目的:探究非小细胞肺癌（NSCLC）根治性放化疗后血清外泌体来源的microRNA-4429（miR-4429）水平与预后的关系。方法:收集NSCLC患者血液标本309例［化疗前（T0），化疗1个周期后（T1）和化疗2个周期后（T2），每时间点各103例］，采用实时荧光定量PCR法检测miR-4429表达水平，分析其与NSCLC根治性放化疗预后的关系。结果:103例NSCLC患者1年、2年和3年生存率分别为69.90%、45.63%和34.95%。生存组T1-miR-4429和T2-miR-4429表达水平分别为0.66±0.14和0.77±0.11，高于死亡组T1-miR-4429（0.60±0.06）和T2-miR-4429（0.62±0.11），差异均有统计学意义（ t=2.269、6.997， P<0.05）。限制性立方样条拟合COX回归分析结果显示T2-miR-4429与NSCLC生存预后呈线性关系。COX回归分析结果显示TNM分期是NSCLC生存预后的独立危险因素（ P<0.05），分化程度、靶向治疗和T2-miR-4429均是NSCLC生存预后的独立保护因素（ P<0.05）。由TNM分期、分化程度、靶向治疗和T2-miR-4429构建的列线图回归模型的校正曲线与理想曲线重合度较好，C-index为0.713。 结论:T2-miR-4429表达水平高提示NSCLC生存预后不良风险低。由TNM分期、分化程度、靶向治疗和T2-miR-4429构建的列线图回归模型有一定的区分度和精准度，可辅助评价NSCLC生存预后。

目的:探究微小RNA(miRNA)miR-4429对乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖、侵袭和凋亡的影响;并探究其与内质网应激相关通路基因PIK3R1的靶向关系及对内质网应激相关通路的调控作用.方法:通过脂质体转染法构建miR-4429过表达及敲低的MDA-MB-231细胞模型,并通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测其效率;MTT法、克隆形成实验、Annexin-PI染色实验和Transwell实验分别检测MDA-MB-231细胞的增殖、凋亡和侵袭;双荧光素酶报告基因实验和Western blot验证miR-4429和PIK3R1靶向关系,qRT-PCR和Western blot探究miR-4429对内质网应激通路的调控.结果:成功建立miR-4429 过表达及敲低的MDA-MB-231细胞模型;miR-4429 mimic组中MDA-MB-231细胞的增殖、侵袭能力均低于其Ctrl组,凋亡能力高于其Ctrl组(均P＜0.05);miR-4429能够靶向性结合PIK3R1并抑制PIK3R1的蛋白表达,同时下调内质网应激通路相关基因.结论:miR-4429靶向性结合PIK3R1并下调内质网应激通路相关基因,抑制乳腺癌细胞的增殖和侵袭,促进凋亡,提示miR-4429可能是乳腺癌治疗的潜在靶点.

目的 探究盆底功能障碍性疾病(pelvic floor dysfunctional disease,PFD)患者血清微小RNA(microRNA,miR)-4429 和微小RNA(microRNA,miR)-19-3p水平表达及意义.方法 选取 2021 年 6 月～2022 年 6 月衡水市第二人民医院收治的PFD患者 90 例作为PFD组,分为盆腔器官脱垂(pelvic organ prolapse,POP)组(n=50)、压力性尿失禁(stress urinary incontinence,SUI)组(n=25)和POP并发SUI组(n=15);并选取同期在衡水市第二人民医院检查的健康女性 80 例为对照组.比较对照组与PFD组分娩方式、既往流产史、PFD家族史等一般资料.比较各组血清miR-4429 和miR-19-3p水平.受试者工作特征(receiver operating characteristic,ROC)曲线分析血清miR-4429,miR-19-3p水平对PFD的诊断价值.Logistic回归分析影响PFD的因素.配对样本t检验比较PFD治疗前后血清miR-4429,miR-19-3p水平变化.结果 PFD组在分娩方式、既往流产史、PFD家族史方面与对照组相比差异均有统计学意义(t=4.415,6.444,4.707,均P＜0.05).PFD组血清miR-4429水平较对照组降低(0.71±0.19 vs 1.00±0.25),miR-19-3p水平较对照组升高(1.44±0.35 vs 1.01±0.28),差异具有统计学意义(t=8.927,8.772,均P＜0.05).POP组和SUI组血清miR-4429水平高于POP并发SUI组(0.73±0.22,0.74±0.16 vs 0.59±0.16),POP组和SUI组血清miR-19-3p水平低于POP并发SUI组(1.35±0.39,1.41±0.31 vs 1.77±0.56),差异具有统计学意义(t=3.531,3.411;5.003,3.865,均P＜0.05).ROC曲线分析显示,miR-4429,miR-19-3p可辅助评估是否发生PFD的曲线下面积(area under curve,AUC)分别为 0.805,0.825,二者联合检测的AUC为 0.865.多因素分析显示,miR-19-3p是影响PFD的危险因素,miR-4429 是保护因素.经过治疗发现,PFD患者血清miR-4429 水平升高(0.93±0.23 vs 0.71±0.19),miR-19-3p水平降低(1.12±0.29 vs 1.44±0.35),差异具有统计学意义(t=6.996,6.679,均P＜0.05).结论 PFD患者血清miR-4429 水平降低,miR-19-3p水平升高,血清miR-4429,miR-19-3p水平与PFD疾病的发生发展密切相关,可作为预测PFD的评估指标.

