目的:研究环状Wolf-Hirschhorn综合征候选基因1(circ-WHSC1)对鼻咽癌细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭和放射敏感性的影响及分子机制。方法:收集2017年1月至2020年6月于郑州大学附属郑州中心医院手术治疗的23例鼻咽癌患者的癌组织和癌旁组织，采用实时荧光定量聚合酶链反应检测circ-WHSC1、miR-338-3p、果蝇胚胎致死视力异常样蛋白1(ELAVL1)mRNA的表达水平，Western blot检测ELAVL1蛋白的表达水平。将鼻咽癌细胞5-8F、SUNE1分为si-NC组、si-circ-WHSC1组、pCD5-ciR组、circ-WHSC1组、anti-miR-NC组、anti-miR-338-3p组、miR-NC组、miR-338-3p组、si-circ-WHSC1+anti-miR-NC组、si-circ-WHSC1+anti-miR-338-3p组、miR-338-3p+pcDNA组、miR-338-3p+ELAVL1组，采用四甲基偶氮唑蓝法检测细胞活性，克隆形成实验检测细胞克隆形成数及细胞放射敏感性，流式细胞术检测细胞凋亡，Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力，Western blot检测蛋白表达。采用双荧光素酶实验检测circ-WHSC1与miR-338-3p、miR-338-3p与ELAVL1的靶向关系。将稳定转染sh-circ-WHSC1的SUNE1细胞接种于裸鼠皮下，每隔3 d给予5 Gy红外线照射，23 d后测定移植瘤的体积和重量。结果:鼻咽癌组织中circ-WHSC1和ELAVL1 mRNA的表达水平分别为3.78±1.18和3.36±0.77，高于癌旁组织(1.57±0.94和1.28±0.74，均 P<0.001)；miR-338-3p mRNA的表达水平为1.37±0.98，低于癌旁组织(3.13±0.96， P<0.001)。鼻咽癌细胞C666-1、6-10B、5-8F和SUNE1中circ-WHSC1 mRNA的表达水平分别为1.64±0.14、2.00±0.21、2.81±0.26和3.36±0.34，均高于鼻咽上皮细胞NP69(1.00±0.10，均 P<0.05)。鼻咽癌细胞5-8F和SUNE1中miR-338-3p mRNA的表达水平分别为0.48±0.08和0.38±0.07，均低于鼻咽上皮细胞NP69(1.00±0.08，均 P<0.001)；ELAVL1蛋白的表达水平分别为2.51±0.19和3.27±0.27，均高于鼻咽上皮细胞NP69(1.00±0.08，均 P<0.001)。与si-NC组比较，敲除circ-WHSC1后，鼻咽癌细胞的相对细胞活性降低[5-8F细胞：(51.33±8.62)%比(100.00±8.00)%；SUNE1细胞：(41.02±7.31)%比(100.00±10.10)%；均 P<0.01]，克隆形成数减少[5-8F细胞：(50.33±8.02)个比(101.00±8.54)个；SUNE1细胞：(42.33±10.01)个比(114.00±14.10)个；均 P<0.01]，细胞凋亡率升高[5-8F细胞：(18.3±1.01)%比(5.37±1.20)%；SUNE1细胞：(22.43±1.40)%比(6.50±1.18)%；均 P<0.01]，迁移数减少[5-8F细胞：(72.33±9.50)个比(136.00±13.00)个；SUNE1细胞：(62.67±11.50)个比(154.00±14.10)个；均 P<0.01]、侵袭数减少[5-8F细胞：(60.67±9.07)个比(113.67±11.59)个；SUNE1细胞：(50.33±9.01)个比(124.33±15.57)个；均 P<0.01]；8 Gy射线照射后，细胞存活分数降低[5-8F细胞：0.06±0.01比0.23±0.04；SUNE1细胞：0.05±0.02比0.32±0.07；均 P<0.05]。circ-WHSC1靶向负调控miR-338-3p的表达，抑制miR-338-3p可逆转敲除circ-WHSC1对鼻咽癌细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭和放射敏感性的影响。miR-338-3p靶向负调控ELAVL1的表达，ELAVL1过表达可逆转上调miR-338-3p对鼻咽癌细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭和放射敏感性的影响。裸鼠成瘤实验显示，与sh-NC组相比，细胞接种后23 d，sh-circ-WHSC1组小鼠肿瘤体积缩小[(487.33±76.51)mm 3比(884.67±95.63)mm 3， P<0.001]，肿瘤重量降低[(558.67±75.04)mg比(899.01±88.54)mg， P＝0.002)]；5 Gy红外线照射后，裸鼠肿瘤体积减小[(243.13±42.51)mm 3比(395.00±73.50)mm 3， P<0.001]，肿瘤重量降低[(211.09±57.51)mg比(452.33±67.30)mg， P＝0.015]。 结论:鼻咽癌组织和细胞中circ-WHSC1高表达。circ-WHSC1通过靶向作用于miR-338-3p/ELAVL1轴影响鼻咽癌细胞的增殖、迁移、侵袭及放射敏感性。

