目的 研究长链非编码RNA锌指结构反义转录本1(ZFAS1)在胶质瘤细胞中对顺铂敏感性的作用及其潜在机制.方法 通过实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)实验分析敲低ZFAS1对胶质瘤细胞顺铂敏感性,分为sh-NC组(转染sh-NC慢病毒质粒)、sh#1组(转染sh-ZFAS1-1慢病毒质粒)、sh#2组(转染sh-ZFAS1-2慢病毒质粒).双荧光素酶实验验证ZFAS1与miR-193b-3p之间的相互作用,分为ZFAS1-WT+NC inhibitor组(转染ZFAS1野生型质粒和NC inhibitor)、ZFAS1-WT+miR-193b-3p inhibitor 组(转染 ZFAS1 野生型质粒和 miR-193b-3p inhibitor)、ZFAS1-Mut+NC inhibitor 组(转染 ZFAS1 突变型质粒和 NC inhibitor)、ZFAS1-Mut+miR-193b-3p inhibitor 组(转染 ZFAS1突变型质粒和miR-193b-3p inhibitor).用细胞计数试剂盒-8(CCK-8)和原位末端标记(TUNEL)实验分析ZFAS1/miR-193b-3p影响胶质瘤细胞对顺铂敏感性,分为空白对照组(0 μg·mL-1顺铂处理U251细胞)、0.5 μg·mL-1顺铂+sh-NC+NC inhibitor组(0.5 μg·mL-1顺铂处理共转染sh-NC慢病毒质粒和 NC inhibitor 的 U251 细胞)、0.5 μg·mL-1 顺铂+sh#1+NC inhibitor 组(0.5 μg·mL-1顺铂处理共转染sh-NC慢病毒质粒和NC inhibitor的U251细胞)和 0.5 μg·mL-1 顺铂+sh#1+miR-193b-3p inhibitor 组(0.5μg·mL-1顺铂处理共转染sh-ZFAS1-1慢病毒质粒和miR-193b-3p inhibitor的U251细胞).结果 sh-NC组、sh#1组和sh#2组的ZFAS1的表达水平分别为1.00±0.17、0.48±0.06 和 0.68±0.08.ZFAS1-WT+NC inhibitor 组、ZFAS1-WT+miR-193b-3p inhibitor 组、ZFAS1-Mut+NC inhibitor 组、ZFAS1-Mut+miR-193b-3p inhibitor 组的荧光活性分别为 1.00±0.10、1.45±0.11、1.02±0.09和 0.97±0.13.空白对照组、0.5 μg·mL-1 顺铂+sh-NC+NC inhibitor组、0.5 μg·mL-1 顺铂+sh#1+NC inhibitor 组、0.5 μg·mL-1 顺铂+sh#1+miR-193b-3p inhibitor 组的 72 h 增殖率分别为(100.00±14.13)％、(96.62±9.82)％、(60.56±6.08)％和(78.64±7.22)％;72 h 凋亡率分别为(9.52±1.11)％、(10.12±1.34)％、(16.08±1.52)％和(12.22±1.19)％.空白对照组与 0.5 μg·mL-1 顺铂+sh-NC+NC inhibitor 组比较,0.5 μg·mL-1顺铂+sh#1+NC inhibitor 组与 0.5 μg·mL-1 顺铂+sh#1+miR-193b-3p inhibitor组比较,在统计学上差异均有统计学意义(均P＜0.05).结论 本研究揭示了 ZFAS1在胶质瘤中对顺铂敏感性的重要作用,并阐明了其通过调控miR-193b-3p影响药物敏感性的机制.

