αB-晶状体蛋白(CRYAB)具有分子伴侣的作用，可以维持血管内皮生长因子水平，促进肿瘤新生血管的形成。近年来研究发现CRYAB在乳腺癌、肺癌、结直肠癌、膀胱癌等多种肿瘤中异常表达，其可通过促进肿瘤细胞失巢凋亡抵抗，调节基质金属蛋白酶和上皮钙黏着蛋白的分泌以及参与上皮间质转化过程，促进肿瘤的迁移和侵袭。CRYAB在肿瘤细胞中的异常表达与肿瘤分期、淋巴结转移、总生存期以及不良预后显著相关，可作为一种新的肿瘤标志物。

目的:探讨细胞外囊泡(EV)介导的微小RNA(miR)-491递送抑制骨肉瘤肺转移。方法:细胞水平检测miR-491靶向降解胫骨来源的骨肉瘤细胞中αB-晶状体蛋白(CRYAB)的信使RNA(mRNA)和蛋白，分为6组，miR-NC组、miR-491组、Vector＋miR-NC组、Vector＋miR-491组、CRYAB＋miR-NC组、CRYAB＋miR-491组。收集我院接受骨折治疗手术的男性患者皮下脂肪组织并分离脂肪组织来源的间充质间质细胞(AD-MSC)，在AD-MSC中过表达miR-491或阴性对照(NC)后收集细胞外囊泡miR-491-EV和NC-EV。随后建立小鼠骨肉瘤肺转移模型并分为两组：NC-EV组和miR-491-EV组，检测肺转移结节数和肺重量。通过 t检验和方差分析检测不同组间差异。 结果:miR-491组的CRYAB的mRNA和蛋白水平低于miR-NC组(1.00±0.03比0.19±0.02， t＝38.912， P<0.01)。Vector＋miR-491组的侵袭能力和迁移能力低于Vector＋miR-NC组(1.00±0.08比0.31±0.03， t＝31.284， P<0.01；1.00±0.08比0.28±0.03， t＝32.641， P<0.01)；CRYAB＋miR-NC组的侵袭能力和迁移能力高于Vector＋miR-NC组(1.00±0.08比3.22±0.18， t＝43.650， P<0.01；1.00±0.08比1.88±0.23， t＝14.000， P<0.01)。miR-491-EV组的鼠骨肉瘤转移性肺结节的数量(6.03±1.21比1.02±0.23， F＝154.412， P<0.05)和肺重量(0.68±0.09比0.47±0.04， F＝43.254， P<0.05)低于NC-EV组。 结论:miR-491能够通过下调CRYAB在骨肉瘤中的表达作为肿瘤抑制因子。

目的:探讨沉默人类同源配对盒基因6(Pax6)对人晶状体上皮细胞(LECs)的生物学行为和上皮-间质转化(EMT)的作用。方法:将SRA01/04人LECs分为小干扰RNA-Pax6(siRNA-Pax6)组和siRNA阴性对照(siRNA-NC)组，siRNA-Pax6组细胞转染siRNA-Pax6，siRNA-NC组细胞转染无序siRNA。转染后24、48、72 h采用细胞计数试剂盒8法检测细胞存活率；转染后48 h，采用流式细胞术检测细胞凋亡比例和不同细胞周期细胞比例；转染后24 h，采用细胞划痕实验检测细胞迁移率；转染后48 h，采用实时荧光定量PCR检测细胞内Pax6、α-晶状体蛋白A(CRYAA)、α-晶状体蛋白B(CRYAB)、转录因子Sox2及EMT相关分子平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、钙黏附蛋白E(E-cadherin)mRNA相对表达量，采用Western blot法检测各组细胞中Pax6蛋白相对表达量。结果:2个组转染后不同时间点细胞存活率总体比较差异均有统计学意义( F分组＝4.776， P<0.05； F时间＝13.535， P<0.05)，其中转染后48 h和72 h，siRNA-Pax6组细胞存活率均明显低于siRNA-NC组，差异均有统计学意义(均 P<0.05)。与siRNA-NC组比较，siRNA-Pax6组G 0/G 1期细胞比例明显增加，S期细胞比例明显减少，差异均有统计学意义( t＝9.971、-5.063，均 P<0.05)。siRNA-Pax6组细胞迁移率为(19.73±6.07)%，低于siRNA-NC组的(70.56±2.97)%，差异有统计学意义( t＝-7.245， P<0.05)。siRNA-Pax6组细胞中Sox2和α-SMA mRNA相对表达量低于siRNA-NC组，E-cadherin mRNA相对表达量高于siRNA-NC组，差异均有统计学意义( t＝-23.254、-5.294、6.062，均 P<0.01)。siRNA-Pax6组细胞中CRYAA和CRYAB mRNA相对表达量明显高于siRNA-NC组，差异均有统计学意义( t＝5.521、8.270，均 P<0.01)。siRNA-Pax6组细胞中Pax6 mRNA相对表达量为0.27±0.01，低于siRNA-NC组的1.00±0.05，差异有统计学意义( t＝-14.456， P<0.001)；siRNA-Pax6组细胞中Pax6蛋白相对表达量为0.24±0.05，低于siRNA-NC组的1.14±0.10，差异有统计学意义( t＝-4.458， P<0.001)。 结论:沉默Pax6可抑制人LECs的增生及EMT过程，维持人LECs内正常晶状体蛋白的表达。

