目的:分析微小RNA-23a（miR-23a）与磷酸酶及张力蛋白同源物基因（PTEN）调控轴在结直肠癌（colorectal cancer，CRC）LS513细胞中的表达情况，并探讨二者对CRC发生发展的影响。方法:将LS513细胞分为空白对照组（NG组，细胞不做特殊处理）、阴性对照组（NC组，加入5 μl Lipofectamine3000和50 pmol/μl NC）、抑制miR-23a表达组（miR-23a-inhibitor组，转染miR-23a-inhibitor序列）。采用实时荧光定量PCR法检测LS513细胞miR-23a、PTEN mRNA水平；MTT法检测LS513细胞增殖能力；Transwell实验检测细胞迁移、侵袭能力；蛋白质印迹法检测增殖、迁移侵袭及磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B（PI3K/AKT）通路相关蛋白水平变化。结果:与NG组、NC组比较，miR-23a-inhibitor组LS513细胞中miR-23a水平显著降低（ P<0.05），PTEN mRNA及蛋白表达水平均显著升高（ P<0.05）。MTT法检测结果显示与NG组、NC组比较，miR-23a-inhibitor组增殖抑制率显著升高[（16.62±3.21）% vs（16.65±3.26）% vs（47.55±13.61）%]（ P<0.05），PCNA蛋白表达显著降低（ P<0.05）。与NG组、NC组比较，miR-23a-inhibitor组LS513细胞迁移数[（287.25±58.32）vs（285.37±58.43）vs（136.87±36.53）]、侵袭数[（242.53±50.95）vs（239.87±50.62）vs（103.77±30.06）均显著减少（ P<0.05），且MMP-9、E-cadlerin蛋白表达显著降低（ P<0.05）。与NG组、NC组比较，miR-23a-inhibitor组LS513细胞中p-PI3K/PI3K、p-ATK/ATK蛋白表达量显著降低（ P<0.05）。 结论:抑制miR-23a表达可能上调PTEN基因表达抑制PI3K/Akt通路活化，进而抑制LS513细胞增殖、迁移及侵袭。

目的 研究microRNA (miR)-513b-5p对晶状体稳定性调节蛋白αB-crystallin的调节关系,及miR-513b-5p对晶状体上皮细胞(lens epithelial cells,LEC)氧化应激和凋亡调节的下游机制.方法 实时定量PCR(RT-qPCR)和Western blot法分别检测白内障患者和健康志愿者晶状体组织中miR-513b-5p及αB-crystallin的水平.miR-513b-5p拟似物mimic单独转染LEC细胞SRA01/04,或抑制剂和H2O2共处理SRA01/04;另外,mimic与αB-crystallin过表达质粒cDNA3.1-αB-crystallin(c-CRYAB)联合转染SRA01/04,试剂盒检测的细胞凋亡率,RT-qPCR法和Western blot法分别检测miR-513b-5p 的水平及αB-crystallin、活性氧(ROS)和超氧化物歧化酶(SOD)的表达变化,生物信息学分析和荧光素酶报告基因实验研究miR-513b-5p和αB-crystallin的靶向关系.结果 白内障患者晶状体组织中miR-513b-5p的水平显著上调(P＜0.05)和αB-crystallin的表达水平下调(P＜0.05);过表达miR-513b-5p促进SRA01/04凋亡和活性氧ROS分子水平,下调抗氧化分子SOD;抑制miR-513b-5p降低H2O2所诱导的活性氧ROS(P＜0.05);αB-crystallin的表达被miR-513b-5p过表达显著性下调(P＜0.05),miR-513b-5p过表达对细胞凋亡和ROS与SOD水平的调控作用被αB-crystallin过表达显著削弱(P＜0.05).结论 miR-513b-5p通过对αB-crystallin蛋白的负调节从而促进LEC的氧化应激和凋亡.

目的:研究MicroRNA(miR)-513b-5p对代谢型谷氨酸受体5(mGluR5)的调节关系及其对紫杉醇诱导神经病理性疼痛大鼠的影响.方法:RT-qPCR和Western blot法检测紫杉醇诱导神经病理性疼痛大鼠DRG中miR-513b-5p和mGluR5的表达变化.根据生物信息学分析、双荧光素酶报告基因实验和RNA pull-down实验验证miR-513b-5p和mGluR5相互作用.大鼠紫杉醇造模同时行髓鞘内置管,然后按不同分组进行慢病毒髓鞘内注射:⑴对照组(Lv-NC组);⑵miRNA非特异性对照组(Lv-miRNA-NC组);⑶过表达miR513b-5p组(Lv-miR513b-5p组);⑷过表达mGluR5组(Lv-mGluR5组);⑸过表达miR513b-5p混合mGluR5组(Lv-mGluR5+Lv-miR513b-5p组),1周后使用Western blot法检测各组DRG中mGluR5水平,并后续进行热痛觉阈值检测及机械痛觉敏感性检测.结果:miR-513b-5p在紫杉醇疼痛模型大鼠DRG中表达水平明显降低,而mGluR5的水平明显升高(P<0.05),并且mGluR5的蛋白水平在造模后明显上调(P<0.05).StarBase在线分析数据库(http://starbase.sysu.edu.cn/)显示mGluR5与miR-513b-5p存在互补位点,双荧光素酶报告基因实验和RNA pull-down实验均证实miR-513b-5p能特异结合mGluR5(P<0.05);鞘内注射慢病毒Lv-miR513b-5p在降低mGluR5蛋白表达水平同时,行为学结果显示大鼠TWL及MWT明显升高(P<0.05).结论:miR-513b-5p可以通过靶向负调控大鼠DRG中mGluR5的表达水平,从而缓解紫杉醇诱导的神经病理性疼痛.