目的:探究circ-NDRG1 在口腔鳞状细胞癌组织中的表达及其通过靶向miR-1271 对口腔鳞状细胞癌HSC-3 细胞恶性生物学行为的影响.方法:利用TCGA数据库分析口腔鳞状细胞癌组织中circ-NDRG1 的表达水平,分析circ-NDRG1 表达与患者预后生存期的相关性.实时荧光定量PCR(qPCR)检测circ-NDRG1 在永生化口腔角质细胞(HOK)和口腔鳞状细胞癌HSC-3、SCC-25、CAL-27、Tca-8113 细胞中的表达水平.利用Lipofectamine 2000 将NC inhibitor、circ-NDRG1 inhibitor分别转染HSC-3 细胞,分别为Anti-NC组和Anti-circ-NDRG1 组.MTT法和Transwell小室实验分别检测各组HSC-3 细胞增殖和侵袭能力.Western blot检测各组HSC-3 细胞增殖蛋白(CDK3、Cyclin C)和上皮间质转化(EMT)蛋白(ZLF8、Notch、SIX1)表达.利用TCGA数据库分析口腔鳞状细胞癌组织中circ-NDRG1 与miR-1271 表达的关系.双荧光素酶报告实验验证circ-NDRG1 和miR-1271 的靶向关系.qPCR检测各组HSC-3 细胞中miR-1271 的表达.结果:TCGA数据库显示口腔鳞状细胞癌组织中circ-NDRG1 的表达高于癌旁组织(P<0.01).口腔鳞状细胞癌患者预后生存期与circ-NDRG1 表达水平呈负相关(P<0.01).与HOK细胞相比,HSC-3、SCC-25、CAL-27、Tca-8113 细胞中circ-NDRG1 呈高表达(P<0.01).与 Anti-NC组相比,低表达 circ-NDRG1 能够抑制HSC-3 细胞的增殖能力(P<0.05)和侵袭能力(P<0.01).与Anti-NC组相比,低表达circ-NDRG1 能够下调HSC-3 细胞中CDK3、Cyclin C、ZLF8、Notch、SIX1 蛋白的表达(P<0.01).口腔鳞状细胞癌组织中circ-NDRG1 表达水平与miR-1271 表达水平呈负相关(P<0.01).circ-NDRG1 能够靶向结合miR-1271(P<0.01).与Anti-NC组相比,低表达circ-NDRG1能够上调HSC-3 细胞中miR-1271 的表达(P<0.01).结论:口腔鳞状细胞癌组织中circ-NDRG1 呈高表达,沉默circ-NDRG1 通过靶向调控miR-1271 表达抑制口腔鳞状细胞癌细胞的增殖、侵袭和EMT进程.

目的:探讨环状RNA-EIF3I(circ-EIF3I)对肝细胞癌(HCC)生长转移的影响及其可能作用机制。方法:选取2014年5月至2015年10月河北医科大学第四医院收治的39例HCC患者为研究对象，其中男性29例，女性10例，年龄(62.2±5.6)岁。术中获取部分HCC组织与癌旁组织，用荧光定量聚合酶链反应或蛋白质印迹法分别检测二者circ-EIF3I和磷酸甘油酸激酶1(PGK1)的表达量；利用小分子RNA干扰和基因过表达实验调节其在Hep3B、Huh-7肝癌细胞中的表达，然后以噻唑兰细胞活力实验检测细胞增殖能力，Transwell实验检测细胞迁移及侵袭能力，最后以双荧光素酶报告实验检测靶向关系。结果:与癌旁组织比较，HCC组织中circ-EIF3I[(4.32±0.62)比(1.24±0.59)]和PGK1[(2.69±0.19)比(1.00±0.07)]的相对表达量升高，差异有统计学意义(均 P<0.05)。与阴性对照组比较，circ-EIF3I小分子干扰RNA组细胞活力降低[Hep3B：(55.3±7.5)%比(100.0±9.2)%；Huh-7：(42.7±6.0)%比(100.0±5.6)%]，迁移细胞数减少[Hep3B：(71.0±10.0)比(130.0±15.0)个；Huh-7：(50.0±8.5)比(125.0±10.0)个]，侵袭细胞数亦减少[Hep3B：(52.0±7.0)比(105.0±13.0)个；Huh-7：(60.0±8.0)比(144.0±11.0)个],差异均有统计学意义(均 P<0.05)。双荧光素酶报告实验证实circ-EIF3I可靶向结合miR-149-5p/miR-1271-5p，miR-149-5p/miR-1271-5p可靶向结合PGK1；PGK1过表达可明显逆转敲低circ-EIF3I对肝癌细胞增殖、迁移及侵袭的作用。 结论:敲低circ-EIF3I可通过调控miR-149-5p/miR-1271-5p/PGK1分子轴从而抑制HCC细胞增殖、迁移及侵袭。

