目的:探讨长链非编码RNA LINC－PINT对骨肉瘤细胞增殖和凋亡的影响机制。方法:应用实时荧光定量聚合酶链反应检测正常成骨细胞hFOB和人骨肉瘤细胞HOS、MG63和SAOS2中LINC－PINT和miR－524－5p的表达。应用脂质体法转染至pcDNA组(转染pcDNA)、pcDNA－LINC－PINT组(转染pcDNA－LINC－PINT)、si－NC组(转染si－NC)、si－LINC－PINT组(转染si－LINC－PINT)、miR－NC组(转染miR－NC)、miR－524－5p组(转染miR－524－5p mimics)、pcDNA－LINC－PINT＋miR－NC组(共转染pcDNA－LINC－PINT和miR－NC)和pcDNA－LINC－PINT＋miR－524－5p组(共转染pcDNA－LINC－PINT和miR－524－5p)HOS细胞，Western blot检测细胞中PCNA和cleaved－caspase－3蛋白的表达，四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞的增殖情况，流式细胞术检测细胞的凋亡情况，双荧光素酶报告基因检测实验检测细胞的荧光活性。结果:人骨肉瘤细胞HOS、MG63和SAOS2中LINC－PINT的表达水平分别为0.18±0.01、0.33±0.01和0.42±0.01，miR－524－5p的表达水平分别为2.65±0.23、1.68±0.14和1.51±0.13，与正常成骨细胞hFOB(分别为1.00±0.08和1.00±0.06)比较，差异均有统计学意义(均 P<0.05)。培养48、72 h时，pcDNA－LINC－PINT组HOS细胞的吸光度( A)值分别为0.41±0.05和0.57±0.05，pcDNA组细胞的 A值分别为0.62±0.05和1.06±0.09，差异均有统计学意义(均 P<0.01)。pcDNA－LINC－PINT组和pcDNA组细胞的凋亡率分别为(25.28±2.15)%和(9.01±0.17)%，差异有统计学意义( P<0.01)。与miR－NC组(1.00±0.03)比较，miR－524－5p组WT－LINC－PINT细胞的荧光活性(0.31±0.03)降低，差异有统计学意义(均 P<0.01)。过表达miR－524－5p可逆转LINC－PINT对HOS细胞的增殖抑制和凋亡促进作用。 结论:长链非编码RNA LINC－PINT可抑制骨肉瘤细胞的增殖，促进凋亡，其作用机制与靶向miR－524－5p有关，可为骨肉瘤的治疗提供新的作用靶点。

目的:研究晚期胃癌中miR-524-5p与性别决定区Y框蛋白9(SOX9)表达的相关性及其对化疗疗效和预后的影响。方法:选择2015年1月至2017年12月在中国人民解放军联勤保障部队第九一〇医院诊断为晚期胃癌并接受DCF(多西他赛+顺铂+氟尿嘧啶)方案化疗的82例患者作为研究对象，采用荧光定量PCR法检测胃癌组织中miR-524-5p、SOX9的表达水平，分析miR-524-5p与SOX9表达的相关性，比较不同miR-524-5p、SOX9表达水平患者化疗总有效率，分析miR-524-5p联合SOX9对化疗疗效的预测价值，分析患者的总生存期(OS)及无进展生存期(PFS)。结果:miR-524-5p、SOX9的表达与晚期胃癌患者的性别、年龄无关(均 P>0.05)，与晚期胃癌患者的分化程度( χ2＝3.577， P＝0.001； χ2＝5.654， P<0.001)、远处转移( χ2＝2.466， P＝0.016； χ2＝5.218， P<0.001)有关。晚期胃癌中miR-524-5p与SOX9的表达呈负相关( r＝-0.348， P＝0.001)。根据胃癌组织miR-524-5p、SOX9表达中位数分为高表达与低表达患者，miR-524-5p≥0.64为高表达( n＝41)，<0.64为低表达( n＝41)；SOX9≥1.84为高表达( n＝41)，<1.84为低表达( n＝41)。miR-524-5p高表达晚期胃癌患者的总有效率58.54%(24/41)高于miR-524-5p低表达患者的24.39%(10/41)，差异有统计学意义( χ2＝9.484， P＝0.002)；SOX9高表达晚期胃癌患者的总有效率21.95%(9/41)，低于SOX9低表达患者的60.98%(25/41)，差异有统计学意义( χ2＝12.863， P<0.001)。受试者工作特征曲线分析显示，miR-524-5p和SOX9的表达对化疗疗效具有预测价值，曲线下面积分别为0.753(95% CI为0.644~0.861， P<0.001)和0.660(95% CI为0.540~0.780， P＝0.014)。miR-524-5p联合SOX9对化疗疗效具有预测价值，曲线下面积为0.768(95% CI为0.667~0.868， P<0.001)。miR-524-5p高表达晚期胃癌患者的中位PFS为8个月，中位OS为14个月，均长于miR-524-5p低表达患者(6个月、9个月)，差异均有统计学意义( χ2＝21.160， P<0.001； χ2＝29.730， P<0.001)；SOX9高表达晚期胃癌患者的中位PFS为7个月，中位OS为10个月，均短于SOX9低表达患者(8个月、12个月)，差异均有统计学意义( χ2＝6.345， P＝0.012； χ2＝4.107， P＝0.043)。 结论:晚期胃癌组织中miR-524-5p与SOX9的表达呈负相关，miR-524-5p高表达、SOX9低表达的患者化疗疗效及预后均优于miR-524-5p低表达、SOX9高表达的患者。