[目的]评估炙马钱子胶囊医治硼替佐米相关性周围神经病(bortezomib induced peripheral neuropathy,BIPN)的有效性,初步探究其基于长链非编码RNA(long noncoding RNA,lncRNA)X失活特异性转录本(X inactive specific transcript,XIST)/锌指结构反义转录本1(ZNFX1 antisense RNA 1,ZFAS1)干预BIPN的机制.[方法]通过前瞻性非随机对照的研究方法,共收集20例符合多发性骨髓瘤中西医诊断并接受硼替佐米(bortezomib,BTZ)治疗而且发生BIPN接受炙马钱子胶囊治疗的患者,与未接受马钱子治疗的患者进行中医症候积分、神经毒性评分、周围神经病变(peripheral neuropathy,PN)分级、部分周围神经传导速度的比较.通过自身对照,采集治疗组患者的外周血液样本,使用酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测炎症相关因子表达.培养DRG 50B11细胞,通过细胞增殖毒性检测筛选马钱子最佳作用浓度和时间及BTZ最佳作用时间,随机分为正常对照组、BTZ 组、马钱子+BTZ 组,以实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time quantitative polymerase chain reaction,Real-time qPCR)检测炎症相关因子及细胞总RNA相关指标表达,分析差异性及相关性.[结果]临床研究显示,与对照组比较,患者治疗后PN、中医证候积分、神经毒性评分降低,周围神经传导速度增加(P＜0.05),无明显不良反应.实验研究显示,与治疗前比较,白细胞介素-17(interleukin-17,IL-17)、IL-1β、IL-6、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、神经生长因子(nerve growth factor,NGF)、脑源性神经营养因子(brain-derived neurotrophic factor,BDNF)表达均降低(P＜0.05),且与时间存在显著负相关性(P＜0.01).与BTZ 组比较,马钱子+BTZ组IL-17、TNF-α、IL-1β、IL-6、NGF、BDNF、lncRNA XIST、纤维粘连蛋白 1(fibronectin 1,FN1)、磷酸化局部黏着斑激酶(phospho-focal adhesion kinase,p-FAK)表达降低(P＜0.05),miR-96-5P、miR-1271-5P表达升高(P＜0.05),lncRNA ZFAS1 表达量差异无统计学意义(P＞0.05);lncRNA XIST表达与 IL-17、TNF-α、IL-1β、IL-6、NGF、BDNF、FN1、p-FAK表达显著正相关(P＜0.01),与miR-96-5P存在中等负相关性(P＜0.05),与miR-1271-5P存在极弱相关或无相关性(P＞0.05).[结论]炙马钱子胶囊在一定程度上可缓解BIPN且较为安全,其机制可能与调控lncRNA XIST,促进miR-96-5P/FN1表达,抑制p-FAK介导的神经炎症有关.

目的 探讨高血压性脑出血(hypertensive intracerebral hemorrhage,HICH)患者长链非编码RNA(long non-coding RNA,LncRNA)锌指结构反义转录本1(zine finger antisense 1,ZFAS1)表达量与颅内动脉狭窄程度及复发性高血压性脑出血(recurrent hypertensive intracerebral hemorrhage,RHCH)的关系.方法 回顾性分析2014年2月至2020年2月河北省保定市第二中心医院收治的192例HICH患者的临床资料和随访资料,根据随访期间是否出现RHCH将研究对象分为RHCH组(出现RHCH,30例)和非RHCH组(未出现RHCH,162例).比较分析两组患者的临床特征.采用Pearson相关系数法分析LncRNA ZFAS1表达量与颅内动脉狭窄程度的相关性.采用受试者工作特征曲线分析LncRNA ZFAS1表达量对RHCH的预测价值.采用多因素logistic回归方法分析RHCH的独立影响因素.结果 RHCH组患者的年龄、收缩压、血肿体积、颅内动脉狭窄程度、LncRNA ZFAS1表达量均显著大于或高于非RHCH组(P＜0.05),格拉斯哥昏迷评分显著低于非RHCH组(P＜0.05).Pearson相关系数法分析结果显示,LncRNA ZFAS1表达量与颅内动脉狭窄程度呈显著正相关(r=0.615,P＜0.001).受试者工作特征曲线分析结果显示,LncRNA ZFAS1表达量预测RHCH的曲线下面积为0.881,敏感度为80.0%,特异度为82.0%.多因素logistic回归分析结果显示,年龄、收缩压、颅内动脉狭窄程度、格拉斯哥昏迷评分和LncRNA ZFAS1表达量是RHCH的独立影响因素(P＜0.05).结论 LncRNA ZFAS1表达量与颅内动脉狭窄程度和RHCH的发生相关,且对RHCH的发生具有一定预测价值.