目的:探究甘草甜素(GL)调节多巴胺D2受体(Drd2)/α-B晶状体蛋白(Cryab)/核转录因子-κB(NF-κB)信号通路对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤(HIBD)的治疗作用.方法:从60只产后第7d的新生大鼠中选取12只为假手术组,其余新生大鼠均采用Rice-Vannucci法建立HIBD新生大鼠模型.将造模成功的36只新生大鼠采用随机数字表法分为HIBD组、GL组、氟哌啶醇组(Drd2抑制剂),每组12只.对各组新生大鼠进行神经功能缺损评分及脑含水量测定;苏木素-伊红染色法(HE)及尼氏(Nissl)染色观察海马组织病理改变;脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法(TUNEL)染色检测神经细胞凋亡;酶联免疫吸附法(ELISA)法检测血清中肿瘤坏死因子(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)水平;免疫印记法(Western blot)检测海马组织中Drd2/Cryab/NF-κB通路蛋白表达.结果:与假手术组比较,HIBD组海马CA1结构模糊不清,神经元排列无序,尼氏小体数量减少,神经功能缺损评分、脑含水量、神经元凋亡率、TNF-α、IL-6、p-NF-κB/NF-κB蛋白表达升高,Drd2、Cryab蛋白表达降低(P＜0.05);与HIBD组比较,GL组神经元排列相对整齐,尼氏小体数量增多,神经功能缺损评分及脑含水量、神经元凋亡率、TNF-α、IL-6、p-NF-κB/NF-κB蛋白表达降低,Drd2、Cryab蛋白表达升高(P＜0.05);与GL组比较,氟哌啶醇组上述指标均显著逆转(P＜0.05).结论:GL可抑制HIBD新生大鼠炎症反应和神经细胞凋亡,减轻HIBD新生大鼠神经损伤,其作用机制可能与激活Drd2/Cryab/NF-κB信号通路有关.

目的 探讨子宫内膜癌组织中αB-晶状体蛋白(CRYAB)的水平并结合组织病理学特征和手术治疗方案分析该指标的预后价值.方法 收集本院 2015 年 1 月至 2016 年 1 月完成诊治和随访的 78 例子宫内膜癌患者的癌组织和癌旁组织,采用实时定量PCR(qPCR)检测CRYAB水平,分析CRYAB水平与子宫内膜癌临床病理特征的关系,生存分析采用Kap-lan-Meier法,Cox比例风险模型研究影响预后的独立风险因素.结果 子宫内膜癌组织的CRYAB水平为 0.974±0.054,低于癌旁组织的 1.347±0.066,差异有统计学意义(t=4.361,P＜0.001),进一步分析发现CRYAB水平与病理分期、分化程度、肌层浸润深度和淋巴结转移有关(P＜0.05),其中CRYAB水平在病理分期晚、低分化、深肌层浸润及淋巴结转移子宫内膜癌组织中降低.生存分析显示年龄、手术方式、病理分期、病理类型、分化程度、肌层浸润深度、辅助治疗方案对患者的术后生存无显著影响,而CRYAB水平降低(HR= 7.156,95%CI:2.412～21.579,P= 0.016)和淋巴结转移(HR= 5.360,95%CI:1.045～27.488,P=0.044)是影响患者术后生存的独立危险因素.结论 异常低表达的CRYAB水平在子宫内膜癌进展中起着重要作用,可能是子宫内膜癌的独立诊断和预后生物标志物.

目的 观察去甲肾上腺素(NE)对体外培养的原代新生大鼠心肌细胞凋亡率及相关凋亡蛋白的影响.方法 选用出生1-3 d的SD大鼠建立原代培养新生大鼠心肌细胞模型.将培养72 h的心肌细胞随机分为对照组(未使用任何药物)与不同浓度NE组(分别采用10-8,10-7,10-6,10-5,10-4 mol/L NE),每组3孔(n=3).加药后3 h采用流式细胞术测定心肌细胞凋亡率;采用Western blot检测CryAB及Bcl-2、Bax及Bcl-2/Bax比值的变化.结果 与对照组比较,10-8,10-7,10-6,10-5,10-4 mol/L NE作用下心肌细胞凋亡率均出现显著升高(均P<0.05);CryAB表达下降(均P<0.05),Bcl-2表达下降(除10-8 mol/L组外均P<0.05)、Bax表达升高(除10-7 mol/L组外均P<0.05),Bcl-2/Bax比值下降(均P<0.05).结论 去甲肾上腺素可能通过降低CryAB、Bcl-2表达,升高Bax表达,降低Bcl-2/Bax比值,诱导体外原代培养大鼠心肌细胞的凋亡率增加.