[目的]评估炙马钱子胶囊医治硼替佐米相关性周围神经病(bortezomib induced peripheral neuropathy,BIPN)的有效性,初步探究其基于长链非编码RNA(long noncoding RNA,lncRNA)X失活特异性转录本(X inactive specific transcript,XIST)/锌指结构反义转录本1(ZNFX1 antisense RNA 1,ZFAS1)干预BIPN的机制.[方法]通过前瞻性非随机对照的研究方法,共收集20例符合多发性骨髓瘤中西医诊断并接受硼替佐米(bortezomib,BTZ)治疗而且发生BIPN接受炙马钱子胶囊治疗的患者,与未接受马钱子治疗的患者进行中医症候积分、神经毒性评分、周围神经病变(peripheral neuropathy,PN)分级、部分周围神经传导速度的比较.通过自身对照,采集治疗组患者的外周血液样本,使用酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测炎症相关因子表达.培养DRG 50B11细胞,通过细胞增殖毒性检测筛选马钱子最佳作用浓度和时间及BTZ最佳作用时间,随机分为正常对照组、BTZ 组、马钱子+BTZ 组,以实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time quantitative polymerase chain reaction,Real-time qPCR)检测炎症相关因子及细胞总RNA相关指标表达,分析差异性及相关性.[结果]临床研究显示,与对照组比较,患者治疗后PN、中医证候积分、神经毒性评分降低,周围神经传导速度增加(P＜0.05),无明显不良反应.实验研究显示,与治疗前比较,白细胞介素-17(interleukin-17,IL-17)、IL-1β、IL-6、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、神经生长因子(nerve growth factor,NGF)、脑源性神经营养因子(brain-derived neurotrophic factor,BDNF)表达均降低(P＜0.05),且与时间存在显著负相关性(P＜0.01).与BTZ 组比较,马钱子+BTZ组IL-17、TNF-α、IL-1β、IL-6、NGF、BDNF、lncRNA XIST、纤维粘连蛋白 1(fibronectin 1,FN1)、磷酸化局部黏着斑激酶(phospho-focal adhesion kinase,p-FAK)表达降低(P＜0.05),miR-96-5P、miR-1271-5P表达升高(P＜0.05),lncRNA ZFAS1 表达量差异无统计学意义(P＞0.05);lncRNA XIST表达与 IL-17、TNF-α、IL-1β、IL-6、NGF、BDNF、FN1、p-FAK表达显著正相关(P＜0.01),与miR-96-5P存在中等负相关性(P＜0.05),与miR-1271-5P存在极弱相关或无相关性(P＞0.05).[结论]炙马钱子胶囊在一定程度上可缓解BIPN且较为安全,其机制可能与调控lncRNA XIST,促进miR-96-5P/FN1表达,抑制p-FAK介导的神经炎症有关.

该研究旨在探讨苍膝通痹胶囊通过调控circRNA_0008365/miR-1271/p38 MAPK通路轴促进软骨细胞自噬抑制膝骨关节炎(KOA)进展的机制.于体内、体外分别构建软骨细胞和大鼠的骨关节炎模型,分别给予苍膝通痹胶囊、circRNA_0008365 干扰、空载对照、以及苍膝通痹胶囊合用circRNA_0008365 干扰进行干预.应用流式细胞术观察细胞凋亡,透射电镜观察自噬小体,Western blot观察各组软骨细胞自噬指标微管相关蛋白轻链 3(microtubule-associated protein light chain 3,LC3)Ⅱ/Ⅰ、自噬效应蛋白-1(Beclin-1)、选择性自噬接头蛋白p62/sequestosome 1(selective autophagy junction protein p62/sequesto-some 1,p62)、软骨细胞外基质代谢(collagen Ⅱ、ADAMTS-5)及 p-p38 MAPK的蛋白表达,qRT-PCR观察各组软骨细胞 circ RNA_0008365、miR-1271、collagen Ⅱ、ADAMTS-5的表达水平,hematoxylin-eosin(HE)染色观察各组大鼠膝关节软骨组织形态学的改变,ELISA观察各组软骨细胞炎性因子(IL-1β、TNF-α)的表达变化.体外实验结果显示,IL-1β诱导的软骨细胞 circ RNA_0008365 表达量下降,miR-1271、p38 MAPK表达量上升,自噬水平下降而凋亡率上升,软骨外基质的分解代谢增加;苍膝通痹胶囊的干预使KOA软骨细胞的circRNA_0008365 表达量回升,miR-1271、p38 MAPK表达量下降,自噬水平升高而凋亡率降低,软骨外基质的分解代谢减弱;而干扰circRNA_0008365 后,抑制了苍膝通痹胶囊的干预趋势.体内实验提示,苍膝通痹胶囊剂量依赖性的抑制了p38 MAPK通路的表达,增强了软骨细胞自噬,降低了KOA大鼠关节软骨的损害和炎症反应,从而抑制了KOA的进展.该研究表明,苍膝通痹胶囊能通过调控circRNA_0008365/miR-1271/p38 MAPK通路轴促进软骨细胞自噬,抑制KOA的发展.

