目的 研究田蓟苷联合有氧训练对阿尔茨海默病(AD)大鼠认知功能的影响.方法 将大鼠分为空白组、模型组、对照组、低剂量实验组、中剂量实验组、高剂量实验组和联合组,每组12只.空白组为进行假手术的大鼠,其他组用双侧海马注射β-淀粉样蛋白1-42(Aβ1-42)建立的AD模型大鼠.建模1周后,对照组和联合组大鼠进行跑台有氧训练,其他组大鼠安静饲养.空白组、模型组、对照组灌胃给予0.5％羧甲基纤维素钠(CMC)2 mL.低、中、高剂量组大鼠灌胃给予5、10和20 mg·kg-1·d-1田蓟苷2mL.联合组灌胃20 mg·kg-1·d-1的田蓟苷2mL.共给药6周.用Morris水迷宫实验评估认知功能,用定量逆转录聚合酶链反应法检测海马β-淀粉样前体蛋白裂解酶1(BACE1)mRNA的表达水平,用蛋白质印迹法检测海马核因子-κB(NF-κB)p65磷酸化的表达水平.结果 空白组、模型组、对照组、低剂量实验组、中剂量实验组、高剂量实验组和联合组的逃避潜伏期分别为(20.16±2.06)、(60.45±6.55)、(46.52±2.90)、(42.80±3.15)、(41.19±2.54)、(35.66±2.82)和(28.49±1.97)s,BACE1 mRNA 相对表达量分别为 1.00±0.06、7.88±0.49、6.02±0.38、4.96±0.57、3.01±0.21、1.98±0.17 和 1.48±0.11,磷酸化NF-κB p65(p-NF-κB p65)蛋白相对表达水平分别为0.11±0.03、1.46±0.11、0.89±0.10、0.71±0.06、0.37±0.05、0.29±0.02 和 0.15±0.01,模型组与空白组比较,低、中、高剂量实验组与模型组比较,联合组与高剂量实验组比较,在统计学上差异均有统计学意义(均P＜0.05).结论 田蓟苷联合有氧训练改善了 AD大鼠的认知功能,其机制可能与抑制NF-κB信号通路介导的炎症有关.

目的 建立高效液相色谱(HPLC)法同时测定维药香青兰有效部位中10 个成分含量.方法 采用Shim-pack ODS(4.6 mm×250 mm,5 μm)色谱柱,流动相为乙腈(A)-0.5%甲酸溶液(B),梯度洗脱(0—30 min,17%A;30-60 min,17%→28%A;60-78 min,28%A),流速为1.0 mL·min-1;检测波长为330 nm,柱温为35℃.结果 咖啡酸、4-香豆酸、木犀草苷、木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷、芹菜素-7-O-葡萄糖醛酸苷、迷迭香酸、香叶木素-7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷、丹酚酸A、田蓟苷、香叶木素在该色谱条件下分离度良好,在考察的浓度范围内线性关系良好(r＞0.999 2).加样回收率和相对标准偏差(RSD)分别为91.83%～106.43%和0.38%～2.22%内.结论 建立的含量测定方法准确性高、重复性好,适用于香青兰有效部位的分析与质量控制研究.

目的 研究田蓟苷对A7R5 血管平滑肌细胞(VSMCs)表型转化的影响及其抗动脉粥样硬化(AS)的可能作用机制.方法 采用氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)刺激A7R5 细胞建立血管平滑肌表型转化模型,将细胞分为正常组、模型组、田蓟苷组、Notch1 通路抑制剂组(DAPT 组)和辛伐他汀组.采用 CCK8 法检测细胞增殖情况,Transwell实验检测细胞迁移情况,实时荧光定量 PCR 法检测细胞 SM22α、α-SMA、Notch1、Hes1、Hes5、Jagged-1 mRNA表达,Western blot法检测细胞Notch1、RBP-Jκ、Hes1 蛋白表达.结果 与模型组比较,各给药组均可抑制A7R5 细胞的异常增殖和迁移(P＜0.05,P＜0.01),上调α-SMA mRNA表达(P＜0.01);田蓟苷组和DAPT组下调Notch1 通路相关基因Notch1、Hes-1、Hes-5和Jagged-1 mRNA表达(P＜0.05,P＜0.01);田蓟苷组下调Notch1、Hes-1、RBP-Jκ蛋白表达(P＜0.05,P＜0.01).结论 田蓟苷通过抑制 VSMCs 的异常增殖、迁移、表型转化及调控Notch1 信号通路,从而保护ox-LDL诱导的A7R5 细胞损伤.

