目的:探讨长链非编码RNA核受体亚家族2 F组成员2反义RNA 1(lncRNA NR2F2-AS1)对类风湿关节炎滑膜成纤维细胞(RASF)增殖、迁移侵袭的影响及分子机制。方法:选取郑州大学第一附属医院35例RA患者滑膜组织及正常滑膜组织，实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测NR2F2-AS1和微小RNA(miR)-588的表达水平；将RASF分为si-NR2F2-AS1组、si-NC组、miR-588组、miR-NC组、si-NR2F2-AS1+anti-miR-588组、si-NR2F2-AS1+anti-miR-NC组；细胞计数试剂盒(CCK-8)检测细胞活性；克隆形成实验检测细胞克隆形成数；划痕实验检测细胞划痕愈合率；Transwell检测细胞侵袭数；蛋白质印迹法检测蛋白表达；双荧光素酶报告实验检测NR2F2-AS1和miR-588的靶向关系。用SPSS 20.0软件进行统计学分析。结果:RA患者滑膜组织中NR2F2-AS1表达水平高于正常滑膜组织(3.50±0.23比1.00±0.06， t＝62.223， P<0.05)，而miR-588表达水平低于正常滑膜组织(0.29±0.04比1.00±0.09， t＝42.649， P<0.05)。si-NR2F2-AS1组细胞活性低于si-NC组(0.55±0.04比1.03±0.08， t＝16.100， P<0.05)，细胞克隆形成数低于si-NC组[(47.58±5.03)个比(103.93±10.24)个， t＝14.818， P<0.05]、侵袭细胞数[(55.31±5.28)个比(123.37±10.09)个， t＝17.929， P<0.05]低于si-NC组，划痕愈合率低于si-NC组[(23.21±2.47)%比(64.19±5.55)%， t＝20.238， P<0.05]，E钙黏蛋白(E-cadherin)表达水平高于si-NC组，N钙黏蛋白(N-cadherin)表达水平低于si-NC组( P<0.05)。过表达miR-588与其作用相同。NR2F2-AS1靶向调控miR-588；下调miR-588表达逆转抑制NR2F2-AS1表达对RASF增殖、迁移侵袭的作用。 结论:抑制lncRNA NR2F2-AS1表达可通过靶向调控miR-588抑制RA滑膜成纤维细胞的增殖、迁移侵袭。

目的:探讨七氟醚通过调控Circ_001589对乳腺癌（breast cancer，BC）细胞生物学行为的影响和分子机制。方法：:不同浓度七氟醚处理BC细胞并检测细胞活力和凋亡。qRT-PCR检测BC组织及细胞中Circ_001589及miR-588的相对表达水平。检测七氟醚对Circ_001589及miR-588表达的影响。双荧光素酶报告基因分析检测Circ_001589与miR-588的关系。对细胞中Circ_001589及miR-588表达进行干预，使用MTT及流式细胞术检测细胞活力及凋亡水平。结果:七氟醚能抑制BC细胞活力，促进细胞凋亡。在BC组织与细胞中Circ_001589表达升高，而七氟醚能下调Circ_001589的表达（均 P<0.05）。过表达Circ_001589能部分挽救七氟醚对细胞活力及凋亡的作用。在BC细胞中Circ_001589能负调控miR-588。miR-588在BC组织与细胞中表达降低，而七氟醚能上调miR-588在BC细胞中的表达水平（均 P<0.05）。miR-588过表达部分抵消Circ_001598对七氟醚诱导的BC细胞凋亡的作用。 结论:七氟醚通过调控Circ_001589/miR-588进而影响BC细胞活力及凋亡。