目的 检测非小细胞肺癌(NSCLC)患者癌组织中锌指结构反义转录本1(zinc finger antisense 1,ZFAS1)表达水平,探讨ZFASI在NSCLC进展中的生物学作用.方法 实时荧光定量RT-PCR检测ZFAS1在NSCLC患者癌组织和癌旁组织中的表达水平.RNA干扰ZFAS1在A549细胞中表达,细胞计数和克隆形成实验检测细胞增殖情况,流式分析检测细胞周期和细胞凋亡,Transwell迁移和基质胶侵袭实验检测细胞迁移和侵袭能力,实时荧光定量RT-PCR检测Cyclin D1、Bcl2、N-cadherin、ZEB1、Slug和Twist基因表达水平变化.结果 ZFAS1在NSCLC患者癌组织中的平均表达水平[0.01 (0.002,0.054)]较癌旁组织[0.002 (0.001,0.012)]明显升高(Z=-2.638,P＜0.01).ZFAS1基因敲减后,A549细胞增殖能力明显减弱(P＜0.01);A549细胞周期G1期比例升高,S期比例下降(P ＜0.01);A549细胞凋亡比例明显增加(P ＜0.01);A549细胞迁移和侵袭能力明显下降(P均＜0.01);A549细胞中Cyclin D1、Bcl2、N-cadherin、ZEB1、Slug和Twist基因表达水平均降低(P均＜0.05).结论 ZFAS1在NSCLC患者癌组织中呈高表达.ZFAS1基因敲减诱导细胞周期阻滞、凋亡和抑制上皮-间质转变(EMT),减弱NSCLC细胞增殖、迁移和侵袭能力.

目的 探讨长链非编码RNA锌指结构反义转录本1(zinc finger antisense 1,ZFAS1)在食管癌中的表达及作用机制.方法 采用实时荧光定量PCR法分别检测癌旁组织和食管癌组织、正常食管上皮细胞和食管癌细胞的ZFAS1表达水平,通过细胞增殖活性检测、细胞划痕实验及流式细胞仪检测细胞凋亡技术,评价干扰食管癌细胞表达ZFAS1对细胞增殖、迁移及凋亡的影响,采用荧光素酶报告基因验证微小RNA(microRNA,miRNA)miR-302b-3p是ZFAS1的作用靶点,Western蛋白印迹法检测ZFAS1及miR-302b-3p作用下c-Jun氨基末端激酶2(c-Jun N-terminal kinase 2,JNK2)、胰岛素样生长因子1受体(insulin-like growth factor-1 receptor,IGF-1R)、白细胞介素-1受体相关激酶4(interleukin-1 receptor-associated kinase 4,IRAK-4)和上皮细胞激酶(epithelial cell kinase 2,EphA2)蛋白的表达变化.结果 与癌旁组织相比,食管癌组织表达ZFAS1水平升高(t=19.40,P<0.001),与正常食管上皮细胞相比,食管癌细胞表达ZFAS1水平增加(t=13.80,P<0.001),通过抑制细胞表达ZFAS1发现,与NC干扰组相比,显著降低ZFAS1干扰组细胞增殖活性(t值分别=2.933,8.568,10.04,均P<0.05,)及迁移能力(t=13.96,P<0.001),且细胞凋亡率升高(t=10.68,P<0.001).ZFAS1可通过靶向miR-302b-3p调节JNK2、IGF-1R、IRAK4和EphA2蛋白的表达.结论 ZFAS1在食管癌组织中表达显著增加,具有促进食管癌细胞增殖、迁移,抑制凋亡的能力,且ZFAS1可通过靶向miR-302b-3p激活JNK2、IGF-1R、IRAK4和EphA2,有望成为治疗食管癌的潜在靶点.

目的 探讨长链非编码RNA锌指结构反义转录本(LncRNA ZFAS)1通过靶基因微小RNA-432-5p(miR-432-5p)调控肺癌细胞增殖和侵袭迁移的分子机制.方法 实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)技术检测不同肺癌细胞中Ln-cRNA ZFAS1、miR-432-5p的表达情况.双荧光素酶报告基因检测ZFAS1与miR-432-5p的相互作用.MTT实验检测抑制ZFAS1及miR-432-5p过表达后肺癌A549细胞增殖能力变化及抑制miR-432-5p的表达后肺癌A549细胞增殖能力的恢复情况.Transwell迁移及侵袭实验检测抑制ZFAS1及miR-432-5p过表达后A549细胞迁移及侵袭能力的变化及抑制miR-432-5p的表达后A549细胞迁移及侵袭能力的恢复情况.Western印迹实验检测细胞增殖、迁移及侵袭相关蛋白表达.结果 与BE-AS-2B细胞相比,不同肺癌细胞中ZFAS1表达水平明显升高,而miR-432-5p表达水平明显降低;双荧光素酶实验证实ZFAS1可调控miR-432-5p的表达与活性;抑制ZFAS1或上调miR-432-5p的表达后可降低A549细胞增殖、迁移及侵袭能力,CyclinE、CyclinD1、MMP-2、MMP-9蛋白表达水平均明显降低;抑制miR-432-5p的表达后A549细胞增殖、迁移及侵袭能力相对增强.结论 ZFAS1可调控靶基因miR-432-5p的表达影响肺癌细胞增殖、迁移及侵袭能力.