目的:探究田蓟苷(tilianin,Til)预处理对缺氧/复氧(H/R)诱导的H9c2心肌细胞的保护作用.方法:体外培养H9c2心肌细胞,将其分为正常(Normal)组、模型(H/R)组、田蓟苷(Til)组、p53激动剂(Nutlin-3a)组、田蓟苷+p53激动剂(Til+Nutlin-3a)组,缺氧12 h再复氧6 h,建立H/R模型.CCK-8法测H9c2细胞活力,化学荧光法测ROS水平,试剂盒测LDH、MDA、SOD水平,JC-1法测线粒体膜电位(△Ψm),Annexin-FITC/PI和Fluo-3 AM分别结合流式细胞仪检测细胞凋亡率和Ca2+荧光强度,RT-PCR 测定 p53、NOX4、Bax、Bcl-2 mRNA 表达,免疫蛋白印迹法检测 p53、NOX4、Bax、Bcl-2、Nrf2、HO-1 蛋白表达,免疫荧光法测定p53、NOX4蛋白表达.结果:相较于H/R组,Til组H9c2细胞活力增强(P＜0.01),ROS、LDH、MDA水平下降(P＜0.01),SOD水平上升(P＜0.01),△Ψm 增强(P＜0.01),早期和晚期凋亡细胞降低(P＜0.01),Ca2+荧光强度减弱(P＜0.01),p53、NOX4、Bax的mRNA和蛋白表达下降(P＜0.05,P＜0.01),Bcl-2的mRNA和蛋白表达上升(P＜0.01),Nrf2、HO-1的蛋白表达进一步上升(P＜0.01),p53、NOX4阳性细胞表达减少;单独应用Nutlin-3a后上述效应被削弱,而当加入Til后又不同程度逆转Nutlin-3a的效应.结论:Til对缺氧/复氧诱导的H9c2心肌细胞损伤具有显著的保护作用,该作用可能是通过调控p53/NOX4通路,抑制氧化应激和凋亡实现的.

目的 为香青兰有效部位(EPDM)的全面质量评价和控制提供依据.方法 制备10批EPDM,利用高效液相色谱串联四极杆-静电场轨道阱高分辨质谱(HPLC-Q-Exactive-MS)联用技术采集EPDM化学信息,结合文献检索、数据库比对、人工解析等手段进行成分鉴定.根据《中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2004A版)》建立10批EPDM的HPLC指纹图谱,进行相似度评价和共有峰指认,并采用HPLC法测定5个指标成分的含量.结果 从EPDM中共鉴定出11个化合物.10批EPDM的指纹图谱相似度均在0.96以上.从11个共有峰中指认出了木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷(LG)、芹菜素-7-O-葡萄糖醛酸苷(APG)、迷迭香酸(RA)、香叶木素-7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷(DG)、田蓟苷(TL)5个色谱峰.定量分析结果显示,上述5个成分在检测质量浓度范围内均线性良好(R2≥0.999),平均加样回收率为95.12%～98.37%;各成分含量分别为21.268 3～29.243 9 mg/g(LG)、6.365 4～7.771 7 mg/g(APG)、37.327 4～45.671 2 mg/g(RA)、17.169 9～21.985 9 mg/g(DG)、66.940 4～91.206 3 mg/g(TL).结论 所建立的成分鉴定、指纹图谱和含量测定方法稳定可行、结果可靠,适用于EPDM的综合质量评价和控制.

