目的:探讨前列腺癌细胞中转化生长因子-β受体Ⅱ环状RNA(circTGFBR2)调节核糖核酸结合蛋白2(PTBP2)/胚胎致死性异常视觉样蛋白1(ELAVL1)激活SMAD2信号途径促进前列腺癌发生发展。方法:利用生物信息学方法，寻找与circTGFBR2结合microRNA以及其他相关蛋白结合位点，以及与PTBP2存在相互作用的RNA结合蛋白。PC3转染pcDNA3.1-circTGFBR2后，实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)检测circTGFBR2的表达。PC3细胞过表达circTGFBR2同时敲低微小RNA(microRNA，miR)-29b，蛋白质印迹法(Western blot)检测ALK5、SMAD2及p-SMAD2表达。PC3分别转染pcDNA3.1-circTGFBR2及对照质粒后，利用circTGFBR2特异性探针进行pulldown，检测PTBP2与circTGFBR2的相互作用。过表达circTGFBR2与ELAVL1，检测细胞上皮-间充质转化(EMT)的标志基因E-钙黏蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)及ZMYM1表达，以及Transwell检测细胞迁移。组间比较应用单因素方差分析。结果:分析结果显示circTGFBR2存在多个miR-29b结合的位点，ALK5(又名TGFBR1)mRNA 3’端非编码区(3’UTR)同样存在miR-29b的结合位点，并证实PTBP2与另一个RNA结合蛋白ELAVL1存在相互作用。用转化生长因子-β1(TGF-β1)刺激PC3细胞发现，circTGFBR2的表达高于对照组(1.83±0.02比1.03±0.02， F＝2 832.200， P<0.01)。PC3分别转染pcDNA3.1-circTGFBR2及对照质粒后，RT-qPCR检测circTGFBR2的表达，可见circTGFBR2组高于对照组(176.41±1.21比1.04±0.02， F＝63 426.15， P<0.01)。应用miR-29b抑制剂或circTGFBR2处理细胞后ALK5的蛋白水平明显高于对照组，应用miR-29b抑制剂同时过表达circTGFBR2后进一步增加ALK5的表达(分别为0.15±0.01、0.48±0.02、0.55±0.01、0.74±0.01， F＝1268.314， P<0.01)，并且SMAD2(分别为1.14±0.02、1.28±0.02、1.42±0.01、1.5±0.25， F＝4.852， P<0.01)和p-SMAD2(分别为0.18±0.02、0.36±0.01、0.65±0.01、0.94±0.02， F＝1663.667， P<0.01)的磷酸化水平也呈相同趋势。Pulldown-MS实验，多个蛋白质能与circTGFBR2结合，并证实PTBP2与circTGFBR2相互作用。与对照组比较，敲低前列腺癌细胞PTBP2或过表达circTGFBR2时，间质标志基因Vimentin表达高于对照组，而上皮样标志基因E-cadherin表达低于对照组，当同时过表达circTGFBR2并敲低PTBP2会逆转上述结果(Vimentin分别为0.22±0.02、0.87±0.02、0.85±0.02、0.6±0.01， F＝1319.52， P<0.01；E-cadherin分别为0.80±0.01、0.45±0.03、0.36±0.02、0.9±0.02， F＝614.919， P<0.01)。当过表达circTGFBR2或高表达ELAVL1时，PTBP2与ELAVL1的相互作用减弱，细胞EMT的标志基因E-cadherin表达低于对照组，Vimentin及ZMYM1表达高于对照组，Transwell检测细胞迁移高于对照组，而当同时高表达ELAVL1及circTGFBR2时，上述趋势会进一步增强(Vimentin分别为0.22±0.02、0.87±0.02、0.85±0.02、0.6±0.01， F＝1 319.52， P<0.01；E-cadherin分别为0.93±0.02、0.76±0.02、0.43±0.02、0.27±0.01， F＝1 108.46， P<0.01；ZMYM1分别为0.24±0.01、0.53±0.02、0.32±0.01、1.04±0.02， F＝2 023.794， P<0.01)。 结论:circTGFBR2通过调节PTBP2/ELAVL1激活SMAD2信号途径促进前列腺癌发生发展。

