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微RNA-214在肾脏疾病中的研究进展
编辑人员丨1周前
微RNA(microRNA,miR)-214是脊椎动物中特有的microRNA之一,在多种肾脏疾病的肾组织中呈现差异表达,通过促进炎性反应、参与上皮-间充质转化、诱导线粒体功能障碍、抑制细胞凋亡、促进细胞增殖等途径发挥不同的病理生理作用,与急性肾损伤及慢性肾脏病的发生发展密切相关。因此,microRNA-214可能是未来针对肾脏疾病诊断和治疗的新靶点。本文系统综述了microRNA-214的生物学特征及其在肾脏疾病中的研究进展,探讨了其作为肾脏疾病诊断标志物及治疗靶点的可行性、局限性及潜在应用前景。
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编辑人员丨1周前
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微小RNA-214-5p靶向鼠双微体2调控人瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖和凋亡
编辑人员丨1周前
目的:探讨微小RNA(miRNA,miR)-214-5p对人瘢痕疙瘩成纤维细胞(KF)(购自上海信裕生物技术有限公司)增殖和凋亡的影响及其作用机制。方法:检测62例正常皮肤组织和62例皮肤瘢痕疙瘩患者miR-214-5p表达。将miR-NC(miR-NC组)、miR-214-5p(miR-214-5p组)、si-NC(si-NC组)、si-鼠双微体2基因(MDM2)(si-MDM2组)、anti-miR-NC(anti-miR-NC组)、anti-miR-214-5p(anti-miR-214-5p组)、miR-214-5p+pcDNA3.1(miR-214-5p+pcDNA3.1组)和miR-214-5p+pcDNA3.1-MDM2(miR-214-5p+pcDNA3.1-MDM2组)转染至KF细胞。采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测miR-214-5p表达;蛋白质印迹法(Western blot)检测蛋白表达;细胞计数试剂盒(CCK-8)检测细胞增殖;流式细胞仪检测细胞凋亡;双荧光素酶报告基因检测细胞荧光活性。采用 t检验或单因素方差分析比较两组或多组间均数差异。 结果:与miR-NC组比较,miR-214-5p组KF细胞细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)、吸光度( A450)值和B淋巴细胞瘤-2(bcl-2)显著降低(分别为0.23±0.02比0.80±0.08、0.52±0.05比0.97±0.09、0.16±0.02比0.68±0.06, t=20.737、13.695、24.661, P<0.05),miR-214-5p、p21、bcl-2相关X蛋白(bax)和凋亡率显著升高[分别为0.51±0.05比0.14±0.01、0.95±0.09比0.27±0.02、0.79±0.08比0.14±0.04、(23.57±2.23)%比(8.16±0.85)%, t=21.769、22.127、21.802、19.371, P<0.05]。与si-NC组比较,si-MDM2组KF细胞MDM2、Cyclin D1、 A450和bcl-2显著降低(分别为0.33±0.03比0.84±0.07、0.37±0.03比0.82±0.07、0.64±0.06比0.97±0.08、0.26±0.03比0.66±0.05, t=14.621、12.328、7.926、6.112, P<0.05),p21、bax和凋亡率显著升高[分别为0.73±0.07比0.26±0.03、0.61±0.06比0.13±0.05、(18.27±1.53)%比(8.23±0.95)%, t=15.477、10.386、11.149, P<0.05]。与miR-214-5p+pcDNA3.1组比较,miR-214-5p+pcDNA3.1-MDM2组KF细胞MDM2、Cyclin D1、 A450值和bcl-2显著升高(分别为0.57±0.06比0.23±0.02、0.50±0.05比0.22±0.03、0.73±0.07比0.51±0.05、0.48±0.05比0.17±0.02, t=18.324、15.122、10.784、16.131, P<0.05),p21、bax和凋亡率显著降低[分别为0.62±0.06比0.97±0.09、0.43±0.04比0.76±0.08、(12.37±1.24)%比(23.42±2.20)%, t=9.123、13.244、18.024, P<0.05]。 结论:miR-214-5p可抑制KF细胞增殖并促进凋亡,其机制可能与靶向调控MDM2有关。
