目的 建立α1A-肾上腺素能受体(α1A-AR)与增强型绿色荧光蛋白(EGFP)标记的活化T细胞核因子2(NFAT2)稳定共表达细胞.方法 ① 将pcDNA3.1-α1A-AR-3×FLAG重组质粒转染至U2OS-EGFP-NFAT2细胞,经潮霉素B(Hygro-B)200 mg·L-1 压力筛选后加入α1A-AR激动剂去甲肾上腺素(NE,10 μmol·L-1)孵育30 min,通过高内涵筛选系统检测细胞核内绿色荧光强度,验证EGFP-NFAT2 核转位,筛选得到稳定表达α1A-AR的U2OS-EGFP-NFAT2-α1A-AR细胞.②采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)和Western印迹法检测该细胞和对照细胞U2OS-EGFP-NFAT2中α1A-AR mRNA和蛋白的表达水平.③将U2OS-EGFP-NFAT2-α1A-AR细胞接种于96孔板,分别加入NE(10-8～10-5 mol·L-1)或α2-AR激动剂右美托咪定(DMED,10-8.8～10-5 mol·L-1)孵育30 min,通过高内涵筛选系统检测EGFP-NFAT2 核转位.④将U2OS-EGFP-NFAT2-α1A-AR细胞分为溶剂对照组、α1-AR拮抗剂萘派地尔(1 μmol·L-1)组、NE(1 μmol·L-1)组、萘派地尔+NE(各1 μmol·L-1共孵育)组、α2-AR拮抗剂阿替美唑(0.1 μmol·L-1)组、DMED(0.1 μmol·L-1)组、阿替美唑+DMED(各0.1 μmol·L-1 共孵育)组和萘派地尔+DMED(萘派地尔1 μmol·L-1 与 DMED 0.1 μmol·L-1共孵育)组,药物孵育时间均为30 min,通过高内涵筛选系统检测EGFP-NFAT2核转位,验证该细胞α1A-AR功能的特异性.结果 ①Hygro-B压力筛选得到58株U2OS-EGFP-NFAT2-α1A-AR细胞,NE 10 μmol·L-1孵育后,其中50号细胞核内绿色荧光强度最强,故选定其为稳定共表达α1A-AR和EGFP-NFAT2的U2OS-EGFP-NFAT2-α1A-AR细胞.②Western印迹法结果显示,U2OS-EGFP-NFAT2-α1A-AR细胞可明显表达α1A-AR蛋白,而对照细胞U2OS-EGFP-NFAT2中未见α1A-AR蛋白表达.RT-qPCR结果显示,该细胞在传代5～20代内α1A-AR mRNA均稳定表达,其表达水平为对照细胞的500～800倍.③NE或DMED使U2OS-EGFP-NFAT2-α1A-AR细胞中EGFP-NFAT2核转位明显增加,半数有效浓度(EC50)分别为5.94×10-7和6.15×10-8 mol·L-1.④与溶剂对照组和萘派地尔组比较,NE组U2OS-EGFP-NFAT2-α1A-AR细胞EGFP-NFAT2核转位明显增强(P<0.01),而萘派地尔+NE组EGFP-NFAT2核转位较NE组明显减弱(P<0.01).与溶剂对照组和阿替美唑组比较,DMED组EGFP-NFAT2核转位明显增强(P<0.01),阿替美唑+DMED组EGFP-NFAT2核转位与DMED组比较无明显差别,而萘派地尔+DMED组EGFP-NFAT2核转位较DMED组明显减弱(P<0.01).结论 成功构建稳定共表达α1A-AR和EGFP-NFAT2的U2OS-EGFP-NFAT2-α1A-AR细胞,可用于靶向α1A-AR化合物筛选和受体分子机制研究.