目的:研究环状Wolf-Hirschhorn综合征候选基因1(circ-WHSC1)对鼻咽癌细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭和放射敏感性的影响及分子机制。方法:收集2017年1月至2020年6月于郑州大学附属郑州中心医院手术治疗的23例鼻咽癌患者的癌组织和癌旁组织，采用实时荧光定量聚合酶链反应检测circ-WHSC1、miR-338-3p、果蝇胚胎致死视力异常样蛋白1(ELAVL1)mRNA的表达水平，Western blot检测ELAVL1蛋白的表达水平。将鼻咽癌细胞5-8F、SUNE1分为si-NC组、si-circ-WHSC1组、pCD5-ciR组、circ-WHSC1组、anti-miR-NC组、anti-miR-338-3p组、miR-NC组、miR-338-3p组、si-circ-WHSC1+anti-miR-NC组、si-circ-WHSC1+anti-miR-338-3p组、miR-338-3p+pcDNA组、miR-338-3p+ELAVL1组，采用四甲基偶氮唑蓝法检测细胞活性，克隆形成实验检测细胞克隆形成数及细胞放射敏感性，流式细胞术检测细胞凋亡，Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力，Western blot检测蛋白表达。采用双荧光素酶实验检测circ-WHSC1与miR-338-3p、miR-338-3p与ELAVL1的靶向关系。将稳定转染sh-circ-WHSC1的SUNE1细胞接种于裸鼠皮下，每隔3 d给予5 Gy红外线照射，23 d后测定移植瘤的体积和重量。结果:鼻咽癌组织中circ-WHSC1和ELAVL1 mRNA的表达水平分别为3.78±1.18和3.36±0.77，高于癌旁组织(1.57±0.94和1.28±0.74，均 P<0.001)；miR-338-3p mRNA的表达水平为1.37±0.98，低于癌旁组织(3.13±0.96， P<0.001)。鼻咽癌细胞C666-1、6-10B、5-8F和SUNE1中circ-WHSC1 mRNA的表达水平分别为1.64±0.14、2.00±0.21、2.81±0.26和3.36±0.34，均高于鼻咽上皮细胞NP69(1.00±0.10，均 P<0.05)。鼻咽癌细胞5-8F和SUNE1中miR-338-3p mRNA的表达水平分别为0.48±0.08和0.38±0.07，均低于鼻咽上皮细胞NP69(1.00±0.08，均 P<0.001)；ELAVL1蛋白的表达水平分别为2.51±0.19和3.27±0.27，均高于鼻咽上皮细胞NP69(1.00±0.08，均 P<0.001)。与si-NC组比较，敲除circ-WHSC1后，鼻咽癌细胞的相对细胞活性降低[5-8F细胞：(51.33±8.62)%比(100.00±8.00)%；SUNE1细胞：(41.02±7.31)%比(100.00±10.10)%；均 P<0.01]，克隆形成数减少[5-8F细胞：(50.33±8.02)个比(101.00±8.54)个；SUNE1细胞：(42.33±10.01)个比(114.00±14.10)个；均 P<0.01]，细胞凋亡率升高[5-8F细胞：(18.3±1.01)%比(5.37±1.20)%；SUNE1细胞：(22.43±1.40)%比(6.50±1.18)%；均 P<0.01]，迁移数减少[5-8F细胞：(72.33±9.50)个比(136.00±13.00)个；SUNE1细胞：(62.67±11.50)个比(154.00±14.10)个；均 P<0.01]、侵袭数减少[5-8F细胞：(60.67±9.07)个比(113.67±11.59)个；SUNE1细胞：(50.33±9.01)个比(124.33±15.57)个；均 P<0.01]；8 Gy射线照射后，细胞存活分数降低[5-8F细胞：0.06±0.01比0.23±0.04；SUNE1细胞：0.05±0.02比0.32±0.07；均 P<0.05]。circ-WHSC1靶向负调控miR-338-3p的表达，抑制miR-338-3p可逆转敲除circ-WHSC1对鼻咽癌细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭和放射敏感性的影响。miR-338-3p靶向负调控ELAVL1的表达，ELAVL1过表达可逆转上调miR-338-3p对鼻咽癌细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭和放射敏感性的影响。