旨在探讨茱萸丸对动脉粥样硬化(AS)的影响及可能的作用机制.采用高脂饲料喂养诱导小鼠AS模型,造模周期为12周.造模成功的50只载脂蛋白E基因敲除(ApoE-/-)小鼠按照随机数字表法分为5组,即模型组,茱萸丸低、中、高剂量组,阿托伐他汀钙组,每组10只;C57BL/6J小鼠10只作为空白组.空白组及模型组给予等体积无菌蒸馏水灌胃,茱萸丸低、中、高剂量组给予130.54、261.08、522.16 mg·kg-1灌胃,阿托伐他汀钙组给予10.40 mg·kg-1灌胃,每日1次,共12周.给药结束后,采用苏木素-伊红(HE)染色观察小鼠主动脉、肝脏、附睾脂肪的病理学变化,并计算主动脉斑块面积占比、附睾脂肪面积、非酒精性脂肪肝活动性积分(NAS);油红O染色、Masson染色观察主动脉脂质及胶原纤维沉积,并计算主动脉红染脂质面积占比、主动脉胶原沉积面积占比;比色法检测血清超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、铁离子水平;免疫荧光法检测主动脉环氧合酶2(COX2)、铁蛋白重链1(FTH1)、胱氨酸/谷氨酸逆向转运蛋白溶质载体家族7成员11(SLC7A11)、谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)蛋白水平;免疫组化法检测主动脉肿瘤蛋白53(p53)水平;蛋白免疫印迹法检测主动脉p53、SLC7A11蛋白表达;实时荧光定量聚合酶链式反应(real-time PCR)检测小鼠主动脉p53、SLC7A11、GPX4、FTH1、前列腺素G/H合酶2(PTGS2)、还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶1(NOX1)mRNA表达水平.结果显示,与空白组比较,模型组小鼠主动脉斑块面积明显扩大,胶原纤维沉积增加,肝脏脂质沉积增加,脂滴变多,附睾脂肪细胞体积扩大;血清中铁离子、MDA含量升高,SOD、GSH-Px水平降低;p53、COX2蛋白表达升高;主动脉FTH1、SLC7A11、GPX4蛋白及mRNA表达降低;PTGS2、NOX1 mRNA表达升高.与模型组比较,茱萸丸低、中、高剂量组及阿托伐他汀钙组小鼠主动脉斑块面积明显缩小,胶原沉积减少,肝脏脂质沉积减少,脂滴变少,附睾脂肪细胞体积缩小;血清中铁离子、MDA含量降低,SOD、GSH-Px水平升高;p53、COX2蛋白表达降低;主动脉FTH1、SLC7A11、GPX4蛋白及mRNA表达升高;PTGS2、NOX1 mRNA表达降低.综上所述,茱萸丸对小鼠AS主动脉斑块具有较好的治疗作用,其机制可能与调控p53/SLC7A11信号通路介导的氧化损伤及抑制细胞铁死亡有关.

目的:探究田蓟苷(tilianin,Til)预处理对缺氧/复氧(H/R)诱导的H9c2心肌细胞的保护作用.方法:体外培养H9c2心肌细胞,将其分为正常(Normal)组、模型(H/R)组、田蓟苷(Til)组、p53激动剂(Nutlin-3a)组、田蓟苷+p53激动剂(Til+Nutlin-3a)组,缺氧12 h再复氧6 h,建立H/R模型.CCK-8法测H9c2细胞活力,化学荧光法测ROS水平,试剂盒测LDH、MDA、SOD水平,JC-1法测线粒体膜电位(△Ψm),Annexin-FITC/PI和Fluo-3 AM分别结合流式细胞仪检测细胞凋亡率和Ca2+荧光强度,RT-PCR 测定 p53、NOX4、Bax、Bcl-2 mRNA 表达,免疫蛋白印迹法检测 p53、NOX4、Bax、Bcl-2、Nrf2、HO-1 蛋白表达,免疫荧光法测定p53、NOX4蛋白表达.结果:相较于H/R组,Til组H9c2细胞活力增强(P＜0.01),ROS、LDH、MDA水平下降(P＜0.01),SOD水平上升(P＜0.01),△Ψm 增强(P＜0.01),早期和晚期凋亡细胞降低(P＜0.01),Ca2+荧光强度减弱(P＜0.01),p53、NOX4、Bax的mRNA和蛋白表达下降(P＜0.05,P＜0.01),Bcl-2的mRNA和蛋白表达上升(P＜0.01),Nrf2、HO-1的蛋白表达进一步上升(P＜0.01),p53、NOX4阳性细胞表达减少;单独应用Nutlin-3a后上述效应被削弱,而当加入Til后又不同程度逆转Nutlin-3a的效应.结论:Til对缺氧/复氧诱导的H9c2心肌细胞损伤具有显著的保护作用,该作用可能是通过调控p53/NOX4通路,抑制氧化应激和凋亡实现的.