目的:探讨地西他滨(5-Aza-dC,decitabine,DAC)在结直肠癌细胞miiR-1271-5p表达调控中的作用和机制.方法:生物信息学分析miR-1271-5p在结直肠腺癌组织和正常结直肠组织中的表达水平,荧光定量-聚合酶链反应(qRT-PCR)检测人结直肠癌细胞系(SW620、HCT116和LOVO)和正常结肠上皮细胞NCM460中miR-1271-5p的表达水平.Western blot验证过表达miR-1271-5p后对HCT116和LOVO细胞增殖和迁移的作用.生物信息学软件预测miR-1271-5p启动子区甲基化岛,甲基化特异性PCR(methylation-specific PCR,MSP)检测miR-1271-5p启动子区的甲基化水平.使用DAC分别处理HCT116和LOVO细胞,MSP和qRT-PCR分别检测DAC对miR-1271-5p启动子甲基化状态和表达的影响.在2种结直肠癌细胞中转染miR-1271-5p抑制物(inhibitor),并同时使用DAC处理细胞,平板克隆实验、Transwell实验和Western blot实验检测细胞的增殖和迁移能力.结果:miR-1271-5p在结直肠腺癌组织和癌细胞中表达均显著下调.miR-1271-5p过表达可显著促进上皮细胞标志物E-cadherin的表达,抑制间质细胞标志物Vimentin及增殖标志物PCNA的表达.miR-1271-5p的启动子区存在多个甲基化岛,且结直肠癌细胞中miR-1271-5p启动子区的甲基化水平显著高于正常结直肠细胞.DAC处理后,HCT116和LOVO细胞中miR-1271-5p启动子区的甲基化水平显著降低,miR-1271-5p的表达显著增强,DNMT3B的表达显著降低.DAC可逆转miR-1271-5p低表达对结直肠癌细胞增殖和迁移的促进作用.结论:抑癌分子miR-1271-5p在结直肠癌细胞中的低表达与其启动子区的高甲基化状态有关,DAC可通过降低miR-1271-5p启动子区的甲基化水平增强其表达,并恢复其抑癌作用.

目的 研究miR-1271-5p对大鼠心肌细胞增殖和凋亡的作用,以及对肌浆网钙ATP酶(SERCA2a)表达的影响,为临床上心衰药物研发提供临床前期数据. 方法 转染miR-1271-5p mimics(模拟物)至大鼠心肌细胞,MTS法检测心肌增殖情况;用实时荧光定量PCR方法检测miR-1271-5p对心肌细胞SERCA2a表达的影响. 结果 miR-1271-5p转染组心肌细胞活力明显高于对照miRNA转染组(P＜0.05),但SERCA2a表达水平没有显著差异. 结论 miR-1271-5p促进心肌细胞增殖,对临床心衰治疗有应用前景.

目的 探讨微小RNA-1271 (miR-1271)对胰腺癌中Rab34表达的影响.方法 收集22例胰腺癌患者癌组织和对应癌旁组织标本.采用qRT-PCR检测癌组织和癌旁组织Rab34和miR-1271 mRNA表达水平,IHC和Western blot检测Rab34蛋白表达水平.细胞转染法检测miR-1271模拟物对胰腺癌细胞Rab34表达的影响,双荧光素酶报告基因检测系统验证miR-1271结合Rab34的3'非翻译区靶位点.结果 与癌旁组织相比,Rab34 mRNA和蛋白在胰腺癌组织中表达升高(P＜0.05),miR-1271mRNA表达降低(P＜0.05).miR-1271模拟物转染后抑制了胰腺癌细胞Rab34蛋白的表达.Rab34是miR-1271作用的靶基因.结论 Rab34可能是胰腺癌的分子标志物,miR-1271可调控其表达.