目的:评价右美托咪定对机械通气相关性肺损伤(VILI)大鼠细胞外信号调节激酶(ERK)/钠钾ATP酶(Na ＋-K ＋-ATPase)信号通路的影响。 方法:清洁级健康雄性SD大鼠48只，体重270～320 g，4～5月龄，采用随机数字表法分为4组( n＝12)：对照组(C组)、VILI组(V组) 、右美托咪定组(D组)和右美托咪定＋育亨宾(α 2肾上腺素能受体阻断剂)组(DY组) 。C组不行机械通气，自主呼吸空气4 h；V组机械通气(通气频率40次/min，V T 40 ml/kg，I∶E 1∶1，PEEP 0，FiO 2 21%)4 h；D组机械通气前20 min静脉输注右美托咪定5.0 μg/kg，机械通气期间以5.0 μg·kg -1· h -1的速率静脉输注，DY组给予右美托咪定前10 min时静脉注射育亨宾0.1 mg/kg，其余处理同D组。机械通气4 h时，取血标本和肺组织，测定肺湿/干重(W/D)比值与肺通透指数(LPI)，观察肺组织病理学结果，测定肺泡内液体清除率(AFC)。采用Western blot法检测肺组织ERK、磷酸化ERK(p-ERK)、Na ＋-K ＋-ATPase的表达水平。 结果:与C组比较，V组与DY组肺组织LPI和W/D比值升高，AFC降低，p-ERK表达上调，Na ＋-K ＋-ATPase表达下调( P<0.05) ，D组上述指标差异无统计学意义( P>0.05)；与V组比较，D组肺组织LPI和W/D比值降低，AFC升高，p-ERK表达下调，Na ＋-K ＋-ATPase表达上调( P<0.05)，肺组织病理学损伤减轻，DY组上述指标差异无统计学意义( P>0.05)；与D组比较，DY组肺组织LPI和W/D比值升高，AFC降低，p-ERK表达上调，Na ＋-K ＋-ATPase表达下调( P<0.05)，肺组织病理学损伤加重。 结论:右美托咪定减轻大鼠VILI的机制可能与激动α 2肾上腺素能受体，抑制ERK/Na ＋-K ＋-ATPase信号通路有关。

目的:总结左冠状动脉起源于肺动脉(ALCAPA)术后心功能的支持方法及变化特点，分析术后早期死亡的危险因素和临床转归。方法:回顾性分析2005年1月至2017年12月上海儿童医学中心收治的108例ALCAPA患儿的临床资料，按照手术时年龄分为<1岁组(65例)和>1岁组(43例)。采用左心室射血分数(LVEF)、左心室舒张期末期直径(LVEDD)Z值描述术后心功能变化情况；总结术后血管活性药物的选择和使用要点，采用血管药物评分(VIS)反映术后心功能对血管活性药物的依赖程度，间接反映心功能状况；总结术后启用和终止机械辅助以及停止机械通气的指征。结果:ALCAPA术后早期心功能虽较术前有所改善，但仍未能恢复至正常范围。术后第5天两组LVEF分别为0.42、0.45，LVEDD的Z值分别为3.47、2.74。术后血管活性药物的选择以同时兴奋α、β受体的肾上腺素和去甲肾上腺素为主。VIS评分较高。机械循环辅助18例。全组死亡12例(11%)。多因素 logistic回归分析显示手术时低年龄和低LVEF水平是术后早期死亡的危险因素。 结论:ALCAPA术后早期心功能仍处于较低水平，依赖大剂量的血管活性药物和必要的机械辅助。我们推荐撤离呼吸机和机械辅助的指征分别为LVEF>0.40和LVEF>0.35，并结合其他临床指标。术前低年龄和低LVEF水平是影响术后死亡的危险因素。

目的:观察电针刺激三阴交穴对压力性尿失禁(SUI)大鼠控尿能力及脊髓N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)受体、α 2肾上腺素能受体表达的影响。 方法:采用随机数字表法将48只成年雌性SD大鼠分为3组，其中假手术组大鼠阴道内置入未注水球囊尿管，模型组大鼠行阴道内球囊扩张制作SUI模型，电针组大鼠待阴道内球囊扩张建模成功后，对其三阴交穴给予电针刺激。经1周干预后，3组大鼠均进行尿流动力学检查及腹压漏尿点压(LPP)测定，并同步进行尿道外括约肌肌电描记。另外本研究还分别采用PCR及Western blot方法比较各组大鼠脊髓L 6-S 1节段NMDA受体及α 2受体表达变化。 结果:3组大鼠各项尿流动力学指标组间差异均无统计学意义( P>0.05)。与假手术组比较，模型组大鼠腹压LPP、尿道外括约肌肌电频率及振幅均显著降低( P<0.05)。与模型组比较，电针组大鼠腹压LPP显著提高( P<0.05)，尿道外括约肌肌电频率及振幅均显著增加( P<0.05)。与模型组比较，电针组大鼠L 6-S 1脊髓节段NMDA、α 2受体mRNA及蛋白表达均明显上调( P<0.05)。 结论:阴道球囊扩张是制作SUI大鼠模型的有效方法；电针刺激三阴交穴在改善SUI模型大鼠控尿能力同时，还不会影响大鼠正常排尿功能，其治疗机制可能与上调脊髓中NMDA及α 2受体水平、增强尿道外括约肌活性有关。