目的:基于动脉粥样硬化(AS)“痰瘀致病”理论观察二陈汤合桃红四物汤对AS的防治作用并探讨其可能的机制.方法:将50只APOE-/-小鼠随机分为模型组,低、中、高剂量组及阳性对照组,10只C57BL/6J小鼠做正常组.除正常组外各组小鼠采用高脂饲料喂养的方法复制AS模型,第9周开始,各组小鼠给予对应药物干预4周.饲养12周后分离各组小鼠血清及主动脉组织,HE染色法观察主动脉斑块形成情况,比色法检测血清SOD、MDA和GSH水平变化,免疫组化检测主动脉COX2和FTH1蛋白水平变化,RT-PCR法检测主动脉p53、SLC7A 11、GPX4、FTH1、PTGS2、NOX1 mRNA水平变化.结果:与正常组比较,模型组小鼠主动脉有较大斑块形成,血清SOD、GSH水平显著降低,MDA水平显著升高,COX2蛋白表达显著升高,FTH1蛋白表达显著降低,p53、PTGS2、NOX1 mRNA表达水平显著升高,SLC7A11、GPX4、FTH1 mRNA表达水平显著降低(P＜0.01).与模型组比较,经过治疗后各干预组小鼠各项指标均显著改善(P＜0.01,P＜0.05),以中药中、高剂量组和阳性对照组效果较为明显.结论:二陈汤合桃红四物汤能明显改善AS情况,其机制可能与调控p53/SLC7A11介导的氧化损伤及抑制细胞铁死亡有关.

目的 观察慢性心力衰竭对肾功能和肾脏纤维化的影响及益气温阳活血利水法的干预作用,探讨“水火相济”理论内涵.方法 随机将50只C57BL/6J小鼠分为假手术组、模型组、中药低、中、高剂量组,通过主动脉缩窄术建立慢性心力衰竭模型小鼠,造模后中药低、中、高剂量组给予益气温阳活血利水中药对应剂量灌胃,假手术组和模型组给予等量生理盐水灌胃,连续给药8周后,小动物超声检测小鼠心脏射血分数、收缩分数变化.于末次给药2h后取材,全自动生化分析仪检测血清肌酐、尿素氮水平,微量酶标法检测血清GSH含量,冰冻切片检测肾脏组织ROS水平,免疫组化法检测肾脏Collagen Ⅰ、Collagen Ⅲ、p53、COX2、FTH1、GPX4蛋白表达情况,RT-PCR法检测肾脏组织P53、SLC7A11、GPX4、PTGS2、NOX1、FTH1 mRNA表达水平.结果 与假手术组比较,模型组小鼠心脏EF、FS、GSH水平显著降低,SCr、BUN、ROS水平显著升高,肾脏Collagen Ⅰ、CollagenⅢ、JNK、p53、PTGS2、NOX1蛋白或mRNA水平显著升高,GPX4、FTH1、SLC7A11蛋白或mRNA水平显著降低;与模型组比较,经治疗后各项指标水平明显改善,差异具有统计学意义.结论 益气温阳活血利水法在改善CHF小鼠心功能的同时能够改善肾脏损伤,减少纤维化,其机制可能与抑制JNK/p53信号通路表达,进一步调控SLC7A11/GPX4/GSH和PTGS2/NOX1信号通路进而降低ROS水平减少细胞铁死亡.