目的 研究冷蒿Artemisia frigida全草的化学成分,并初步筛选其药理活性.方法 应用多种色谱技术对冷蒿全草的粗提取物进行系统的分离纯化,采用光谱学和波谱学方法鉴定化合物结构,并对部分单体化合物进行过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)激动活性及蛋白酪氨酸磷酸酯酶1B (PTP1B)抑制活性的筛选.结果 从冷蒿全草提取物中分离得到了26个化合物,分别鉴定为柳穿鱼黄素(1)、棕矢车菊素(2)、金圣草黄素(3)、麦黄酮(4)、3-羰基-吉玛-1(10),11(13)-二烯-6a,12-内酯(5)、蓍素(6)、1,10β-环氧蓍素(7)、滨蒿内酯(8)、4-羟基苯乙酮(9)、猫眼草黄素(10)、棕鳞矢车菊黄酮素(11)、11α,13-二氢魃蒿内酯(12)、chrysantheminA(13)、异泽兰黄素(14)、泽兰黄素(15)、南艾蒿烯内酯(16)、6-甲氧基麦黄酮(17)、hanphyllin (18)、蓟黄素(19)、利得亭(20)、desacetylmatdcarin (21)、subchrysine (22)、木犀草素(23)、咖啡酸(24)、藿香苷(25)、田蓟苷(26).结论 化合物5、7、11、18、25、26为首次从蒿属植物中分离得到,化合物10、12、13、16、17、22为首次从该植物中分离得到;化合物2和15有较弱的PPARγ激动活性,化合物1和3对PTP1B有中等强度的抑制作用.

目的:建立UPLC-UV法同时测定药用菊花中10种化学成分的含量;找到控制不同品种菊花质量的关键因素.方法:采用ACUITY UPLC BEH RP18(2.1mm×100 mm,1.7μm)色谱柱;流动相A为含0.1％甲酸的甲醇:乙腈(5:2)溶液和B为0.1％甲酸进行梯度洗脱;流速0.2 ml·min-1;检测波长348 nm,柱温30℃,进样量1μl;采用SPSS软件进行相关性分析与主成分分析(PCA).结果:各成分即绿原酸、木犀草素-7-O-葡萄糖苷、木犀草素-7-O-葡萄糖醛酸苷、3,5-二咖啡酰基奎宁酸、香叶木素-7-O-葡萄糖苷、大波斯菊苷、异绿原酸C、蒙花苷、田蓟苷基本达到基线分离,且线性关系良好(r>0.999).平均加样回收率90％ ～105％,RSD均<1.5％,重复性和稳定性良好;相关性分析显示测定以上3类成分中各一种可反映菊花中主要成分的含量;PCA显示不同品种菊花各自聚在一起,相互分离.结论:所建立的测定方法快速、稳定、可靠,适用于药用菊花中的10种化学成分的含量测定.该含量测定方法结合PCA可以用于不同品种药用菊花的分类和质量评价.

目的 制备两亲性的载田蓟苷纳米胶束,研究其体外释药特性及协同提高其体外抗H9c2细胞凋亡的活性.方法 以两亲性二嵌段PEG-PPS聚合物为载体材料,通过溶剂挥发法制备载田蓟苷的氧化响应型纳米胶束,并对其形态、粒径分布及体外释放进行表征.采用缺氧/复氧制备H9c2大鼠心肌细胞的损伤模型,以普萘洛尔(Pro)为阳性对照,通过对受损心肌细胞形态学观测、细胞增殖及细胞相对凋亡情况的检测,评价空白胶束,田蓟苷及载田蓟苷纳米胶束对缺氧/复氧诱导H9c2细胞损伤的保护作用.结果 载田蓟苷的纳米胶束外观为球形,粒径分布均匀.载药为3.82％田蓟苷纳米胶束的平均粒径为137 nm,多分散系数为0.162,包封率为91.45％.体外释药研究表明,载田蓟苷纳米胶束无药物突释现象,具有缓释特性,且过氧化氢的存在显著地促进了田蓟苷从纳米胶束中的释放.体外细胞毒性实验表明,当田蓟苷浓度为5 μg·mL-时,载田蓟苷纳米胶束的细胞存活率显著高于相应浓度的田蓟苷和PEG-PPS聚合物纳米胶束.体外抗凋亡活性实验研究表明,载田蓟苷纳米胶束对缺氧/复氧诱导H9c2细胞的凋亡具有明显的抑制作用,具有与普萘洛尔相似的抑制凋亡作用.结论 载田蓟苷纳米胶束具有均匀的粒径及分布,缓释和氧化特性,对缺氧/复氧诱导的H9c2细胞损伤具有显著的保护和抑制凋亡作用,可作为一种有前景的纳米药物输送系统应用于心肌缺血再灌注损伤的治疗.