目的:探讨外泌体长链非编码RNA(lncRNA)TTN-AS1通过miR-524-5p介导转化生长因子β(TGFβ)/Smads信号通路,进而调控乳腺癌进展的分子机制.方法:首先采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测人乳腺癌细胞MDA-MB-231、MCF-7、SKBR-3 和乳腺上皮细胞 MCF-10A 中 lncRNA TTN-AS1 和 miR-524-5p 表达量,Western blot 法检测 TGFβ1 和 p-Smad2蛋白的表达量.然后采用细胞转染技术抑制lncRNATTN-AS1表达,比较MDA-MB-231(阴性对照)和转染组lncRNATTN-AS1、miR-524-5p、TGFβ1和p-Smad2表达量.CCK8法检测细胞增殖力,流式细胞术检测凋亡率,Transwell小室检测迁移力.结果:与MCF-10A 相比,MDA-MB-231、MCF-7 和 SKBR-3 中 lncRNA TTN-AS1 表达量显著升高,而 miR-524-5p 明显下降,TGFβ1 和p-Smad2上调(P＜0.05).与阴性对照相比,转染组lncRNA TTN-AS1表达量显著降低,而miR-524-5p明显增加,TGFβ1和p-Smad2下调(P＜0.05).细胞增殖率和迁移细胞数目明显下降,而凋亡率增加(P＜0.05).结论:lncRNATTN-AS1在乳腺癌的进展中可能发挥促癌效应,通过抑制miR-524-5p表达并激活TGFβ1/Smad2信号通路活性来参与调控乳腺癌的增殖与凋亡.lncR-NA TTN-AS1 有望成为靶向干预乳腺癌的新型分子位点.

目的 筛选结肠癌差异表达的 lncRNA和 miRNA,探讨其与结肠癌预后的关系及相关生物学功能.方法从TCGA数据库收集结肠癌患者的 lncRNA和 miRNA 表达谱数据及临床资料,利用 R 软件筛选差异表达的 ln-cRNA和 miRNA;单因素Cox回归分析与预后显著相关的差异表达 lncRNA和 miRNA;miRNet数据库构建预后相关的lncRNA-miRNA网络,利用mirPath v.3 软件对其进行功能富集分析;R软件构建预后风险模型并对其进行验证.采用CCK-8 实验、划痕实验、流式细胞术及 qPCR评估敲减 TSPEAR-AS2 对人结肠癌 HCT116 细胞增殖、迁移、凋亡及下游 miRNA表达的影响.结果 筛选出结肠癌组织中 1823 个差异表达的 lncRNA和 524 个差异表达的 miRNA;发现 158 个lncRNA和 31 个 miRNA与结肠癌的预后相关;构建由 8 个lncRNA和 14 个 miRNA 组成的 lncRNA-miRNA网络;GO 和KEGG富集分析显示,lncRNA-miRNA网络主要参与肿瘤相关的生物学功能及通路;鉴定出 11 个能有效评价结肠癌预后特征的关键基因,由这 11 个关键基因构建的预后风险模型中高风险组生存时间显著短于低风险组(P＜0.001),预测 1、3 和 5 年生存的AUC分别为 0.70、0.74 和 0.71.敲减TSPEAR-AS2可抑制 HCT116 细胞增殖、迁移、促进细胞凋亡,并下调 hsa-mir-4731-5p和 hsa-mir-342-3p 的表达.结论 成功筛选结肠癌相关 lncRNA-miRNA网络,并由此构建的预后风险模型具有良好的预测效能.TSPEAR-AS2 参与调控结肠癌细胞的增殖、迁移、凋亡以及下游 miRNA表达.