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编辑人员丨1周前
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微小RNA-214-3p介导神经营养酪氨酸激酶受体2型通路调节血管内皮生长因子旁分泌在骨关节炎发展中的作用
编辑人员丨1周前
目的:探讨微小RNA(miR)-214-3p在骨关节炎(OA)软骨细胞中的表达及其调节内皮细胞迁移和血管生成的机制。方法:选取2020年6月至2020年12月在郑州大学第一附属医院接受全膝关节置换的16例OA患者及12例无膝关节疾病但因创伤导致下肢截肢的患者分别作为OA组和健康组,获取软骨标本,提取软骨细胞。采用蛋白印迹分析和实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)检测miR-214-3p在软骨细胞中的表达水平。通过创面愈合实验、小管形成实验、酶联免疫吸附法(ELISA)检测细胞的迁移率、血管生成率、血管内皮生长因子(VEGF)分泌情况。采用生物信息学分析、双荧光素酶分析等方法分析miR-214-3p与神经营养酪氨酸激酶受体2型(TrkB)的关系。采用方差分析(ANOVA)和 t检验。 结果:TrkB在OA组中的表达水平明显高于健康组(2.13±0.41比0.92±0.21, t=9.318, P<0.01)。miR-214-3p在OA组中的表达明显低于健康组(0.26±0.12比1.12±0.31, t=-10.177, P<0.01),差异均有统计学意义。OA组miR-214-3p表达水平与TrkB表达水平呈负相关( r=-0.730, P<0.05),健康组中miR-214-3p表达水平与TrkB表达水平呈负相关( r=-0.705, P<0.05)。TargetScan数据库预测了miR-214-3p和TrkB的靶向结合位点,双荧光素酶实验验证了TrkB与miR-214-3p的靶向结合。TrkB过表达组VEGF水平高于空载体组[(221.3±5.2) ng/L比(137.2±4.8) ng/L, t=43.742, P<0.01]、内皮细胞迁移率高于空载体组(1.71±0.22比0.98±0.11, t=10.516, P<0.05)、血管生成率高于空载体组(1.41±0.12比0.99±0.10, t=9.822, P<0.05),差异均有统计学意义。下调OA组的miR-214-3p表达后,VEGF表达水平升高0.95倍( t=5.245, P<0.01),内皮细胞迁移率增加1.12倍( t=3.283, P<0.01),血管生成率增加0.52倍( t=1.174, P<0.01),差异均有统计学意义。 结论:软骨细胞中TrkB信号通路旁分泌VEGF的激活是由miR-214-3p介导的,在OA发展过程中调控内皮细胞迁移和血管生成。
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编辑人员丨1周前
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葡萄膜黑色素瘤生存预后相关lncRNA的初步筛选及相关性分析
编辑人员丨1周前
目的::通过构建lncRNA-miRNA-mRNA的内源竞争RNA(ceRNA)网络,筛选与葡萄膜黑色素瘤(UM)生存预后相关的长链非编码RNA(lncRNA),并进行相关性分析。方法::以生物信息学为手段,通过疾病预后相关分析,LncRNA亚细胞定位检索,从肿瘤基因组图谱数据库中筛选lncRNA表达数据集。通过mircode数据库和targetscan数据库找到lncRNAs对应的靶microRNA(miRNA),Venn分析筛选出共同的与UM预后相关的miRNA。在多个数据库中同时检索,筛选出共同的miRNA-mRNA。通过KEGG富集与lncRNA-miRNA-mRNA网络可视化,最终确定出与UM生存预后相关的候选lncRNA。