目的 探究长链非编码RNA(LncRNA)锌指结构反义转录本1(ZFAS1)靶向微小RNA(miR)-373导致肝癌细胞顺铂(DDP)耐药的机制.方法 HepG2细胞设正常培养组、si-NC组、si-ZFAS1组,实时荧光定量PCR(qPCR)检测细胞中ZFAS1、miR-373表达水平.在si-NC组、si-ZFAS1组基础上分别添加0、50、100、200、300μmol/L DDP处理细胞12 h,CCK-8检测细胞增殖情况,Transwell检测细胞侵袭情况,蛋白免疫印迹检测细胞中基质金属蛋白酶(MMP)2、MMP9蛋白表达水平.双荧光素酶验证ZFAS1与miR-373的靶向关系.在si-ZFAS1组基础上添加inhibitor miR-373,检测细胞中MMP2、MMP9蛋白表达水平.结果 si-ZFAS1组细胞中ZFAS1表达水平均低于正常培养组和si-NC组,miR-373表达水平均高于正常培养组和si-NC组(P<0.05).si-NC组和si-ZFAS1组经不同浓度顺铂处理后细胞增殖率、侵袭数量、侵袭蛋白MMP2、MMP9表达水平基本呈降低趋势;si-ZFAS1组上述指标分别低于其对应浓度的si-NC组(P<0.05).Starbase分析发现,miR-373与ZFAS1存在互补的结合位点并经双荧光素酶验证.si-ZFAS1+inhibitor miR-373组细胞MMP2、MMP9蛋白表达水平高于si-ZFAS1组和si-ZFAS1+inhibitor NC组(P<0.05).结论 ZFAS1可能降低肝癌细胞DDP耐药,其机制可能与调控miR-373有关.

目的:探讨长链非编码RNA锌指结构反义转录本1(lncRNA ZFAS1)调控miR-588/高迁移率蛋白A2(HMGA2)轴对肝癌HepG2细胞增殖、侵袭、迁移的影响.方法:qPCR、WB法检测80例肝癌组织及对应癌旁组织(2018年1月至2019年12月在武汉第三医院首义院区手术切除标本)及人正常肝LO2细胞和肝癌HepG2、Huh7、HCCLM3细胞中ZFAS1、miR-588及HMGA2表达水平;采用Kaplan-Meier进行患者生存曲线分析.将HepG2细胞分为空白组、si-NC组、si-ZFAS1组、si-ZFAS1+inhibitor NC组、si-ZFAS1+miR-588 inhibitor组;qPCR检测各组HepG2细胞中ZFAS1、miR-588表达水平,WB法检测各组HepG2细胞中HMGA2蛋白表达;CCK-8法、Transwell和划痕实验分别检测各组HepG2细胞的增殖、侵袭和迁移能力;双荧光素酶报告基因实验分别验证ZFAS1和miR-588、miR-588和HMGA2的靶向关系.用HepG2细胞移植瘤裸鼠模型检测敲减ZFAS1或/和miR-588对移植瘤生长的影响.结果:在肝癌组织和肝癌细胞中,ZFAS1、HMGA2呈高表达,miR-588呈低表达(均P<0.05);ZFAS1低表达患者2年生存率高于高表达组(P<0.05);与空白组比较,si-ZFAS1组ZFAS1、HMGA2表达水平显著降低,miR-588表达水平显著升高(均P<0.05).与si-ZFAS1组比较,si-ZFAS1+miR-588 inhibitor组中ZFAS1表达水平无显著变化(P>0.05),HMGA2表达水平显著升高、miR-588表达水平显著降低(P<0.05);敲减ZFAS1可抑制HepG2细胞的增殖、侵袭和迁移能力,并抑制裸鼠体内移植瘤的生长(均P<0.05);ZFAS1靶向miR-588并抑制后者的表达,miR-588靶向HMGA2并抑制后者的表达;同时抑制ZFAS1和miR-588表达可逆转敲减ZFAS1对HepG2细胞增殖、侵袭与迁移能力及体内移植瘤生长的抑制作用(均P<0.05).结论:敲减ZFAS1可通过促进miR-588表达来下调HMGA2表达,进而抑制肝癌HepG2细胞的增殖、侵袭与迁移能力.