目的 探究miR-1271-5p对宫颈鳞状细胞癌 ( cervical squamous cell carcinoma, CSCC) 细胞迁移和侵袭能力的影响, 初步阐明miR-1271-5p对癌基因叉头框蛋白Q1 ( forkhead box Q1, FOXQ1) 的靶向调控机制.方法 收集2018年1月至2018年10月在华中科技大学同济医学院附属武汉中心医院行手术切除的41例CSCC患者的癌和癌旁组织标本, 应用RT-qPCR检测组织中miR-1271-5p和FOXQ1 mRNA的表达水平, 分析miR-1271-5p和FOXQ1 mRNA表达的相关性; RT-qPCR检测 miR-1271-5p和 FOXQ1 mRNA在人CSCC细胞株 (SiHa和CaSki) 及人宫颈永生化鳞状细胞株 ( End1/E6E7) 中的表达水平; 应用miR-1271-5p模拟物转染SiHa细胞, 分别采用划痕实验和Transwell小室检测miR-1271-5p对细胞迁移和侵袭能力的影响; 采用Western印迹检测miR-1271-5p对FOXQ1、 E-cadherin和Vimentin蛋白表达水平的影响; 最后, 应用双荧光素酶报告基因验证miR-1271-5p对FOXQ1的靶向调控作用.结果 miR-1271-5p在CSCC组织中的表达水平显著低于癌旁组织 (P<0.001), 在人CSCC细胞株 (SiHa和CaSki) 中的表达水平也均低于人宫颈永生化鳞状细胞株 (End1/E6E7) (P<0.001); 与转染阴性对照细胞比较, 转染miR-1271-5p模拟物的SiHa细胞的迁移和侵袭能力明显受到抑制 (P<0.05). FOXQ1 mRNA和蛋白在CSCC组织中的表达水平均显著高于癌旁组织 (P<0.001), 相关性分析显示, FOXQ1 mRNA的表达水平与miR-1271-5p呈负相关 (r = -0.612, P<0.001).在转染miR-1271-5p模拟物后, SiHa中FOXQ1和Vimentin蛋白表达水平均降低, 而E-cadherin蛋白表达增高.双荧光素酶报告基因试验确认miR-1271-5p可通过与FOXQ1 mRNA的3′-非翻译区 (3′-untranslated re-gion, 3′UTR) 直接结合, 靶向调控FOXQ1的表达.结论 miR-1271-5p在CSCC中表达下调, 其可通过靶向抑制FOXQ1的表达调节细胞的上皮间质转化状态, 从而抑制CSCC细胞的迁移和侵袭.

目的 探讨miR-1271对人肾癌细胞增殖及迁移的影响及其分子机制.方法 采用实时荧光定量PCR法分别检测miR-1271在人肾正常、癌组织和癌细胞系中的表达水平,并运用OncoLnc网站分析miR-1271与肾癌患者生存期的相关性.采用脂质体转染技术分别将miR-1271 mimic和miR-1271 inhibitor转染至786-O细胞,应用MTT法和Transwell侵袭实验分别检测细胞的增殖和侵袭能力.预测miR-1271可能的靶基因,然后通过荧光素酶实验验证,最后对靶蛋白进行荧光定量PCR和western blot实验验证.结果 miR-1271在肾癌组织和肾癌细胞系中的表达较肾癌旁组织和正常肾细胞系低(P<0.05),miR-1271与肾癌患者预后呈负相关.miR-1271在786-O细胞中过表达可以降低细胞的增殖和侵袭能力(P<0.05),反之则增强786-O细胞的增殖和侵袭能力(P<0.05),mTOR为miR-1271的一个直接靶向基因,过表达miR-1271能降低mTOR的表达水平,而降低miR-1271的表达则可以增加mTOR的表达水平.结论 miR-1271在肾癌患者和肾癌细胞中低表达,导致靶蛋白mTOR表达升高,进而促进肾癌细胞的增殖和侵袭.

目的 探讨miR-1271-5p在胃癌组织和细胞中的表达及其对胃癌细胞增殖、侵袭和迁移的影响.方法 收集2011年6月至2014年6月广西医科大学附属肿瘤医院90例手术切除胃癌组织及相应癌旁组织.采用qRT-PCR法检测胃癌组织及相应癌旁组织,人胃癌细胞系(SGC-7901、MGC-803、AGS)和人正常胃黏膜上皮细胞系GES1中miR-1271-5p的表达情况.利用瞬时转染法将miR-1271-5p mimics(过表达miR-1271-5p组)和miR-NC(阴性对照组)分别转染胃癌AGS细胞,建立过表达miR-1271-5p的胃癌AGS细胞系,然后采用CCK-8法检测转染后的胃癌AGS细胞增殖能力,平板克隆形成实验检测细胞克隆形成能力,Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力.结果 miR-1271-5p在胃癌组织和胃癌细胞(SGC-7901、MGC-803、AGS)中的表达均低于相应癌旁组织及人正常胃黏膜上皮GES1细胞(均P＜O.01).与阴性对照组相比,过表达miR-1271-5p组胃癌AGS细胞增殖活力降低(P＜0.01),细胞集落形成数减少(P＜0.01),迁移和侵袭细胞数量亦减少(P＜0.01).结论 miR-1271-5p在胃癌组织和细胞中低表达,上调miR-1271-5p可抑制胃癌AGS细胞的增殖、迁移和侵袭.