目的 探讨微小RNA(miRNA)-4429对乳腺癌细胞增殖、迁移、侵袭、凋亡的影响及作用机制.方法收集100例乳腺癌患者的乳腺癌组织和癌旁组织,采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测miR-NA-4429和磷脂酰肌醇-3-激酶调节亚基1(PIK3R1)mRNA相对表达量.培养乳腺癌MDA-MB-231细胞,将脂质体转染试剂Lipo6000?分别与miRNA-4429模拟物(miRNA-4429 mimic)、miRNA-4429抑制物(miRNA-4429 inhib-itor)、模拟物阴性对照(NC)混合均匀,分别作为miRNA-4429 mimic组、miRNA-4429 inhibitor组、NC组.采用克隆形成实验检测细胞增殖能力,Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力,流式细胞术检测细胞凋亡情况,qRT-PCR检测PIK3R1 mRNA相对表达量,蛋白质印迹法检测PIK3R1蛋白表达情况.结果 乳腺癌组织中miRNA-4429、PIK3R1 mRNA相对表达量均明显低于癌旁组织,差异均有统计学意义(P﹤0.01).miRNA-4429 mimic组克隆形成率、迁移细胞数目、侵袭细胞数目均低于NC组,miRNA-4429 inhibitor组克隆形成率、迁移细胞数目、侵袭细胞数目均高于NC组,差异均有统计学意义(P﹤0.05).miRNA-4429 mimic组细胞早期凋亡率、晚期凋亡率及总凋亡率均高于NC组,miRNA-4429 inhibitor组细胞早期凋亡率、晚期凋亡率及总凋亡率均低于NC组,差异均有统计学意义(P﹤0.05).miRNA-4429 mimic组细胞中PIK3R1 mRNA和蛋白相对表达量均低于NC组,miR-NA-4429 inhibitor组细胞中PIK3R1 mRNA和蛋白相对表达量均高于NC组,差异均有统计学意义(P﹤0.05).结论 乳腺癌组织中miRNA-4429表达水平较低,miRNA-4429通过调控PIK3R1的表达抑制乳腺癌细胞增殖、迁移和侵袭,并促进乳腺癌细胞凋亡,可能成为治疗乳腺癌的新靶点.

目的 探讨miR-4429与依赖还原型辅酶/醌氧化还原酶1(NADH quinone dehy-drogenase 1,NQO1)对高糖诱导的肾小管上皮细胞增殖、凋亡、炎症因子分泌的影响及其作用机制.方法 体外培养人肾小管上皮细胞HK-2,用30 mmol/L葡萄糖处理24 h,制备糖尿病肾病肾小管上皮细胞损伤模型,记作高糖组;用含有5.5 mmol/L葡萄糖的培养基培养24 h,记作正常对照组;用含有50 mmol/L甘露醇的培养基培养24 h,记作高渗对照组;分别将miR-4429抑制剂(anti-miR-4429)、anti-miR-4429阴性对照序列(anti-miR-NC)、anti-miR-4429与NQO1小干扰RNA(si-NQO1)、anti-miR-4429与si-NQO1阴性对照序列(si-NC)转染至HK-2细胞,使用含有30 mmol/L葡萄糖的培养基培养24 h,分别记作HG+anti-miR-4429组、HG+anti-miR-NC组、HG+anti-miR-4429+si-NQO1组、HG+anti-miR-4429+si-NC组.检测各组细胞miR-4429、NQO1 mRNA的表达水平,并检测各组细胞存活率、细胞凋亡率、Caspase-3蛋白水平、NQO1蛋白水平、丙二醛(malondialedhyde,MDA)含量、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性、白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)含量、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)含量.采用双荧光素酶报告实验验证miR-4429过表达对野生型和突变型NQO1荧光素酶活性的影响.结果 高糖处理后,miR-4429、Caspase-3的表达水平显著升高(P<0.05),细胞凋亡率显著升高(P<0.05),MDA含量与IL-1β、TNF-α水平显著升高(P<0.05),但NQO1 mRNA的表达水平显著降低(P<0.05),细胞存活率与SOD活性显著降低(P<0.05);抑制miR-4429表达后细胞凋亡率与Caspase-3表达量显著降低(P<0.05),MDA含量与IL-1β、TNF-α水平显著降低(P<0.05),细胞存活率显著升高(P<0.05),SOD活性显著升高(P<0.05);双荧光素酶报告实验证实miR-4429能够抑制NQO1的3′-UTR区荧光素酶活性(P<0.05);抑制NQO1的表达可明显减弱miR-4429的表达对高糖诱导的肾小管上皮细胞损伤的保护作用.结论 miR-4429可靶向调控NQO1的表达从而促进高糖诱导的肾小管上皮细胞凋亡,降低细胞存活率,加重细胞氧化损伤与炎性损伤.