目的 探讨长链非编码RNA(lncRNA)锌指结构反义转录本(ZFAS)1、miR-34b-5p对高糖诱导的肾小管上皮细胞(HK-2)损伤的影响.方法 将HK-2细胞分为对照组(Con,5.5 mmol/L葡萄糖)、高糖组(HG,25 mmol/L葡萄糖)、HG+pcDNA组、HG+pcDNA-ZFAS1组、HG+anti-miR-NC组、HG+anti-miR-34b-5p组、HG+pcDNA-ZFAS1+miR-NC组、HG+pcDNA-ZFAS1+miR-34b-5p组.试剂盒检测白细胞介素(IL)-6和肿瘤坏死因子(TNF)-α水平,流式细胞术检测细胞凋亡,实时定量PCR(RT-qPCR)检测ZFAS1和miR-34b-5p表达水平.双荧光素酶报告实验确定ZFAS1和miR-34b-5p的靶向关系.结果 高糖诱导后HK-2细胞凋亡率、培养液中IL-6和TNF-α水平显著升高,ZFAS1表达显著降低,miR-34b-5p表达显著升高(P<0.05).过表达ZFAS1后,高糖诱导的HK-2细胞培养液中IL-6和TNF-α水平显著降低,细胞凋亡率显著降低(P<0.05).抑制miR-34b-5p表达后,高糖诱导的HK-2细胞培养液中IL-6和TNF-α水平显著降低,细胞凋亡率显著降低(P<0.05).ZFAS1靶向负性调控miR-34b-5p表达.过表达miR-34b-5p能够降低ZFAS1过表达对高糖诱导的HK-2细胞损伤的影响(P<0.05).结论 lncRNA ZFAS1通过吸附miR-34b-5p可减轻高糖诱导的肾小管上皮细胞损伤.

目的 研究LncRNA ZFAS1调控肺癌NCI-H460细胞增殖、侵袭和化疗敏感性的作用机制.方法 收集肺癌组织、癌旁正常组织、NCI-H460细胞和BEAS-2B细胞,通过实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(RT-qPCR)分析LncRNA ZFAS1、miR-589-5p的表达量.miRcode软件预测LncRNA ZFAS1和miR-589-5p的结合位点,进一步通过双荧光素酶报告基因确定两者的相关性.以细胞计数法-8(CCK-8)实验检测NCI-H460细胞增殖活力,以Tran-swell实验检测细胞侵袭数目,以流式细胞仪检测细胞凋亡率,以蛋白质印迹法检测丝裂原活化蛋白激酶/细胞外信号调节激酶(MAPK/ERK)通路蛋白表达.结果 NCI-H460细胞(3.02±0.98)和肺癌组织(2.34±0.67)中LncRNA ZFAS1表达量明显升高(P<0.01),NCI-H460细胞(0.34±0.03)和肺癌组织(0.23±0.01)中miR-589-5p的表达量明显降低(P<0.01).ZFAS1 siRNA和siRNA NC组细胞增殖活力分别为(37.52±2.58)％,(62.38±3.55)％,细胞侵袭数目分别为(32.50±4.52),(83.50±5.86)个,差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01).siRNA NC+8μg·mL-1顺铂组、ZFAS1 siRNA+8μg·mL-1顺铂组细胞凋亡率分别为(8.73±2.17)％,(20.06±1.85)％,差异有统计学意义(P<0.01).LncRNA ZFAS1与miR-589-5p具有靶向结合位点.下调miR-589-5p激活了MAPK/ERK通路.inhibitor NC组、miR-589-5p inhibitor组、miR-589-5p inhibitor+U0126组细胞增殖活力分别为(63.18±3.39)％,(82.35±4.58)％,(60.27±3.93)％,细胞侵袭数目分别为(75.50±6.85),(135.50±5.83),(90.50±6.84)个,差异均有统计学意义(均P<0.01).inhib-itor NC+8μg·mL-1顺铂组、miR-589-5p inhibitor+8μg·mL-1顺铂组、miR-589-5p inhibitor+U0126+8μg·mL-1顺铂组细胞增殖活力分别为(38.25±2.78)％,(75.45±4.28)％,(42.85±5.87)％,细胞凋亡率分别为(12.59±4.15)％,(5.26±2.48)％,(11.06±2.45)％,差异均有统计学意义(均P<0.01).结论 LncRNA ZFAS1在肺癌细胞中表达上调且通过miR-589-5 p激活MAPK/ERK通路调控NCI-H460细胞增殖、侵袭及化疗敏感性.