结果::在对lncRNA的下游靶miRNA及功能基因的预测中,鉴定出了630对候选miRNA-mRNA。通过ceRNA调控基因表达的机制,筛选出了9个可能发挥ceRNA功能的lncRNA。KEGG分析得到lncRNA的下游调控基因主要富集在参与肿瘤病理进程的信号通路中。SHNG6可能通过调控has-miR-214-5p、has-miR-214-3p、has-miR-let-7b-5p、has-miR-let-7c-3p等miRNAs,调节下游的功能基因 BAX、 IGF1R、 KRAS、 PIK3R1、 PDGFD等。 结论::lncRNAs通过ceRNAs机制,调控一系列参与肿瘤发生发展的致癌基因的表达,影响UM的预后及治疗,SHNG6、LINC01278等lncRNAs可能在其发生发展、迁移及侵袭等方面扮演着重要角色。
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编辑人员丨1周前
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血清微RNA-214、半胱氨酸天冬氨酸特异蛋白酶1与慢性心力衰竭患者心室重构和预后的相关性
编辑人员丨1周前
分析研究血清微RNA(miR)-214、半胱氨酸天冬氨酸特异蛋白酶1(Caspase-1)与慢性心力衰竭(CHF)患者心室重构和预后的相关性。研究结果显示,血清miR-214、Caspase-1与CHF患者的心室重构和预后情况密切相关,可能成为CHF患者预后不良的辅助预测指标。
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编辑人员丨1周前
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p53/microRNA-214/ULK1信号通路调控的自噬在糖尿病肾病中的作用机制
编辑人员丨1周前
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编辑人员丨1周前
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依托咪酯通过调控miR-214-3p/TBL1XR1分子轴抑制脂多糖诱导心肌细胞炎症及凋亡
编辑人员丨1周前
目的:探讨依托咪酯对脂多糖(lipopolysaccharide, LPS)诱导心肌细胞炎症、凋亡的影响及其可能作用机制。方法:将体外培养的大鼠心肌细胞H9c2采用随机数字表法分为5组(每组3个复孔,每组实验重复3次):正常对照组(Con组)、脂多糖组(LPS组)、脂多糖+20 μmol/L依托咪酯组(E-L组)、脂多糖+50 μmol/L依托咪酯组(E-M组)、脂多糖+100 μmol/L依托咪酯组(E-H组)。Con组正常培养,LPS组加入含浓度1 mg/L LPS的杜氏改良培养基(dulbecco's modified eagle medium, DMEM)培养24 h,E-L组、E-M组、E-H组分别使用不同浓度(20、50、100 μmol/L)依托咪酯与1 mg/L LPS的DMEM培养液培养24 h。再次选取正常培养的心肌细胞采用随机数字表法分为两组(每组3个复孔,每组实验重复3次):脂多糖+100 μmol/L依托咪酯+anti-微RNA(microRNA, miR)-NC组(anti-miR-NC组)和脂多糖+100 μmol/L依托咪酯+anti-miR-214-3p组(anti-miR-214-3p组)。anti-miR-NC组和anti-miR-214-3p组分别将anti-miR-NC和anti-miR-214-3p转染至心肌细胞,加入含有100 μmol/L依托咪酯与1 mg/L LPS的DMEM培养液培养24 h。ELISA法检测TNF-α、IL-6、IL-1β水平,流式细胞术检测细胞凋亡率,实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR, qRT-PCR)检测miR-214-3p与转导素β1X连锁受体蛋白质1(transducin β-like 1X related protein 1, TBL1XR1)的表达量,双荧光素酶报告实验验证miR-214-3p与TBL1XR1的靶向调控关系,Western blot法检测TBL1XR1、B淋巴细胞瘤-2(B-cell lymphoma-2, Bcl-2)相关蛋白(Bcl-2-associated X protein, Bax)、Bcl-2的表达量。