=18.302,P<0.05).炎性细胞浸润和组织坏死明显好转,病理评分总分显著低于AP组(3.80±0.85比6.90±1.15,t=4.481,P<0.01).结论 miR-128-3p是PKD1的上游调控miRNA,可抑制PKD1介导的AP大鼠的组织坏死和炎性细胞浸润.

目的 旨在研究miR-515-5p在调控胃癌进展过程中的作用及机制.方法 通过qRT-PCR实验检测胃癌患者标本和胃癌细胞系中miR-515-5p的表达情况.将miR-515-5p模拟物转染至人MGC-803和SGC-7901细胞系.采用CCK-8和transwell实验检测细胞增殖和侵袭能力.qRT-PCR和Western blot实验检测相关mRNA和蛋白表达情况.荧光素酶报告基因实验证实miR-515-5p和Wnt3的靶向关系.结果 miR-515-5p在人胃癌组织和细胞系中的表达水平下调.过表达miR-515-5p可显著抑制胃癌细胞的增殖和侵袭能力.双荧光素报告实验证明Wnt3是miR-515-5p在胃癌细胞中的直接作用靶点.同时,拯救实验证明过表达Wnt3可以逆转miR-515-5p抑制胃癌细胞增殖和侵袭的能力.结论 miR-515-5p可以通过靶向Wnt3抑制胃癌细胞增殖和侵袭.

[目的]探讨miR-515-5p是否靶向SPHK1调控K562细胞的红系分化.[方法]通过TargetScan-Human网站分析miR-515-Sp与SPHK1的匹配情况,然后通过荧光素酶报告系统检测miR-515-5p是否靶向SPHK1;在miR-515-Sp mimics过表达或者miR-515-5p inhibitor敲低miR-7-5p的情况下,通过qPCR检测红系分化相关基因HBE、HBG1、HBB、GATA1、KLF1的表达量,通过WB检测红系分化标志蛋白CD71和CD235a的表达量.[结果]miR-515-5p靶向SPHK1的3'UTR;过表达miR-515-5p时,K562细胞的红系分化相关基因HBE、HBG1、HBB、GATA1、KLF1的表达量均下降(P＜0.05),SPHK1的表达量在d0和d4均下降(P＜0.05),红系分化标志蛋白CD71和CD235a的表达量在d4均上升(P＜0.05),但是d4时CD71和CD235a的表达量相对于对照组减少(P＜0.05);敲低miR-515-5p时,K562细胞的红系分化相关基因HBE、HBG1、HBB、GATA1、KLF1的表达量均上升(P＜0.05),SPHK1的表达量在d0和d4均上升(P＜0.05),红系分化标志蛋白CD71和CD235a的表达量在d4均上升(P＜0.05),但d4时CD71和CD235a的表达量相对于对照组增多(P＜0.05).[结论]miR-515-5p靶向SPHK1后抑制调控K562细胞的红系分化.