裸鼠成瘤实验显示，与sh-NC组相比，细胞接种后23 d，sh-circ-WHSC1组小鼠肿瘤体积缩小[(487.33±76.51)mm 3比(884.67±95.63)mm 3， P<0.001]，肿瘤重量降低[(558.67±75.04)mg比(899.01±88.54)mg， P＝0.002)]；5 Gy红外线照射后，裸鼠肿瘤体积减小[(243.13±42.51)mm 3比(395.00±73.50)mm 3， P<0.001]，肿瘤重量降低[(211.09±57.51)mg比(452.33±67.30)mg， P＝0.015]。 结论:鼻咽癌组织和细胞中circ-WHSC1高表达。circ-WHSC1通过靶向作用于miR-338-3p/ELAVL1轴影响鼻咽癌细胞的增殖、迁移、侵袭及放射敏感性。

目的 探究胚胎致死性异常视觉样蛋白1(ELAVL1)是否通过破骨细胞死亡调控糖尿病骨质疏松症(DOP).方法 选取2021年1月—2023年2月长沙市中心医院就诊的50例DOP患者和50例糖尿病但不伴随骨质疏松的患者作为研究对象,分别作为DOP组和对照组.比较两组患者血清ELAVL1、GPX4、Nrf2、ACSL4水平差异,分析ELAVL1与铁死亡相关基因(GPX4、Nrf2、ACSL4)的相关性.采用50 ng/mL RANKL孵育小鼠骨髓源性巨噬细胞RAW264.7以诱导破骨分化.对DOP组进行亚分组,以患者血清ELAVL1含量的平均值(14.94 ng/mL)为标准,分为ELAVL1低表达组(血清ELAVL1<14.94 ng/mL,28 例)及ELAVL1高表达组(血清ELAVL1>14.94 ng/mL,22例).将破骨细胞分为对照组、高糖组、高糖+sh-NC组、高糖+sh-ELAVL1组,比较各组ELAVL1、GPX4、核因子红细胞系2相关因子2(Nrf2)、酰基辅酶A合成酶长链家族成员4(ACSL4)、活性氧、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)、总铁含量、铁离子(Fe2+)表达量、线粒体膜电位.结果 ELAVL1高表达组与ELAVL1低表达组性别构成、年龄、糖尿病病程、BMI比较,差异均无统计学意义(P>0.05).ELAVL1高表达组T-score值低于ELAVL1低表达组(P<0.05),血清β-CTX、血清PINP高于ELAVL1低表达组(P<0.05).DOP组血清GPX4、Nrf2比对照组低(P<0.05),ACSL4比对照组高(P<0.05).经Pearson相关性分析结果表明,DOP患者血清ELAVL1表达与ACSL4呈正相关(r=0.689,P<0.05),与GPX4、Nrf2呈负相关(r=-0.312和-0.447,均P<0.05),血清ELAVL1与ACSL4呈正相关(r=0.689,P<0.05),血清ELAVL1与GPX4呈负相关(r=-0.559,P<0.05),血清ELAVL1与Nrf2呈负相关(r=-0.669,P<0.05).高糖组GPX4、Nrf2 mRNA较对照组降低(P<0.05),ELAVL1、ACSL3 mRNA较对照组升高(P<0.05),高糖+sh-ELAVL1组GPX4、Nrf2 mRNA较高糖+sh-NC组升高(P<0.05),ELAVL1、ACSL3 mRNA较高糖+sh-NC组降低(P<0.05).高糖组GPX4、Nrf2蛋白较对照组降低,ELAVL1、ACSL4蛋白较对照组升高(P<0.05),高糖+sh-ELAVL1组GPX4、Nrf2蛋白较高糖+sh-NC组升高(P<0.05),ELAVL1、ACSL4蛋白较高糖+sh-NC组降低(P<0.05).高糖组总铁含量及Fe2+表达量较对照组升高(P<0.05),高糖+sh-ELAVL1组较高糖+sh-NC组降低(P<0.05).高糖组MDA较对照组高(P<0.05),GSH较对照组低(P<0.05),高糖+sh-ELAVL1组MDA较高糖+sh-NC组低,GSH较高糖+sh-NC组高(P<0.05).结论 高糖条件诱导破骨细胞铁死亡,ELAVL1与DOP铁死亡有关,敲低ELAVL1可抑制高糖诱导的破骨细胞铁死亡.

胚胎致死性异常视觉蛋白(embryonic lethal abnormal vision,ELAV)家族属于RNA结合蛋白,其家族成员之一的ELAV1即人类抗原R蛋白(humanantigen R，HuR),广泛表达于小肠、脾脏、卵巢等组织中,通过转录后机制参与细胞中许多分子的调控表达[1].然而,其他家族成员HuB、HuC、HuD几乎只表达在神经组织中参与相关分子的表达调控[1].