结果:与Con组比较,LPS组TNF-α、IL-6、IL-1β、Bax水平以及细胞凋亡率、TBL1XR1 mRNA表达升高( P<0.05),Bcl-2蛋白水平和miR-214-3p表达降低( P<0.05);与LPS组比较,E-L组、E-M组、E-H组TNF-α、IL-6、IL-1β、Bax水平以及细胞凋亡率、TBL1XR1 mRNA表达呈剂量依赖性降低( P<0.05),Bcl-2蛋白水平和miR-214-3p表达呈剂量依赖性升高( P<0.05);E-L组、E-M组、E-H组两两比较差异有统计学意义( P<0.05)。miR-214-3p可负向调控TBL1XR1的表达( P<0.05)。与anti-miR-NC组比较,anti-miR-214-3p组TNF-α、IL-6、IL-1β、Bax水平以及细胞凋亡率升高( P<0.05),Bcl-2蛋白水平降低( P<0.05)。 结论:依托咪酯可通过调控miR-214-3p/TBL1XR1分子轴从而抑制LPS诱导的心肌细胞炎症及凋亡。
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编辑人员丨1周前
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血浆外泌体miR-214-3p作为葡萄膜黑色素瘤诊断及预后评估生物标志物的研究
编辑人员丨1周前
目的:探讨微小RNA(miR)-214-3p在不同类型葡萄膜黑色素瘤(UM)患者血浆外泌体中的差异性表达,评估其是否可作为UM诊疗的新型分子生物标志物。方法:收集2015年12月至2019年10月于北京同仁医院行眼球摘除术并确诊为UM的患者25例,其中原位梭形细胞型UM组和原位类上皮细胞型UM组各10例,转移型UM组5例(包括1例梭形细胞型UM患者和4例类上皮细胞型UM患者);同期收集10例健康对照者作为健康对照组,抽取所有受试者血液样本,提取血浆外泌体,透射电子显微镜下观察外泌体形态,分析外泌体粒径,Western blot法鉴定外泌体标记蛋白,采用实时荧光定量PCR法测定各组患者血浆外泌体miR-214-3p表达水平。采用差异性检验比较UM患者与健康对照者和不同类型UM患者间的血浆外泌体miR-214-3p的差异表达;通过受试者工作特征(ROC)曲线评价血浆外泌体miR-214-3p对UM的诊断及分型效能。结果:透射电子显微镜下可见,所提取外泌体呈一侧凹陷的半球形结构,直径约100 nm。囊泡粒径大小为(82.0±2.7)nm。Western blot结果显示外泌体特异性标记蛋白TSG101条带均为阳性,阴性标记蛋白Calnexin均呈阴性。健康对照组、原位UM组和转移型UM组血浆外泌体miR-214-3p相对表达量分别为0.86(0.57,1.49)、0.24(0.10,0.67)和0.43(0.23,0.56),原位UM组血浆外泌体miR-214-3p相对表达量较健康对照组明显降低,差异有统计学意义( Z=2.62, P<0.01);ROC曲线对血浆外泌体中miR-214-3p的诊断效能分析显示,血浆外泌体miR-214-3p的AUC为0.795。转移型UM组血浆外泌体miR-214-3p相对表达量较健康对照组明显降低,差异有统计学意义( Z=2.08, P<0.05);原位梭形细胞型UM组和原位类上皮细胞型UM组血浆外泌体miR-214-3p相对表达量分别为0.11(0.07,0.64)和0.46(0.14,0.91),2个组间以及转移型UM组与原位类上皮型UM组间患者血浆外泌体miR-214-3p相对表达量比较差异均无统计学意义(均 P>0.05)。 结论:血浆外泌体miR-214-3p在原位UM患者及转移型UM患者中均显著下降,循环miR-214-3p具有作为UM诊断生物标志物的潜力,但血浆外泌体miR-214-3p缺乏对UM分型的评估能力。
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编辑人员丨1周前
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基于测序的肝细胞癌血浆外泌体微小RNA-1248的差异表达及功能分析
编辑人员丨1周前