目的 探讨长链非编码RNA ENST00000579933(简称lncRNA ENST 933)对乳腺癌(breast cancer,BC)发展的调控机制.方法 通过实时荧光定量聚合酶链反应(real-time fluorescent quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)检测 lncRNA ENST 933 在 BC 组织和 BC 细胞系(MCF-7、MDA-MB-231、MDA-MB-453)中的表达;运用细胞计数试剂盒-8(cellcounting kit-8,CCK-8)、克隆形成、EdU、Transwell、流式细胞仪、蛋白质印迹法(Western blot)、体内移植瘤实验检测lncRNA ENST 933和miR-588在BC细胞增殖、迁移、侵袭与周期中的作用;采用双荧光素酶报告基因、RNA免疫共沉淀实验、RT-qPCR、Western blot 和挽救实验来评估 lncRNA ENST 933、miR-588、真核起始因子 6(eukaryotic initiation factor 6,EIF6)之间的互相作用.结果 lncRNA ENST 933在BC组织和BC细胞系中表达均显著上调(P＜0.05),过表达lncRNA ENST 933能够提升BC细胞增殖、迁移与侵袭能力,促进移植瘤生长,而敲低lncRNA ENST 933表达后BC的发展受到抑制,并导致细胞周期阻滞(P＜0.05).miR-588在BC组织中表达明显下调,过表达miR-588可抑制BC细胞的增殖、迁移与侵袭(P＜0.05).挽救实验结果表明lncRNA ENST 933可通过与miR-588进行竞争性结合,从而促进靶基因EIF6的表达.Western blot结果显示miR-588降低了 AKT和mTOR的磷酸化水平(P＜0.05).结论 lncRNA ENST 933可通过调控miR-588/EIF6轴促进BC的进展.

目的:探究miR-588通过调控泛素特异性蛋白酶22(USP22)表达对神经母细胞瘤(NB)增殖和迁移的影响及机制.方法:通过双荧光素酶报告验证miR-588与USP22的靶向关系.将SK-N-SH细胞分为NC组、miR-588组、miR-588+ USP22组和USP22组,通过转染miR-588 mimic和/或USP22质粒过表达其水平.通过qPCR和Western blot检测USP22 mRNA和蛋白水平验证靶向关系.检测各组细胞的增殖、迁移、侵袭能力.通过ELISA检测免疫抑制相关指标肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和可溶性白细胞介素-2受体(sIL-2R)水平.结果:miR-588与USP22 mRNA 3'端的非翻译区域(3'-UTR)通过碱基互补配对的方式结合.miR-588组USP22 mRNA和蛋白显著低于NC组(P<0.05),miR-588+USP22组USP22 mRNA和蛋白水平显著高于miR-588组而低于USP22组(P<0.05).与NC组比较,miR-588组细胞增殖、迁移、侵袭能力显著升高(P<0.05).USP22作用与miR-588相反(P<0.05),并且miR-588+USP22组增殖、迁移、侵袭能力显著高于miR-588组而低于USP22组(P<0.05).与NC组比较,miR-588组TNF-α[(8.97±0.90)pg/ml]和sIL-2R[(6.68±0.75)pg/ml]水平显著升高,USP22组TNF-α[(2.04±0.31)pg/ml]和sIL-2R[(1.48±0.19)pg/ml]水平显著降低(P<0.05),miR-588+USP22组TNF-α[(4.16±0.49)pg/ml]和sIL-2R[(3.21±0.41)pg/ml]水平显著低于miR-588组但高于USP22组(P<0.05).结论:miR-588可靶向抑制USP22表达诱导TNF-α和sIL-2R分泌,从而缓解免疫抑制,进而抑制NB细胞增殖和转移.

目的:了解microRNA在乳腺癌中的表达情况,以及其对肿瘤化疗药物耐药性的影响.方法:获取GEOGSE71142的microRNA表达数据,通过edgeR和热图寻找乳腺癌耐药和药物敏感两组中差异性表达的microRNA.收集我院2012年至2015年100例病理诊断为乳腺癌的患者的癌及癌旁组织.使用qRT-PCR检测microRNA在癌和癌旁中的表达情况以及在MCF-7中的表达情况;应用配对t检验分析microRNA和T、N、M分期之间的关系.使用倾向值匹配模型(PSM),将患者分为耐药组和非耐药组,使用qRT-PCR检测microRNA的表达情况.使用Logistic回归模型进行多因素分析.按照microRNA的表达情况,进行亚组分析.结果:使用edgeR对GSE71142进行差异性表达分析,共筛选出了1 432个差异性表达的microRNA.应用qRT-PCR,配对样本t检验发现miR-148a-3p(P ＜0.05)、miR-128(P ＜0.05)、miR-466(P ＜0.05)、miR-31-5p(P ＜0.05)、miR-588(P ＜0.05)在癌和癌旁中差异性表达.卡方检验提示T分期、N分期、Her-2表达以及Cyclin-D1的表达情况与紫杉醇(PTX)耐药性有关(P＜0.05).PSM匹配后,在PTX耐药及PTX敏感中,qRT-PCR发现miR-148a-3 p、miR-128、miR-588呈差异性表达(P＜0.05).ROC曲线提示miR-148a-3p(AUC:0.864,95％ CI:0.737～0.991,P＜0.05)、miR-128(AUC:0.859,95％ CI:0.733～0.986,P＜0.05)和miR-588(AUC:0.777,95％ CI:0.623～0.930,P＜0.05).Logistic回归提示miR-148a-3p(OR=18.36,p＜0.05)和miR-128是PTX耐药的保护因素(OR =5.26,P＜0.05);而miR-588是PTX耐药的危险因素(OR =0.35,P＜0.05).miR-148a-3p的亚组分析提示其高表达和低表达均与Cyclin-D1的表达有关.结论:miR-148a-3 p、miR-128、miR-466、miR-31-5 p、miR-588有成为乳腺癌肿瘤标志物的可能;miR-148a-3p、miR-128、miR-588与乳腺癌的PTX耐药性有关;miR-]48a-3p、miR-128可以用于判断患者的PTX耐药情况.miR-148a-3p可能通过Cyclin-D1调控PTX耐药性,但需要进一步的分子学机制研究证实.

