目的 检测子宫内膜癌病人血清circWHSC1和circPUM1表达水平,并探究其在子宫内膜癌中的诊断价值.方法 收集2018年6月至2020年6月自贡市第一人民医院120例子宫内膜癌病人、123例子宫内膜增生病人及125例体检健康者分别作为子宫内膜癌组、子宫内膜增生组与对照组.qRT-PCR法测定研究对象血清circWHSC1和circPUM1表达水平,分析血清circWHSC1和circPUM1表达水平与子宫内膜癌病人临床分期、分化程度的相关性,logistic回归分析血清circWHSC1和cir?cPUM1表达水平与子宫内膜癌发病的相关性;ROC曲线分析血清circWHSC1和circPUM1表达水平对子宫内膜癌的诊断价值.结果 与对照组、子宫内膜增生组相比,子宫内膜癌组病人血清circWHSC1(1.93±0.24比1.02±0.21、1.04±0.19)、circPUM1(1.76±0.25比1.01±0.18、1.02±0.17)表达水平均升高(P<0.05);高分化(G1)组、中分化(G2)组、低分化(G3)组子宫内膜癌病人血清circWHSC1、circPUM1表达水平均依次升高(P<0.05);Ⅰ期、Ⅱ期、Ⅲ期、Ⅳ期子宫内膜癌病人血清circWHSC1、circPUM1表达水平均依次升高(P<0.05);circWHSC1、circPUM1表达水平与子宫内膜癌的发病密切相关(OR=2.75、3.71,P<0.05);血清circWHSC1、circPUM1以及联合检测对子宫内膜癌诊断的曲线下面积为0.88(灵敏度为88.2％,特异度为81.5％)、0.82(灵敏度为79.8％,特异度为83.1％)、0.95(灵敏度为89.1％,特异度为93.5％).结论 子宫内膜癌病人血清circWHSC1、circPUM1表达水平均较高,且与病人临床分期和子宫内膜癌的分化程度有关,有望作为筛查子宫内膜癌病人的血清标志物,为子宫内膜癌的早期诊断做贡献.

目的 探讨环状 RNAcircWHSC1 在结肠癌发生发展过程中的作用及其相关分子机制.方法 选取 2017-01-01-2021-01-31 郑州人民医院病理确诊为结肠癌的 60 例患者癌及癌旁组织(距癌旁≥5 cm),按照circWHSC1 表达水平将患者分为高表达组(≥3.44,33 例)与低表达组(＜3.44,27 例).Kaplan-Meier plotter法分析circWHSC1 表达与患者预后生存的关联性.通过实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)检测circWHSC1、miR-142-3p和RAC1 的表达;采用蛋白质印迹法、CCK-8 和Transwell检测其蛋白的表达、细胞的增殖和转移能力;双荧光素酶报告基因和 RT-PCR验证circWHSC1、miR-142-3p和RAC1 三者之间的作用关系.结果 circWHSC1 在结肠癌患者癌组织(3.74±1.60)中的表达高于癌旁组织(1.07±0.58),t=7.572,P＜0.001;与circWHSC1 低表达组相比,circWHSC1 高表达组结肠癌患者的生存时间缩短,χ2=12.321,P＜0.001.结肠癌细胞系 HCT116 的circWHSC1 表达量最高,F=29.380,P＜0.001.敲低circWHSC1 可抑制 HCT116 细胞的增殖(t=12.775,P＜0.001)、迁移(t=46.973,P＜0.001)和侵袭能力(t= 40.935,P＜0.001).双荧光素酶报告基因显示,circWHSC1 与miR-142-3p具有靶向关系,而敲低circWHSC1 可增加HCT116 细胞中miR-142-3p表达水平,t=17.705,P＜0.001.在敲低circWHSC1 基础上应用miR-142-3p抑制剂则可以增强 HCT116 细胞的增殖(t=7.304,P=0.002)、迁移(t=16.049,P＜0.001)和侵袭能力(t=14.994,P＜0.001).miR-142-3p在结肠癌患者癌组织中的表达低于癌旁组织,t=12.599,P＜0.001.双荧光素酶报告基因实验证实,RAC1为miR-142-3p的靶基因,过表达miR-142-3p可抑制 HCT116 细胞中 RAC1 蛋白表达水平(t=25.162,P＜0.001),并且发现,在敲低circWHSC1 基础上过表达RAC1 同样可以增强 HCT116 细胞的增殖(t=7.658,P=0.002)、迁移(t= 62.626,P＜0.001)和侵袭能力(t=58.596,P＜0.001).RAC1 在结肠癌患者癌组织中的表达同样高于癌旁组织(t= 14.873,P＜0.001),敲低circWHSC1 可在抑制 HCT116 细胞中RAC1 表达的同时,抑制其下游 PAK1 蛋白 RAC1、PAK1及p-PAK1 的表达和激活,t值分别为 7.506、15.588 和 6.795,P值分别为 0.001、＜0.001 和 0.002.结论 circWHSC1可能通过调控miR-142-3p/RAC1/PAK1 轴参与结肠癌的发生过程,为未来临床结肠癌早期诊断和治疗提供新的靶点.