目的 探讨miR-524-5p调控HEG1表达对食管癌细胞增殖、上皮间质转化(EMT)的作用机制.方法 qRT-PCR检测食管癌细胞和正常食管上皮细胞中miR-524-5p和HEG1 mRNA表达水平.将KYSE30细胞分为miR-524-5p mimic组、miR-524-5p NC组、miR-524-5p mimic+pcDNA3.1组和miR-524-5p mimic+pcDNA3.1-HEG1组, 另设置不转染的细胞为正常对照组( Control 组) .CCK-8法检测KYSE30细胞增殖能力;Western blot检测EMT相关蛋白、侵袭迁移相关蛋白和HEG1蛋白表达,划痕实验和Transwell实验检测KYSE30细胞迁移和侵袭能力,双荧光素酶报告基因检测miR-524-5p和HEG1靶向关系.结果 miR-524-5p在四种食管癌细胞系TE-1、KYSE30、KYSE150、NEC中均低表达(P<0.05),选择表达水平最低的KYSE30细胞作为后续实验细胞.HEG1 mRNA在四种食管癌细胞中均高表达(P<0.05),并且GEPIA数据库显示HEG1在食管癌组织中高表达(P<0.05).与miR-524-5p NC组相比,miR-524-5p mimic组KYSE30细胞增殖能力、克隆形成数、间质标志蛋白水平、迁移和侵袭能力显著降低,上皮标志蛋白E-cadherin水平显著上调(P<0.05);miR-524-5p mimic+pcDNA3.1-HEG1组可以明显逆转过表达miR-524-5p对于KYSE30细胞增殖和上皮间质转化、侵袭转移的抑制作用(P<0.05).miR-524-5p mimic组与WT-HEG1共转染组细胞荧光素酶活性显著低于miR-524-5p NC组与WT-HEG1共转染组(P<0.05).结论 miR-524-5p在食管癌细胞和组织中低表达,过表达miR-524-5p可以负向调节HEG1在食管癌细胞系KYSE30细胞中的表达,抑制KYSE30细胞的增殖、EMT进程和侵袭迁移能力.

目的 探讨lncRNA FGD5-AS1 对前列腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及分子机制.方法 培养正常人前列腺上皮细胞P69 及前列腺癌细胞系LNCaP、DU145、PC-3;qRT-PCR检测lncRNA FGD5-AS1 和miR-524-5p的表达水平;将LNCaP细胞分为si-lncRNA FGD5-AS1 组、si-NC组、miR-524-5p组、miR-NC组、anti-miR-524-5p+si-lncRNA FGD5-AS1 组、anti-miR-NC+si-lncRNA FGD5-AS1 组;CCK-8 检测细胞活性;克隆形成实验检测细胞克隆数;Transwell检测细胞迁移和侵袭;双荧光素酶报告实验检测lncRNA FGD5-AS1 和miR-524-5p的靶向关系.结果 与正常人前列腺上皮细胞P69 相比,前列腺癌细胞系LNCaP、DU145、PC-3 中lncRNA FGD5-AS1 表达水平升高,miR-524-5p表达水平降低(P＜0.05).干扰lncRNA FGD5-AS1 表达或miR-524-5p过表达后,细胞活性降低,细胞克隆数、迁移和侵袭数量减少(P＜0.05).lncRNA FGD5-AS1 靶向调控miR-524-5p;抑制miR-524-5p表达逆转了干扰lncRNA FGD5-AS1 对前列腺癌细胞LNCaP增殖、迁移和侵袭的影响.结论 干扰lncRNA FGD5-AS1 表达通过靶向上调miR-524-5p抑制前列腺癌细胞LNCaP的增殖、迁移和侵袭.

目的 研究ZIC5(Zic family member 5)在前列腺癌中的异常表达及其对前列腺癌生物学表型的影响.方法 实时荧光定量聚合酶链式反应(quantitative real-time PCR)检测ZIC5在前列腺癌组织标本和对应癌旁正常组织、PC3和LNCaP细胞株及正常前列腺上皮中的表达水平.siRNA干扰ZIC5后,CCK-8法和Transwell试验检测前列腺癌细胞PC3和LNCaP的增殖、迁移和侵袭.生物信息学分析可能调控ZIC5的miRNA并进行验证.结果 ZIC5在前列腺癌组织中表达水平上升(t=4.2,P<0.001),并且与Gleason评分分级具有相关性(P<0.05),在前列腺癌细胞株中表达水平显著高于正常前列腺癌上皮(P<0.01).前列腺癌细胞株 PC3和 LNCaP 中siRNA干扰ZIC524 h后,细胞增殖减慢,迁移和侵袭能力被抑制.生物信息学及双荧光素酶报告显示,ZIC5受miR-449家族调控,ZIC5与miR-449家族在前列腺癌标本中表达水平呈负相关(ZIC5 vs miR-449a: r=-0.64,P<0.05,ZIC5 vs miR-449b,r=-0.52,P<0.05),双荧光素酶报告基因检测显示miR-449家族结合ZIC53'UTR.异常表达的ZIC5可激活EMT通路,干扰ZIC5和过表达miR-449可抑制ZIC5蛋白表达,并逆转前列腺癌细胞中EMT状态.结论 ZIC5受miR-449家族调控,促进前列腺癌生长和侵袭.