目的 观察卵巢浆液性肿瘤组织中类胚胎致死性异常视觉基因1(ELAV1)、HCCR、MCM4表达情况,并分析其临床意义.方法 选取接受治疗的卵巢浆液性肿瘤患者为研究对象,并根据其病理类型分为良性肿瘤组和恶性肿瘤组.观察两组患者ELAV1、HCCR、MCM4表达情况,比较不同临床病理类型卵巢浆液性恶性肿瘤患者ELAV1、HCCR、MCM4表达的差异,分析影响卵巢浆液性恶性肿瘤患者ELAV1、HCCR、MCM4表达的因素.结果 卵巢浆液性恶性肿瘤组患者的ELAV1、HCCR、MCM4阳性表达率分别为60.00％、70.00％、80.00％,高于对照组的12.00％、8.00％、5.00％(P<0.001);临床分期为Ⅲ+Ⅳ期、组织学分级为中、低分化、有淋巴结转移的卵巢浆液性恶性肿瘤患者ELAV1、HCCR、MCM4蛋白阳性表达水平较高,不同年龄的卵巢浆液性恶性肿瘤患者ELAV1、HCCR、MCM4水平无明显差别;将单因素分析有意义的因素作为自变量,将ELAV1、HCCR、MCM4蛋白水平作为因变量进行多因素分析,结果显示,组织学分级是影响卵巢浆液性恶性肿瘤患者ELAV1、HCCR、MCM4蛋白水平的因素.结论 卵巢浆液性肿瘤患者的ELAV1、HCCR、MCM4阳性表达率较高,且受患者组织学分级的影响.

目的:观察沉默胚胎致死性异常视觉1(embryonic lethal abnormal visionlike 1,ELAVL1)基因表达对前列腺癌PC-3细胞生长的影响,并探讨可能的分子作用机制.方法:分别采用实时荧光定量PCR法、蛋白质印迹法、免疫组织化学法及免疫荧光法检测前列腺癌PC-3和正常前列腺上皮RWPE-1细胞中ELAVL1 mRNA和蛋白的表达水平并定位.将携带有特异性针对ELA VL1基因-shRNA (shELAVL1)的重组腺病毒Ad5-shELAVL1-GFP感染PC-3细胞以沉默ELAVL1基因的表达,同时以腺病毒空载体Ad5-GFP感染PC-3细胞作为对照组.通过CCK-8法检测细胞的增殖能力,FCM检测细胞周期,蛋白质印迹法检测PC-3细胞中环氧合酶2(cyclooxygenase-2,Cox-2)、细胞周期蛋白D1 (cyclin D1)、磷脂酰肌醇3-激酶(phosphatidylinositol 3-kinase,PI3K)、蛋白激酶B(protein kinase B,PKB,又称AKT)和磷酸化-AKT (phospho-Akt,p-AKT)蛋白的表达水平.建立PC-3细胞裸鼠皮下移植瘤模型,分别给予瘤内注射Ad5-shELAVL1-GFP、Ad5-GFP(对照组)及0.9％氯化钠溶液(空白对照组),观察移植瘤的生长情况.结果:PC-3细胞中ELAVL1 mRNA和蛋白的表达水平均高于RWPE-1细胞(P值均＜ 0.001);ELAVL1蛋白在PC-3细胞中主要表达于细胞质中,在RWPE-1细胞中则主要表达于细胞核中.沉默ELAVL1基因表达后,与对照组相比,PC-3细胞的增殖能力明显下降,G1期细胞所占百分比明显提高,而G2期细胞所占百分比明显减少(P值均＜0.05);同时,与细胞增殖有关的分子cyclin D1和Cox-2蛋白的表达水平明显降低,PI3K/AKT信号通路中PI3K、AKT及p-AKT的蛋白表达也明显下调(P值均＜0.05).与对照组相比,裸鼠移植瘤在经过Ad5-shELAVL1-GFP处理后移植瘤的生长减缓,移植瘤的体积和质量明显减小(P值均＜0.05).结论:ELAVL1蛋白在前列腺癌PC-3细胞中高表达且主要表达于细胞质中;ELAVL1蛋白可能通过PI3K/AKT经典肿瘤信号通路对前列腺癌细胞的生长起着促进作用.

胚胎致死性异常视觉样蛋白1(ELAVL1/HuR)是一种RNA结合蛋白,通过与特定的mRNA结合参与转录后调控,从而影响细胞增殖、凋亡、分化等生物学行为.近年来研究表明,ELAVL1与肿瘤细胞的增殖、血管生成、侵袭、转移及耐药性明显相关.本文就ELAVL1蛋白与肿瘤进展关系展开综述.