目的:探讨丘脑电刺激对脑外伤后昏迷大鼠的促醒作用及其可能机制。方法:选取健康成年Wistar种系大鼠45只，随机分为空白对照组、假刺激组和刺激组，每组15只，观察其行为学变化，并通过免疫荧光和Western blot技术检测各组大鼠前额叶皮质组织中去甲肾上腺素α1受体(α1R)的含量。结果:刺激组中15只大鼠全部出现翻正反射，假刺激组仅8只大鼠出现翻正反射；将各组大鼠前额叶皮质区α1R含量进行比较，发现刺激组α1R含量水平显著高于假刺激组( P<0.05)。 结论:丘脑电刺激可改善脑外伤后昏迷大鼠的意识状态水平，对促进脑外伤后昏迷大鼠觉醒有积极作用，其机制可能与前额叶皮质去甲肾上腺素α1R表达水平上调有关。

目的:观察α1肾上腺素受体(α1AR)阻滞剂能否降低和拮抗α1AR激活导致的大鼠门静脉高压，为临床治疗门静脉高压提供新思路。方法:α1AR激动剂选用去氧肾上腺素，α1AR阻滞剂选用阿呋唑嗪，采用门静脉穿刺注射给药并测量门静脉压力。将32只雄性Sprague-Dawley大鼠按随机数字表法分为4组。所有大鼠均在给药前测量基础门静脉压力；对照组大鼠按体重经门静脉注射0.9%氯化钠溶液(1 L/g)，门静脉高压模型组大鼠经门静脉注射去氧肾上腺素(1.5 μg/g)，以上两组在给药5和10 min后分别测量门静脉压力；阿呋唑嗪治疗组大鼠经门静脉予去氧肾上腺素(1.5 μg/g)5 min后测压，再予阿呋唑嗪(0.9 μg/g)，在5 min后再次测压；阿呋唑嗪预防组大鼠经门静脉给予阿呋唑嗪(0.9 μg/g)预处理1 min后测压，再予去氧肾上腺素(1.5 μg/g)，在1、5和10 min后测压。采用单因素方差分析、Dunnett- t检验进行统计学分析。 结果:对照组、门静脉高压模型组、阿呋唑嗪治疗组和阿呋唑嗪预防组分别有4、6、8、5只大鼠门静脉穿刺成功。门静脉高压模型组大鼠给药5和10 min后门静脉压力分别为(18.045±7.636)、(15.515±5.440) mmHg(1 mmHg＝0.133 kPa) ，均高于给药前[(8.452±2.830) mmHg]，差异均有统计学意义( t＝2.89、2.82，均 P<0.05)。阿呋唑嗪治疗组大鼠在注射阿呋唑嗪5 min后，门静脉压力为(10.088±3.743) mmHg，低于本组注射去氧肾上腺素5 min后[(16.146±4.324) mmHg ]和门静脉高压模型组注射去氧肾上腺素10 min后，差异均有统计学意义( t＝3.00、2.22，均 P<0.05)。阿呋唑嗪预防组大鼠给药前，注射阿呋唑嗪后，注射去氧肾上腺素后各时间点的门静脉压力比较差异均无统计学意义(均 P>0.05)。 结论:α1AR是参与门静脉压力调节的重要因素，其阻滞剂能降低和拮抗α1AR激活导致的门静脉高压，对防治肝硬化门静脉高压进展具有重要意义。