目的:研究田蓟苷(TIL)对脑缺血再灌注损伤模型大鼠脑组织的保护作用.方法:120只雄性SD大鼠随机分为假手术组(0.9%氯化钠溶液)、模型组(0.9%氯化钠溶液)、尼莫地平组(32 mg/kg)和TIL低、中、高剂量组(4、8、16 mg/kg),每组20只.灌胃相应药物,每天1次,连续7 d,末次给药15 min后,以改良线栓法建立脑缺血再灌注损伤模型.进行大鼠神经功能缺损评分;计算大鼠脑梗死体积百分比;采用苏木精-伊红染色法观察大鼠脑组织病理形态学;检测大鼠脑组织中超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、乳酸脱氢酶(LDH)活性和丙二醛(MDA)含量;采用Western blot法检测大鼠脑组织中降钙素基因相关肽(CGRP)、血管内皮细胞生长因子受体2(VEGFR2)蛋白表达.结果:与假手术组比较,模型组大鼠神经功能缺损评分显著升高(P＜0.01);脑组织梗死体积百分比显著升高(P＜0.01);脑组织神经细胞明显缩小变形,细胞间质水肿明显;脑组织中SOD、CAT活性均显著减弱, LDH活性显著增强,MDA含量显著增加,CGRP、VEGFR2蛋白表达均显著增强(P＜0.05或P＜0.01).与模型组比较,尼莫地平组和TIL中、高剂量组大鼠神经功能缺损评分均显著降低(P＜0.05或P＜0.01);脑组织梗死体积百分比均显著降低(P＜0.05或P＜0.01);脑组织上述病理改变均明显减轻;脑组织中SOD、CAT活性均显著增强,LDH活性均显著减弱,MDA含量均显著减少, CGRP、VEGFR2蛋白表达均显著增强(P＜0.05或P＜0.01).结论:TIL对脑缺血再灌注损伤模型大鼠脑组织具有一定保护作用,其机制可能与上调CGRP和VEGFR2表达有关.

目的 筛选细胞穿膜肽(transcription activator,TAT)和聚乙二醇(polyethylene glycols,PEG)双修饰田蓟苷复合磷脂脂质体(TAT&PEG tilianin CPL,T&PTCPL)的最佳制备工艺,并考察其对心肌细胞H9C2的保护作用.方法 采用薄膜分散-超声法制备T&PTCPL,利用3因素3水平的Box-Behnken设计,分别以总磷脂与田蓟苷质量比(X1)、DSPE-PEG2000-TAT的浓度(X2)和水化体积(X3)为考察对象,包封率(y1)、粒径(y2)和多分散系数(PDI,y3)为主要评价指标筛选T&PTCPL最佳配方,并以Na2S2O4建立H9C2细胞缺氧/复氧损伤模型,以超氧化物歧化酶(SOD)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)、丙二醛(MDA)和乳酸脱氢酶(LDH)为指标,考察T&PTCPL对细胞缺氧/复氧损伤的影响,同时,考察其体外释放率(动态透析法)及人结肠癌Caco-2细胞对田蓟苷原料药和T&PTCPL的吸收情况.结果 T&PT℃PL的最佳组合为X1=20,X2=1.7％,X3=3.2 mL;包封率为(86.62±2.51)％,粒径为(149.7±8.2) nm,PDI为0.15±0.05.在体外细胞实验中,与模型组比较,原料药组及T&PTCPL组能显著提高SOD活性,减少MDA的含量及抑制LDH和CK-MB的释放(P＜0.05),并且T&PTCPL的效果优于原料药.同时,T&PT℃PL在48 h基本释放完全,累积释放率88.65％,Caco-2细胞对T&PTCPL的吸收效果较佳.结论 Box-Behnken实验设计法用于T&PT℃PL的优化筛选是可行的,数学模型的预测值与实验观察值相符,并且T&PTCPL在体外释放中表现出较好的缓释效果,能促进田蓟苷在Caco-2细胞中的吸收,同时,提示T&PTCPL具有保护心肌缺血再灌注损伤作用.