目的 探讨微小RNA-4429(miR-4429)对前列腺癌细胞增殖、迁移与侵袭的影响及其调控机制.方法 将miR-4429模拟物(miR-4429 mimic)、miR-4429抑制物(miR-4429 inhibitor)、模拟物阴性对照(mimic NC)和抑制物阴性对照(inhibitor NC)质粒转染至前列腺癌细胞系DU145、22rv1、PC3、LNCaP、VCaP和人前列腺上皮细胞系RWPE-1中,采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测miR-4429的相对表达量.采用CCK-8法、集落形成试验、Transwell小室法和基质胶侵袭试验检测miR-4429对PC3细胞增殖、迁移和侵袭的影响.采用生物信息学方法预测miR-4429可能作用的靶基因.通过荧光素酶报告基因试验确定miR-4429和异黏蛋白(MTDH)是否结合.采用RT-qPCR和免疫印迹法检测miR-4429对MTDH mRNA和蛋白表达的影响.结果 5种前列腺癌细胞系miR-4429相对表达量均显著低于人前列腺上皮细胞系RWPE-1(P<0.05),其中PC3细胞最低(P<0.01).miR-4429 mimic组miR-4429相对表达量显著高于mimic NC组(P<0.01),克隆形成、迁移及侵袭细胞数目明显低于mimic NC组(P<0.01).miR-4429 inhibitor组miR-4429相对表达量显著低于inhibitor NC组(P<0.01),克隆形成、迁移及侵袭细胞数目显著高于inhibitor NC组(P<0.01).荧光素酶报告基因试验结果证实miR-4429和MTDH靶向结合.与RWPE-1细胞相比,PC3细胞中MTDH mRNA和蛋白相对表达量显著升高(P<0.01).转染miR-4429 mimic后,PC3细胞中MTDH mRNA和蛋白相对表达量明显低于mimic NC组(P<0.01).转染miR-4429 inhibitor后,PC3细胞中MTDH mRNA和蛋白相对表达量明显高于inhibitor NC组(P<0.01).过表达MTDH可显著提高PC3细胞的增殖、迁移和侵袭能力,且可逆转miR-4429对PC3细胞增殖、迁移和侵袭能力的抑制作用.结论 miR-4429能够抑制PC3细胞的增殖、迁移及侵袭能力,其机制与下调MTDH基因的表达有关.

目的 探讨奇果菌素对乳腺癌MDA-MB-231细胞糖酵解和增殖的影响及其对miR-4429的调控作用.方法 不同浓度(25 μmol/L、50 μmol/L、100 μmol/L)的奇果菌素处理MDA-MB-231细胞,将miR-NC、miR-4429 mimics分别转染至MDA-MB-231细胞后加入奇果菌素处理细胞(回复实验);试剂盒检测葡萄糖消耗量与乳酸生成量;CCK-8、平板克隆形成实验分别检测细胞增殖及克隆形成;qRT-PCR法检测miR-4429的表达量;Western blot法检测PKM2、HK2蛋白表达量.结果 不同浓度的奇果菌素处理后细胞中葡萄糖消耗量与乳酸生成量降低(P＜0.05),PKM2、HK2蛋白水平降低(P＜0.05),克隆形成数减少(P＜0.05),细胞增殖抑制率升高(P＜0.05),miR-4429的表达水平升高(P＜0.05);与转染miR-NC比较,转染miR-4429 mimics后细胞中葡萄糖消耗量与乳酸生成量降低(P＜0.05),PKM2、HK2蛋白水平降低(P＜0.05),克隆形成数减少(P＜0.05),细胞增殖抑制率升高(P＜0.05);回复实验结果显示葡萄糖消耗量与乳酸生成量升高(P＜0.05),PKM2、HK2蛋白水平升高(P＜0.05),克隆形成数增多(P＜0.05),细胞增殖抑制率降低(P＜0.05).结论 奇果菌素可通过促进miR-4429的表达而抑制乳腺癌细胞糖酵解、增殖及克隆形成.