目的:筛选血浆外泌体微小核糖核苷酸(microRNA)作为肝细胞癌(HCC)的诊断标志物,并分析候选miRNA在HCC进展中可能发挥的作用。方法:2018年10月至2019年2月收集12例于广州市第一人民医院初诊为"HCC"的患者及12例健康志愿者血浆样本,利用超速离心法收集血浆外泌体,经动态光散射法及蛋白质免疫印迹法鉴定后,提取RNA进行测序。通过定量聚合酶链反应(qPCR)验证候选外泌体miRNA差异表达量,使用 t检验分析各miRNA表达量差异。通过生物信息学方法预测候选miRNA的靶基因及可能调控的通路,分析其在HCC进展过程中发挥的作用,组间比较采用 t检验。 结果:以差异表达倍数2倍以上(Fold change>2.0或<0.5,且 P<0.05)作为标准,分别比较HCC患者术前、术后及健康志愿者血浆外泌体miRNA的差异表达结果,结合两次结果,筛选表达同时上/下调miRNA共12个。其中,表达上调6个(miR-2115-3p、miR-214-3p、miR-511-5p、miR-1299、miR-10a-5p、miR-375-3p),表达下调6个(miR-219a-2-3p、miR-127-3p、miR-9-5p、miR-383-5p、miR-212-5p、miR-1248)。qPCR验证候选miRNA在HCC患者及健康志愿者血浆外泌体中的表达差异,HCC组miR-1248表达低于健康志愿者组(9.046 ΔCt比7.597 ΔCt, t=2.849, P<0.05)。 结论:血浆外泌体miR-1248有作为HCC的诊断标志物的潜力。血浆外泌体miR-1248可通过调控受体细胞的细胞外基质受体相互作用、介导代谢重编程抑制HCC进展。
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编辑人员丨1周前
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糖皮质激素对晶状体上皮细胞生物学功能调控作用的生物信息学分析
编辑人员丨1周前
目的:利用生物信息学方法分析糖皮质激素对晶状体上皮细胞(LECs)生物学功能的影响,并预测相关的微小RNA(miRNA)。方法:下载GSE3040数据集,设置1 μmol/L地塞米松处理的人LECs细胞株HLE-B3细胞为实验组,1 μmol/L二甲基亚砜(DMSO)处理的HLE-B3细胞为对照组,利用GEO2R工具分析2个组间的差异表达基因。利用Metascape网站进行差异基因功能富集分析,通过EdU细胞增生实验检测2个组间细胞增生差异。通过STRING网站和cytoscape软件构建蛋白互作网络图,cytohubba app计算出hub基因,采用实时荧光定量PCR法检测2个组间hub基因的表达差异。利用mirCode数据库预测与hub基因相关的miRNA。结果:实验组与对照组间分析出341个差异基因,其中上调基因为300个,下调基因为41个。下调基因中差异最显著的5个基因是 SLC12A1、 MED13L、 ALDH5A1、 SLC15A3和 WWC1基因;上调基因中差异最显著的5个基因是 SCNN1A、 ANKRD36、 FKBP5、 PYY和 ADH1B基因。列出了富集量排名前20的生物学功能关键词,结果显示富集量最大的是对HLE-B3细胞增生的负向调节。实验组细胞增生率为(8.09±0.20)%,低于对照组的(39.63±0.80)%,差异有统计学意义( t=38.43, P<0.01)。前10位hub基因分别是 SST、 CXCL8、 GRM1、 GNRH1、 CXCL5、 PPBP、 CX3CR1、 PYY、 EDNRA和 GRK5,实时荧光定量PCR结果显示2个组间SST、CXCL8、GRM1、PYY、EDNRA和GRK5 mRNA相对表达量比较差异均有统计学意义(均 P<0.05)。与hub基因相关性强的前6位miRNA分别是miR-15abc、miR-214、miR-23abc、miR-129-5p、miR-132和miR-24。 结论:1 μmol/L地塞米松即可对HLE-B3细胞的增生产生负性调控作用。 SST、 CXCL8、 GRM1、 PYY、 EDNRA和 GRK5基因可能是糖皮质激素的作用靶点,miR-15abc、miR-214、miR-23abc、miR-129-5p、miR-132和miR-24最可能与hub基因相关。
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编辑人员丨1周前