目的:探讨环状链非编码RNA(Circ)WHSC1 调节微小RNA(miR)-212-3p/整合素相关蛋白(CD47)轴对子宫内膜癌(EC)细胞免疫逃逸和紫杉醇(PTX)耐药性的影响.方法:qRT-PCR检测EC细胞系(Ishikawa、RL95-2、HEC-1-A、HEC-1B)及人子宫内膜基质细胞(ESC)系CL0453 中CircWHSC1、miR-212-3p、CD47 mRNA表达水平;以Ishikawa细胞为研究对象,分为对照组、RNA干扰CircWHSC1 载体(sh-CircWHSC1)组、阴性对照(sh-NC)组、sh-CircWHSC1+miR-212-3p抑制剂(miR-212-3p inhibitor)组、sh-CircWHSC1+抑制剂阴性对照(inhibitor NC)组;CCK-8 分别检测各组Ishikawa细胞增殖及对PTX耐药性;流式细胞仪检测细胞凋亡状况;Western blot检测CD47 及免疫逃逸蛋白(B7-H1、PD-L1)表达;双荧光素酶验证miR-212-3p分别与CircWHSC1、CD47 靶向关系.结果:Ishikawa、RL95-2、HEC-1-A、HEC-1B细胞较CL0453 细胞CircWHSC1、CD47 mRNA均显著增加,miR-212-3p表达显著下降(P＜0.05);与对照组、sh-NC组相比,sh-CircWHSC1 组CircWHSC1、CD47 mRNA、增殖率、IC50、B7-H1、PD-L1 表达均显著下降,凋亡率、miR-212-3p表达显著增加(P＜0.05);与sh-Cir-cWHSC1+inhibitor NC组相比,sh-CircWHSC1+miR-212-3p inhibitor组CD47 mRNA、增殖率、IC50、B7-H1、PD-L1 表达均显著增加,凋亡率、miR-212-3p 表达显著下降(P＜0.05).miR-212-3p分别与CircWHSC1、CD47 存在靶向关系.结论:干扰CircWHSC1 表达可抑制Ishika-wa细胞增殖,降低PTX耐药性,促进其凋亡,并可能抑制癌细胞免疫逃逸,其作用机制可能是通过调控miR-212-3p/CD47 轴实现的.

目的:探讨环状RNA(circRNA)WHSC1调节miR-107/生物钟循环输出蛋白(CLOCK)轴对卵巢癌(OC)细胞增殖、凋亡和顺铂(DDP)耐药性的影响.方法:实时荧光定量PCR(qRT-PCR)、Western blot法检测人正常卵巢上皮细胞IOSE80、卵巢癌细胞(SKOV3、HO-8910、A2780)及卵巢癌DDP耐药株SKOV3/DDP中CircWHSC1、miR-107表达及CLOCK蛋白表达.将SKOV3细胞分为Ct组、si-NC组、si-CircWHSC1组、mimic NC组、miR-107 mimic组、si-CircWHSC1+inhibitor NC组、si-CircWHSC1+miR-107 inhibitor组;将SKOV3/DDP分为DDP组、DDP+si-NC组、DDP+si-CircWHSC1组、DDP+mimic NC组、DDP+miR-107 mimic组、DDP+si-CircWHSC1+inhibitor NC组、DDP+si-CircWHSC1+miR-107 inhibitor组.qRT-PCR检测SKOV3细胞和SKOV3/DDP细胞中CircWHSC1、miR-107表达;CCK-8法检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞凋亡;Western blot检测SKOV3细胞中CLOCK、增殖细胞核抗原(PCNA)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶-3(caspase-3)蛋白表达以及SKOV3/DDP细胞中CLOCK、多药耐药基因(MDR1)蛋白表达;双荧光素酶验证CircWHSC1与miR-107、miR-107与CLOCK的关系.结果:在OC细胞中,CircWHSC1、CLOCK蛋白高表达,miR-107低表达,且SKOV3细胞中CircWH-SC1、CLOCK蛋白表达最高,miR-107表达最低(P<0.05).与SKOV3细胞比较,SKOV3/DDP细胞中CircWHSC1、CLOCK蛋白表达升高,miR-107表达降低(P<0.05);沉默Circ-WHSC1或上调miR-107可抑制SKOV3细胞增殖,促进细胞凋亡;miR-107 inhibitor减弱了沉默CircWHSC1对SKOV3细胞增殖的抑制、细胞凋亡的促进作用;沉默CircWHSC1或上调miR-107可增强SKOV3/DDP细胞对DDP的敏感性并降低了MDR1蛋白表达;miR-107 inhibitor减弱了沉默CircWHSC1对SKOV3/DDP细胞DDP耐药性的降低作用.双荧光素酶报告基因结果显示,miR-107与CircWHSC1、CLOCK存在靶向关系.结论:沉默CircWHSC1可能通过海绵化miR-107下调CLOCK表达,进而抑制SKOV3细胞增殖,促进细胞凋亡,降低细胞对DDP的耐药性.