肺癌是我国死亡率最高的恶性肿瘤[1].非小细胞肺癌(NSCLC)作为常见的诊断类型,约占肺癌的85%,其发病隐匿,受目前检测方法限制,约75%NSCLC患者诊断时已为晚期,5年生存率不足20%[2].目前,临床常用的肺癌血清肿瘤标志物有癌胚抗原(CEA)、糖类抗原125(CA125)、细胞角蛋白片段19(CYFRA21-1)、神经元特异性烯醇化酶(NSE)等,但它们的敏感度均较低,尚难满足肺癌的临床诊断需求,特别是对于早期肺癌的识别[3].因此,探寻高敏感度、高特异度的新型肿瘤标志物,以提高临床对于肺癌的诊断水平有着重要意义.

目的:探讨circAGFG1对胆管癌QBC939细胞增殖、迁移和侵袭的影响及可能机制.方法:收集2017年4月至2019年10月于联勤保障部队第九八八医院接受手术的33例胆管癌患者的癌组织及对应癌旁组织,qPCR法检测组织中circAGFG1和miR-4429表达水平.体外培养胆管癌QBC939细胞,分别转染si-circAGFG1、miR-4429 mimic、共转染si-circAGFG1与anti-miR-4429后,采用CCK-8法和克隆形成实验检测对细胞增殖的影响,划痕实验和Transwell法分别检测对细胞迁移和侵袭的影响,WB法检测对细胞中E-cadherin和N-cadherin蛋白表达的影响.双荧光素酶报告基因实验验证circAGFG1和miR-4429之间的靶向调控关系.结果:胆管癌组织中circAGFG1的表达量高于癌旁组织(3.89±0.26 vs 1.00±0.08,P<0.05),而miR-4429的表达量低于癌旁组织(0.28±0.03 vs 1.00±0.05,P<0.05).干扰circAGFG1或过表达miR-4429后,QBC939细胞增殖水平、克隆形成数、划痕愈合率、侵袭细胞数及细胞中N-cadherin蛋白表达均显著降低(均P<0.05),而E-cadherin蛋白表达显著升高(P<0.05).circAGFG1可靶向结合miR-4429,且干扰circAGFG1会促进QBC939细胞中miR-4429表达(均P<0.05).下调miR-4429表达能够逆转干扰circAGFG1对QBC939细胞增殖、迁移和侵袭的影响(均P<0.05).结论:circAGFG1在胆管癌组织中表达升高,其可能通过靶向抑制miR-4429促进胆管癌QBC939细胞的增殖、迁移和侵袭.

目的 探讨miR-4429和基质金属蛋白酶8(MMP-8)在胃癌患者血清中的表达,分析二者与胃癌患者临床病理学特征的关系,并明确其在胃癌诊断中的意义.方法 纳入46例胃癌患者作为观察组,同期选取45名健康体检者作为对照组.应用RT-qPCR法检测两组测试者血清中miR-4429的表达水平,ELISA法检测MMP-8的表达水平.计量变量采用Shapiro-Wilk正态检验,不满足正态分布选择Spearman等级相关,满足正态分布选择Pearson线性相关用于检验miR-4429和MMP-8之间的相关性.采用受试者工作特征曲线(ROC)和曲线下面积(AUC)评价MiR-4429和MMP-8作为胃癌诊断指标的诊断效果.结果 观察组与对照组一般临床信息方面比较差异无统计学意义(P>0.05).观察组患者血清中miR-4429的表达水平显著低于对照组(P<0.05),MMP-8的表达水平显著高于对照组(P<0.05).Pearson相关分析显示,miR-4429和MMP-8在胃癌患者血清中表达呈显著负相关关系(r=-0.558,P<0.05).miR-4429表达与胃癌患者肿瘤分化程度、TNM分期有关(P<0.05),MMP-8与淋巴结转移有关(P<0.05).ROC曲线结果显示,miR-4429诊断胃癌的曲线下面积(AUC)为0.776(95％CI:0.681～0.870),特异度为66.67％,敏感度为77.08％,截断值为1.25.MMP-8诊断胃癌的AUC为0.774(95％CI:0.678～0.870),特异度为84.44％,敏感度为62.50％,截断值为7.95 ng/mL.miR-4429和MMP-8联合诊断胃癌的AUC为0.862(95％CI:0.799～0.925),特异度为76.58％,敏感度为83.91％.结论 miR-4429和MMP-8的表达可能与胃癌发生发展有密切关系,二者联合检测可在胃癌诊断、治疗方面具有指导作用.