目的:探讨miR-588在乳腺癌中的表达及对乳腺癌细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响.方法:用化学合成的miR-588成熟模拟物(miR-588 mimic)过表达miR-588,并验证miR-588过表达率;采用MTT、克隆形成实验检测miR-588对乳腺癌细胞MCF7和MDA-MB-231增殖的影响;采用划痕愈合实验和Transwell侵袭实验检测miR-588对MDA-MB-231细胞迁移和侵袭的影响.结果:miR-588在乳腺癌组织及细胞中的相对表达均低于癌旁正常组织及乳腺正常上皮细胞;过表达miR-588能明显抑制MCF7和MDA-MB-231细胞的增殖;上调miR-588可显著抑制MDA-MB-231细胞的迁移和侵袭能力.结论:miR-588在乳腺癌中低表达,过表达miR-588可抑制乳腺癌细胞的增殖和侵袭.

目的:探讨环状RNA(circRNA)circCMTM3在骨肉瘤细胞中的表达及其作用机制.方法:利用qRT-PCR检测miRNA和circRNA的表达,CCK-8检测细胞增殖,Transwell实验检测细胞迁移和侵袭,流式细胞术检测细胞周期和凋亡,萤光素酶报告基因检测circCMTM3与miR-588的靶向结合.结果:circCMTM3在骨肉瘤细胞中高表达,敲除circCMTM3显著抑制骨肉瘤细胞的生长、迁移和侵袭,促进细胞凋亡;过表达circCMTM3促进骨肉瘤细胞的迁移和侵袭,miR-588过表达抑制细胞的迁移和侵袭,而过表达circCMTM3通过海绵作用抑制miR-588的功能.结论:circTMCM3在骨肉瘤细胞中高表达,并通过海绵miR-588促进骨肉瘤进展,这项研究可能为骨肉瘤提供新的潜在治疗途径.

目的 研究MiR497HG对肺癌细胞增殖、迁移侵袭及凋亡的影响,并探讨其机制.方法 运用RT-PCR法检测永生化正常肺上皮细胞BEAS-2 B、肺癌细胞NCI-H1975、NCI-H460、A549中MiR497HG、miR-588的表达;将blank组(不做任何处理)、si-NC组(转染si-NC)、si-MiR497HG组(转染si-MiR497HG)、anti-miR-NC组(转染anti-miR-NC)、anti-miR-588组(转染anti-miR-588)、miR-NC组(转染miR-NC)、miR-588组(转染miR-588 mimics)、si-MiR497HG+anti-miR-NC组(共转染si-MiR497HG和anti-miR-NC)、si-MiR497HG+anti-miR-588组(共转染si-MiR497HG和anti-miR-588),均用脂质体法转染至NCI-H1975细胞;MTT法检测细胞增殖;Transwell小室检测细胞的迁移侵袭;流式细胞术检测细胞凋亡;双荧光素酶报告基因检测实验检测细胞中MiR497HG与miR-588的结合力.结果 与永生化正常肺上皮细胞BEAS-2 B相比,肺癌细胞NCI-H1975、NCI-H460、A549中MiR497HG表达显著升高,miR-588表达显著降低(P<0.05);抑制MiR497HG或过表达miR-588均可抑制NCI-H1975细胞的增殖、迁移侵袭,促进凋亡;miR-588可抑制野生型MiR497HG细胞的荧光活性,且可负向调控MiR497HG的表达;过表达MiR497HG可逆转miR-588对肺癌细胞的增殖、迁移侵袭抑制和凋亡促进作用.结论 长链非编码RNA MiR497HG可促进肺癌细胞增殖、迁移侵袭,抑制凋亡,其机制可能与靶向抑制miR-588有关,将可为肺癌的治疗提供新靶点.