目的 探讨αB-Crystallin在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)及癌旁组织中的表达情况,分析其与患者临床病理特征及预后的关系,以及其与NSCLC细胞增殖和迁移能力的相关性.方法 应用RNA干扰技术,下调NSCLC细胞系A549中αB-Crystallin的表达水平,通过CCK-8与Transwell实验分别检测细胞增殖与迁移能力的变化.选择2005年在复旦大学附属中山医院胸外科行肺癌根治术,术后病理为NSCLC的手术切除标本共208例,利用免疫组织化学染色方法检测αB-Crystallin的表达情况,Kaplan-Meier和Cox回归分析αB-Crystallin表达水平与患者临床病理特征及预后的关系.结果 下调A549中αB-Crystallin表达水平后,细胞增殖与迁移能力均显著降低(P＜0.05),组织芯片结果显示αB-Crystallin在肿瘤组织中表达明显高于正常癌旁组织.αB-Crystallin表达水平与淋巴结转移显著相关(P＜0.05),多因素分析结果显示αB-Crystallin表达水平为NSCLC独立不良预后因素.结论 αB-Crystallin在NSCLC中高表达,促进肿瘤的增殖和迁移,αB-Crystallin表达水平与NSCLC患者预后密切相关,αB-Crystallin参与了NSCLC的进展,有可能成为治疗NSCLC的新的潜在靶点.

目的:利用DNA探针杂交技术,结合显色探针技术建立一种新型、高灵敏的免疫检测体系,用于早期先天性白内障的筛查.方法:选取3个常染色体显性遗传的先天性白内障家系中患者14例,取静脉血并提取mRNA,建立CRYAB的捕获探针及显色探针.利用DNA探针,通过碱基配对原则形成三明治结构(捕获探针-DNA探针-显色探针)检测入选者的血样.1家系6例患者静脉血利用酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测αB-晶状体蛋白.结果:最佳条件下,双特异探针技术可检测到最低浓度的先天性白内障晶状体蛋白的突变基因,各突变位点检测率为99.5％ ～99.7％;ELISA法检测样本αB-晶状体蛋白上调,阳性率为85.9％.双特异探针技术敏感性更高,检测位点更多,ELISA法仅局限于蛋白检测水平,精确性不高.结论:双特异探针检测技术操作简单,灵敏度高,可重复性高,经济实惠,在临床上用于产前诊断、优生优育具有重要的应用价值.

[目的]研究益胃汤对初老雌性大鼠下丘脑产生调节作用的相关蛋白质,在分子水平上探索益胃汤的作用机制. [方法]将20只4~6月龄雌性大鼠随机分成正常组、去势组,每组10只,10只10~12月龄雌性大鼠作为初老组.给药结束后,取3组大鼠下丘脑组织,运用同位素标记相对和绝对定量技术(iTRAQ)分离、分析、鉴定大鼠下丘脑差异蛋白.[结果]分析比较初老组、去势组、正常组3组大鼠下丘脑蛋白质,通过多组数据韦恩图分析发现初老组与去势组有17种共同表达的差异蛋白.通过火山图(Volcano Plot)过滤,确定显著差异蛋白[差异倍数(FC)＞1.5或＜2/3, P＜0.05];筛选出了7种与衰老相关的显著差异蛋白及其相关KEGG通路,它们分别为:plasminogen、α-crystallin B chain、Hsp70 binding protein 1、serum transferrin、unconventional myosin-Id、myelin oligodendrocyte glycoprotein、protein Fbxo44.[结论]益胃汤对这7种显著差异蛋白起到上调或下调的作用,为研究益胃汤延缓衰老作用的靶蛋白奠定了基础.

目的 研究microRNA (miR)-513b-5p对晶状体稳定性调节蛋白αB-crystallin的调节关系,及miR-513b-5p对晶状体上皮细胞(lens epithelial cells,LEC)氧化应激和凋亡调节的下游机制.方法 实时定量PCR(RT-qPCR)和Western blot法分别检测白内障患者和健康志愿者晶状体组织中miR-513b-5p及αB-crystallin的水平.miR-513b-5p拟似物mimic单独转染LEC细胞SRA01/04,或抑制剂和H2O2共处理SRA01/04;另外,mimic与αB-crystallin过表达质粒cDNA3.1-αB-crystallin(c-CRYAB)联合转染SRA01/04,试剂盒检测的细胞凋亡率,RT-qPCR法和Western blot法分别检测miR-513b-5p 的水平及αB-crystallin、活性氧(ROS)和超氧化物歧化酶(SOD)的表达变化,生物信息学分析和荧光素酶报告基因实验研究miR-513b-5p和αB-crystallin的靶向关系.结果 白内障患者晶状体组织中miR-513b-5p的水平显著上调(P＜0.05)和αB-crystallin的表达水平下调(P＜0.05);过表达miR-513b-5p促进SRA01/04凋亡和活性氧ROS分子水平,下调抗氧化分子SOD;抑制miR-513b-5p降低H2O2所诱导的活性氧ROS(P＜0.05);αB-crystallin的表达被miR-513b-5p过表达显著性下调(P＜0.05),miR-513b-5p过表达对细胞凋亡和ROS与SOD水平的调控作用被αB-crystallin过表达显著削弱(P＜0.05).结论 miR-513b-5p通过对αB-crystallin蛋白的负调节从而促进LEC的氧化应激和凋亡.