目的:评价右美托咪定减轻七氟烷诱发新生大鼠中枢神经毒性的机制与脑红蛋白(Ngb)的关系。方法:健康雄性SD大鼠84只，7日龄，体重12～16 g，采用随机数字表法分为4组( n＝21)：对照组(C组)、七氟烷组(S组)、七氟烷+右美托咪定组(SD组)和七氟烷+右美托咪定+育亨宾组(SDY组)。七氟烷麻醉方法：吸入8%七氟烷麻醉诱导，3%七氟烷麻醉维持4 h。于麻醉结束时，SD组腹腔注射右美托咪定50 μg/kg，SDY组腹腔注射右美托咪定50 μg/kg后立即腹腔注射α 2肾上腺素能受体拮抗剂育亨宾0.5 mg/kg。每组随机选取6只大鼠，于麻醉结束后24 h时处死，取脑组织，采用HE染色法检测海马CA1区病理学结果，采用免疫荧光染色法检测海马区Ngb的表达，采用Western blot法检测Ngb、细胞色素c(Cyt c)和caspase-3表达水平；剩余大鼠在28日龄时行Morris水迷宫实验。 结果:与C组比较，S组Ngb、Cyt c和caspase-3表达上调，逃避潜伏期延长( P<0.05)，海马CA1区病理学改变加重，Ngb荧光强度增强；与S组比较，SD组Ngb表达上调，Cyt c和caspase-3表达下调，逃避潜伏期缩短( P<0.05)，海马CA1区病理学改变减轻，Ngb荧光强度增强；与SD组比较，SDY组Ngb表达下调，Cyt c和caspase-3表达上调，逃避潜伏期延长( P<0.05)，海马CA1区病理学改变加重，Ngb荧光强度减弱。 结论:右美托咪定减轻七氟烷诱发新生大鼠中枢神经毒性的机制可能与激活α 2肾上腺素能受体，上调Ngb表达有关。

目的:评价颈上神经节阻滞对心肌缺血再灌注大鼠心功能及NOD样受体蛋白3(NLRP3)信号通路的影响。方法:SPF级健康雄性SD大鼠60只，体质量250~300 g，2~3月龄，采用随机数字表法分为4组( n＝15)：假手术组(Sham组)、心肌缺血再灌注组(IR组)、心肌缺血再灌注+生理盐水组(IR+NS组)和心肌缺血再灌注+颈上神经节阻滞组(IR+SCGB组)。采用结扎冠状动脉左前降支45 min后恢复血流的方法制备心肌缺血再灌注损伤模型。IR+SCGB组于再灌注前10 min开始行颈上神经节阻滞(0.25%罗哌卡因0.1 ml)，连续2周，1次/d。IR+NS组以等容量0.9%氯化钠注射液替代罗哌卡因。于再灌注24 h、14 d时采集血样，采用ELISA法检测血清去甲肾上腺素(NE)、肌钙蛋白T(TnT)、TNF-α、IL-18、IL-1β浓度；于缺血前、再灌注14 d时行超声心动图检查，测量左室短轴缩短率(FS)、射血分数(EF)和心输出量(CO)。再灌注14 d时处死大鼠，取心脏，采用ELISA法检测梗死区心肌组织NE含量，Masson染色法检测心肌纤维化面积百分比，免疫组化法进行梗死区心肌组织M1型巨噬细胞标志物CD68 +细胞计数，Western blot法检测心肌组织NLRP3和成孔蛋白D(GSDMD)的表达。 结果:与Sham组相比，IR组血清TnT、TNF-α、IL-18、IL-1β浓度、心肌纤维化面积百分比、血清及心肌组织NE水平升高，心肌组织NLRP3和GSDMD表达上调，CD68 +细胞计数升高，EF、CO和FS降低( P<0.05)；与IR组相比，IR+SCGB组血清TnT、TNF-α、IL-18、IL-1β浓度、心肌纤维化面积百分比、血清及心肌组织NE水平降低，心肌组织NLRP3和GSDMD表达下调，CD68 +细胞计数降低，EF、CO和FS升高( P<0.05)，IR+NS组上述指标差异无统计学意义( P>0.05)。 结论:颈上神经节阻滞可改善心肌缺血再灌注大鼠心功能，机制可能与抑制NLRP3信号通路有关。