目的 探讨miR-17-5p在小儿肾病综合征(NS)发病中的作用及其机制.方法 将miR-17-5p mimic转染入小鼠肾足细胞系MPC524 h后收集细胞.通过microRNA.org、Target Scan和PicTar在线预测miR-17-5p对蛋白酪氨酸磷酸酶受体(PTPRO)-3'UTR区的调控作用.用RT-PCR和Western blot检测PTPRO mRNA以及蛋白的表达,Fluo-3-Am特异性Ca2+荧光指示剂检测足细胞内游离钙离子浓度([Ca2+]),annexin V/PI双染色流式细胞计量术检测足细胞凋亡率.结果 生物信息学技术预测,小鼠源及人源miR-17-5p都有多个位点结合于相应的PTPRO-3'UTR区,并抑制PTPRO蛋白及mRNA的表达.PTPRO过表达抑制miR-17-5p诱导的足细胞[Ca2+]升高,PTPRO过表达减缓miR-17-5p mimic诱导的肾小球足细胞凋亡.结论 miR-17-5p抑制小鼠肾足细胞内PTPRO表达,并激发肾小球足细胞[Ca2+]升高,诱导肾小球足细胞凋亡.

目的:探讨微RNA-524-5p(microRNA-524-5p,miR-524-5p)介导顺铂治疗胃癌的作用机制.方法:采用实时荧光定量PCR法检测胃癌组织、癌旁组织以及顺铂耐药和亲本胃癌细胞系中miR-524-5p的表达水平.顺铂耐药性胃癌SGC-7901和MKN-45细胞经miR-524-5p模拟物或对照RNA转染后,采用CCK-8法检测细胞活力.采用荧光素酶报告基因实验和蛋白质印迹法鉴定miR-524-5p靶向蛋白SOX9(SRY-related high mobility group-box 9)的表达情况.采用“拯救”实验检测SOX9过表达后miR-524-5p诱导胃癌细胞对顺铂的耐药性变化.结果:与正常胃上皮黏膜细胞GES1相比,胃癌细胞SGC-7901和MKN-45中miR-524-5p水平明显下调(P值均＜0.05);与癌旁组织相比,胃癌组织中miR-524-5p水平明显下调(P＜0.05).与敏感性亲代细胞相比,顺铂处理后的胃癌耐药细胞SGC-7901和MKN-45中miR-524-5p表达水平均降低(P值均＜ 0.05).miR-524-5p模拟物转染后,顺铂耐药性胃癌细胞SGC-7901和MKN-45的化疗敏感性均明显增强(P值均＜0.05).SOX9是miR-524-5p的功能靶蛋白;SOX9过表达可以抵消miR-524-5p的化疗增敏作用,即与单独miR-524-5p模拟物转染组相比,SOX9过表达质粒+ miR-524-5p模拟物转染后的胃癌细胞SGC-7901和MKN-45对顺铂的敏感性均明显降低(P值均＜ 0.05).结论:miR-524-5p影响人胃癌细胞对顺铂作用的敏感性,提示其可能成为治疗化疗耐药性胃癌患者的新靶点.

目的 探讨非编码小RNA-524-5p(miR-524-5p)是否通过靶向调控脂肪酸结合蛋白5(FABP5)从而影响非小细胞肺癌的增殖和凋亡.方法 实时定量PCR(qPCR)检测非小细胞肺癌细胞(A549、H1299、H1650)和正常肺上皮细胞(BEAS-2B)中miR-524-5p和FABP5表达,选择miR-524-5p表达量最低的细胞系用于后续实验;运用生物学信息预测miR-524-5p靶基因,双荧光素酶报告基因进行验证;蛋白质印迹法(West-ern Blot)检测上调或下调miR-524-5p对FABP5的影响,以及A549细胞中细胞周期蛋白D1(CyclinD1)、p21、B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)和Bax蛋白水平;采用噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞增殖,流式细胞术检测凋亡.结果 与正常肺上皮细胞相比,miR-524-5p在非小细胞肺癌细胞系中表达下调(P<0.05),FABP5 mR-NA和蛋白表达上调(P<0.05).miR-524-5p在A549细胞中的表达量最低.FABP5是miR-524-5p的靶基因.miR-524-5p过表达可抑制细胞增殖,促进细胞凋亡,降低CyclinD1、Bcl-2蛋白水平,提升p21、Bax蛋白水平,差异均达到显著水平(P<0.05),与抑制FABP5表达(si-FABP5)作用结果相同.FABP5过表达可以逆转miR-524-5p过表达对细胞增殖的抑制作用,以及对细胞凋亡的促进作用.结论 miR-524-5p能够抑制非小细胞肺癌增殖,诱导细胞凋亡,其作用机制与靶向调控FABP5表达有关.