目的:探讨环状链非编码RNA(Circ)WHSC1 调节微小RNA(miR)-212-3p/整合素相关蛋白(CD47)轴对子宫内膜癌(EC)细胞免疫逃逸和紫杉醇(PTX)耐药性的影响.方法:qRT-PCR检测EC细胞系(Ishikawa、RL95-2、HEC-1-A、HEC-1B)及人子宫内膜基质细胞(ESC)系CL0453 中CircWHSC1、miR-212-3p、CD47 mRNA表达水平;以Ishikawa细胞为研究对象,分为对照组、RNA干扰CircWHSC1 载体(sh-CircWHSC1)组、阴性对照(sh-NC)组、sh-CircWHSC1+miR-212-3p抑制剂(miR-212-3p inhibitor)组、sh-CircWHSC1+抑制剂阴性对照(inhibitor NC)组;CCK-8 分别检测各组Ishikawa细胞增殖及对PTX耐药性;流式细胞仪检测细胞凋亡状况;Western blot检测CD47 及免疫逃逸蛋白(B7-H1、PD-L1)表达;双荧光素酶验证miR-212-3p分别与CircWHSC1、CD47 靶向关系.结果:Ishikawa、RL95-2、HEC-1-A、HEC-1B细胞较CL0453 细胞CircWHSC1、CD47 mRNA均显著增加,miR-212-3p表达显著下降(P＜0.05);与对照组、sh-NC组相比,sh-CircWHSC1 组CircWHSC1、CD47 mRNA、增殖率、IC50、B7-H1、PD-L1 表达均显著下降,凋亡率、miR-212-3p表达显著增加(P＜0.05);与sh-Cir-cWHSC1+inhibitor NC组相比,sh-CircWHSC1+miR-212-3p inhibitor组CD47 mRNA、增殖率、IC50、B7-H1、PD-L1 表达均显著增加,凋亡率、miR-212-3p 表达显著下降(P＜0.05).miR-212-3p分别与CircWHSC1、CD47 存在靶向关系.结论:干扰CircWHSC1 表达可抑制Ishika-wa细胞增殖,降低PTX耐药性,促进其凋亡,并可能抑制癌细胞免疫逃逸,其作用机制可能是通过调控miR-212-3p/CD47 轴实现的.

目的 探讨circWHSC1在多囊卵巢综合征患者中的表达以及circWHSC1对人卵巢颗粒细胞增殖、凋亡的影响.方法 收集45例多囊卵巢综合征患者和45例健康对照者的外周血标本,通过PCR检测circWHSC1的表达水平以及circWHSC1在经胰岛素处理的人卵巢颗粒细胞系(KGN)中的表达水平.应用生物信息学网站、双荧光素酶报告基因检测、RNA免疫沉淀RNA pull-down实验明确circWHSC1与miR-136的表达关系.Western blot实验检测经转染miR-136后KGN细胞中Bax及caspase-3的表达.结果 PCOS患者外周血以及经胰岛素处理的KGN细胞中circWHSC1的表达水平显著升高.高表达的circWHSC1可以促进KGN细胞增殖以及抑制凋亡.circWHSC1能够海绵吸附miR-136.高表达的miR-136可以增加Bax和caspase-3的表达,进而促进KGN细胞凋亡.结论 高表达的circWHSC1可以海绵吸附miR-136进而降低Bax以及caspase-3水平,抑制KGN细胞凋亡、促进KGN细胞增殖,进而促进PCOS进展.

目的:探讨环状RNA(circRNA)WHSC1调节miR-107/生物钟循环输出蛋白(CLOCK)轴对卵巢癌(OC)细胞增殖、凋亡和顺铂(DDP)耐药性的影响.方法:实时荧光定量PCR(qRT-PCR)、Western blot法检测人正常卵巢上皮细胞IOSE80、卵巢癌细胞(SKOV3、HO-8910、A2780)及卵巢癌DDP耐药株SKOV3/DDP中CircWHSC1、miR-107表达及CLOCK蛋白表达.将SKOV3细胞分为Ct组、si-NC组、si-CircWHSC1组、mimic NC组、miR-107 mimic组、si-CircWHSC1+inhibitor NC组、si-CircWHSC1+miR-107 inhibitor组;将SKOV3/DDP分为DDP组、DDP+si-NC组、DDP+si-CircWHSC1组、DDP+mimic NC组、DDP+miR-107 mimic组、DDP+si-CircWHSC1+inhibitor NC组、DDP+si-CircWHSC1+miR-107 inhibitor组.qRT-PCR检测SKOV3细胞和SKOV3/DDP细胞中CircWHSC1、miR-107表达;CCK-8法检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞凋亡;Western blot检测SKOV3细胞中CLOCK、增殖细胞核抗原(PCNA)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶-3(caspase-3)蛋白表达以及SKOV3/DDP细胞中CLOCK、多药耐药基因(MDR1)蛋白表达;双荧光素酶验证CircWHSC1与miR-107、miR-107与CLOCK的关系.结果:在OC细胞中,CircWHSC1、CLOCK蛋白高表达,miR-107低表达,且SKOV3细胞中CircWH-SC1、CLOCK蛋白表达最高,miR-107表达最低(P<0.05).与SKOV3细胞比较,SKOV3/DDP细胞中CircWHSC1、CLOCK蛋白表达升高,miR-107表达降低(P<0.05);沉默Circ-WHSC1或上调miR-107可抑制SKOV3细胞增殖,促进细胞凋亡;miR-107 inhibitor减弱了沉默CircWHSC1对SKOV3细胞增殖的抑制、细胞凋亡的促进作用;沉默CircWHSC1或上调miR-107可增强SKOV3/DDP细胞对DDP的敏感性并降低了MDR1蛋白表达;miR-107 inhibitor减弱了沉默CircWHSC1对SKOV3/DDP细胞DDP耐药性的降低作用.双荧光素酶报告基因结果显示,miR-107与CircWHSC1、CLOCK存在靶向关系.结论:沉默CircWHSC1可能通过海绵化miR-107下调CLOCK表达,进而抑制SKOV3细胞增殖,促进细胞凋亡,降低细胞对DDP的耐药性.