目的:探究微小RNA(miRNA)miR-4429对乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖、侵袭和凋亡的影响;并探究其与内质网应激相关通路基因PIK3R1的靶向关系及对内质网应激相关通路的调控作用.方法:通过脂质体转染法构建miR-4429过表达及敲低的MDA-MB-231细胞模型,并通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测其效率;MTT法、克隆形成实验、Annexin-PI染色实验和Transwell实验分别检测MDA-MB-231细胞的增殖、凋亡和侵袭;双荧光素酶报告基因实验和Western blot验证miR-4429和PIK3R1靶向关系,qRT-PCR和Western blot探究miR-4429对内质网应激通路的调控.结果:成功建立miR-4429 过表达及敲低的MDA-MB-231细胞模型;miR-4429 mimic组中MDA-MB-231细胞的增殖、侵袭能力均低于其Ctrl组,凋亡能力高于其Ctrl组(均P＜0.05);miR-4429能够靶向性结合PIK3R1并抑制PIK3R1的蛋白表达,同时下调内质网应激通路相关基因.结论:miR-4429靶向性结合PIK3R1并下调内质网应激通路相关基因,抑制乳腺癌细胞的增殖和侵袭,促进凋亡,提示miR-4429可能是乳腺癌治疗的潜在靶点.

目的 探讨微小RNA(miRNA)-4429对乳腺癌细胞增殖、迁移、侵袭、凋亡的影响及作用机制.方法收集100例乳腺癌患者的乳腺癌组织和癌旁组织,采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测miR-NA-4429和磷脂酰肌醇-3-激酶调节亚基1(PIK3R1)mRNA相对表达量.培养乳腺癌MDA-MB-231细胞,将脂质体转染试剂Lipo6000?分别与miRNA-4429模拟物(miRNA-4429 mimic)、miRNA-4429抑制物(miRNA-4429 inhib-itor)、模拟物阴性对照(NC)混合均匀,分别作为miRNA-4429 mimic组、miRNA-4429 inhibitor组、NC组.采用克隆形成实验检测细胞增殖能力,Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力,流式细胞术检测细胞凋亡情况,qRT-PCR检测PIK3R1 mRNA相对表达量,蛋白质印迹法检测PIK3R1蛋白表达情况.结果 乳腺癌组织中miRNA-4429、PIK3R1 mRNA相对表达量均明显低于癌旁组织,差异均有统计学意义(P﹤0.01).miRNA-4429 mimic组克隆形成率、迁移细胞数目、侵袭细胞数目均低于NC组,miRNA-4429 inhibitor组克隆形成率、迁移细胞数目、侵袭细胞数目均高于NC组,差异均有统计学意义(P﹤0.05).miRNA-4429 mimic组细胞早期凋亡率、晚期凋亡率及总凋亡率均高于NC组,miRNA-4429 inhibitor组细胞早期凋亡率、晚期凋亡率及总凋亡率均低于NC组,差异均有统计学意义(P﹤0.05).miRNA-4429 mimic组细胞中PIK3R1 mRNA和蛋白相对表达量均低于NC组,miR-NA-4429 inhibitor组细胞中PIK3R1 mRNA和蛋白相对表达量均高于NC组,差异均有统计学意义(P﹤0.05).结论 乳腺癌组织中miRNA-4429表达水平较低,miRNA-4429通过调控PIK3R1的表达抑制乳腺癌细胞增殖、迁移和侵袭,并促进乳腺癌细胞凋亡,可能成为治疗乳腺癌的新靶点.

目的 探讨miRNA-4429靶向结合髓样细胞白血病-1(MCL1)对食管鳞状细胞癌细胞增殖、凋亡、迁移与侵袭的影响.方法 采用qRT-PCR法检测食管鳞状细胞癌细胞系和食管正常上皮细胞中miRNA-4429的相对表达量.采用脂质体转染法分别将miRNA-4429模拟物和模拟物对照转染至食管鳞状细胞癌EC9706细胞,分为实验组和对照组.应用CCK-8法、克隆形成实验、流式细胞术和Transwell小室实验等探究miRNA-4429对食管鳞状细胞癌细胞增殖、凋亡、迁移与侵袭的影响.构建MCL1的3'非编码区(3'UTR)野生型和突变型荧光素酶报告基因载体,应用荧光素酶报告基因实验验证MCL1是否为miRNA-4429的靶基因.采用Western blot法检测实验组和对照组MCL1蛋白的表达水平.结果 4株食管鳞状细胞癌细胞中miRNA-4429相对表达量均明显低于食管正常上皮细胞(均P<0.01);而与对照组比较,实验组细胞中miRNA-4429相对表达量显著上调(P<0.01).实验组细胞OD值在72、96 h均明显低于对照组(均P<0.01);与对照组比较,实验组细胞集落形成数明显降低(P<0.01).与对照组比较,实验组细胞凋亡率明显升高(P<0.01).实验组细胞迁移数及侵袭数均明显低于对照组(均P<0.01).miRWalk、miRDB和miRTarBase预测结果表明,MCL1是miRNA-4429的作用靶基因.荧光素酶报告基因实验的结果表明,共转染MCL13'UTR-野生型荧光素酶报告载体后,与对照组比较,实验组荧光素酶相对活性降低(P<0.05);而共转染MCL13'UTR-突变型荧光素酶报告载体后,实验组与对照组荧光素酶相对活性比较差异无统计学意义(P>0.05).实验组MCL1蛋白表达水平明显低于对照组(P<0.01).结论 食管鳞状细胞癌细胞株中miRNA-4429相对表达量降低,上调miRNA-4429表达可减弱食管鳞状细胞癌EC9706细胞的增殖、迁移和侵袭能力,促进细胞凋亡,其作用机制可能与靶向结合调控MCL1的表达有关.