目的 探讨微小RNA-588(miR-588)对胃癌细胞增殖、凋亡的影响以及潜在的作用机制.方法 运用实时荧光定量逆转录聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测胃癌细胞SGC-7901、BGC-823和正常胃黏膜细胞GES-1中miR-588的表达水平;将胃癌细胞SGC-7901、BGC-823分为anti-miR-NC组、anti-miR-588组、anti-miR-588+si-NC组、anti-miR-588+si-脾酪氨酸激酶(Syk)组;蛋白质印迹法(Western blotting)检测蛋白表达;四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色(MTT)法检测BGC-823细胞活性;流式细胞术检测BGC-823细胞凋亡率;双荧光素酶报告实验检测miR-588和Syk的靶向关系.结果 胃癌细胞SGC-7901、BGC-823中miR-588的表达水平高于GES-1细胞[(0.58±0.06)、(0.84±0.08)比(0.36±0.04),P<0.05].抑制miR-588表达可抑制胃癌细胞增殖,诱导细胞凋亡;促进P21、Bax蛋白的表达,抑制cyclin D1、Bcl-2蛋白的表达.miR-588靶向负调控Syk的表达,抑制Syk表达能逆转抑制miR-588对细胞BGC-823细胞的作用.结论 miR-588可抑制胃癌细胞细胞增殖,诱导细胞凋亡,其机制可能与Syk有关.

目的:探讨长链非编码RNA锌指结构反义转录本1(lncRNA ZFAS1)调控miR-588/高迁移率蛋白A2(HMGA2)轴对肝癌HepG2细胞增殖、侵袭、迁移的影响.方法:qPCR、WB法检测80例肝癌组织及对应癌旁组织(2018年1月至2019年12月在武汉第三医院首义院区手术切除标本)及人正常肝LO2细胞和肝癌HepG2、Huh7、HCCLM3细胞中ZFAS1、miR-588及HMGA2表达水平;采用Kaplan-Meier进行患者生存曲线分析.将HepG2细胞分为空白组、si-NC组、si-ZFAS1组、si-ZFAS1+inhibitor NC组、si-ZFAS1+miR-588 inhibitor组;qPCR检测各组HepG2细胞中ZFAS1、miR-588表达水平,WB法检测各组HepG2细胞中HMGA2蛋白表达;CCK-8法、Transwell和划痕实验分别检测各组HepG2细胞的增殖、侵袭和迁移能力;双荧光素酶报告基因实验分别验证ZFAS1和miR-588、miR-588和HMGA2的靶向关系.用HepG2细胞移植瘤裸鼠模型检测敲减ZFAS1或/和miR-588对移植瘤生长的影响.结果:在肝癌组织和肝癌细胞中,ZFAS1、HMGA2呈高表达,miR-588呈低表达(均P<0.05);ZFAS1低表达患者2年生存率高于高表达组(P<0.05);与空白组比较,si-ZFAS1组ZFAS1、HMGA2表达水平显著降低,miR-588表达水平显著升高(均P<0.05).与si-ZFAS1组比较,si-ZFAS1+miR-588 inhibitor组中ZFAS1表达水平无显著变化(P>0.05),HMGA2表达水平显著升高、miR-588表达水平显著降低(P<0.05);敲减ZFAS1可抑制HepG2细胞的增殖、侵袭和迁移能力,并抑制裸鼠体内移植瘤的生长(均P<0.05);ZFAS1靶向miR-588并抑制后者的表达,miR-588靶向HMGA2并抑制后者的表达;同时抑制ZFAS1和miR-588表达可逆转敲减ZFAS1对HepG2细胞增殖、侵袭与迁移能力及体内移植瘤生长的抑制作用(均P<0.05).结论:敲减ZFAS1可通过促进miR-588表达来下调HMGA2表达,进而抑制肝癌HepG2细胞的增殖、侵袭与迁移能力.