目的:调查北京市东城区基层医疗卫生机构降压药物的使用情况并分析其合理性。方法:该研究为横断面调查。对2019年1月1日至12月31日北京市东城区8家社区卫生服务中心的降压药物处方进行分析。以解剖学、治疗学及化学分类系统（ATC）编码判断药物类别。使用ATC信息对包含降压药物的数据进行筛选，并按ATC类别分组统计数量和占比。由通用名判断药物品种。依据处方中的诊断信息筛选出包含高血压西医诊断的处方。该研究中高血压合并症包括糖尿病、慢性肾脏病、冠心病、心力衰竭、心房颤动、卒中和血脂异常7种。处方合理性分析包括联合用药合理性、药物用量合理性和药物价格合理性。采用约定日剂量（DDD）法来分析药物用量合理性。将药物利用指数（DUI）作为估计用药合理性的定量指标，DUI >1判定为用药过量。药物价格合理性基于药品的价格和是否为“4+7”方案中的药物进行判断。 结果:共筛选出658 140张包含高血压诊断及降压药物的处方，销售总金额为9 658.11万元人民币，涉及7类、60种常用降压药物。钙通道阻滞剂（CCB）在各合并症高血压患者的处方中开具的数量均为最多，α-肾上腺素受体拮抗剂最少。合并心力衰竭的高血压患者处方中利尿剂的占比为21.17%（505/2 385），远高于其他合并症的患者（ P均<0.05）。合并血脂异常的高血压患者处方中利尿剂的占比则低于其他合并症的患者（ P均<0.05），而β-受体阻滞剂（BB）或血管紧张素Ⅱ受体阻滞剂（ARB）更易被选择［BB为59 348（21.08%），ARB为51 356（18.24%）］。合并慢性肾脏病的高血压患者处方中BB的占比低于其他合并症的患者（ P均<0.05），但ARB和复方制剂的占比均较高（ P均<0.05）。合并冠心病的高血压患者处方中BB的占比高于其他合并症（ P均<0.05）。合并心房颤动或卒中的高血压患者处方中CCB的占比较高（ P均<0.05）。单一降压药物处方数占比最高，为61.19%（402 745/658 140）。联合用药处方中二联用药处方占比最高，为72.19%（184 392/255 395）。在二联用药处方中，以CCB为基础的组合处方数最多，为122 350张（66.36%）。在三联用药处方中，以ARB为基础的组合处方数最多，为48 915张（89.50%），其次为CCB［44 732（81.85%）］。不合理联合用药的处方数为2 174张（0.33%）。60种降压药物中48种DUI>1。处方中共计出现7种“4+7”方案中的降压药物，分别为氨氯地平、厄贝沙坦、氯沙坦、依那普利、福辛普利、赖诺普利和厄贝沙坦氢氯噻嗪，总处方数为109 227张（16.60%），占所有可能“4+7”方案降压药物的40.92%（109 227/266 993）。 结论:北京市东城区基层医疗卫生机构开具的降压药物种类众多、药物选择基本合理，但降压药物联合应用方案欠合理的问题较为突出，且存在用药过量以及“4+7”方案未完全落实的情况。

目的:对比坦索罗辛及特拉唑嗪用于上尿路结石体外碎石后石街保守排石治疗的有效性及安全性，为临床安全合理用药提供依据。方法:回顾性分析本院2017年1月至2017年12月上尿路结石行体外碎石治疗后发生输尿管下段石街患者共77例，依所服用α 1受体阻滞剂种类分为坦索罗辛组42例及特拉唑嗪组35例，对比分析两组排石疗效以及心血管不良反应发生情况。 结果:坦索罗辛组结石排出率为80.95%(34/42)，显著高于特拉唑嗪组的60.00%(21/35)( P<0.05)；坦索罗辛组平均肾绞痛发作频次为0.50次，显著低于特拉唑嗪组为2.11次( P<0.05)；坦索罗辛组平均肾绞痛最长持续时间为0.71 h，显著低于特拉唑嗪组的1.78 h( P<0.05)；坦索罗辛组体位性低血压发生率为9.52%(4/42)、心悸发生率为11.90%(5/42)、晕厥发生率为0.00%，均显著低于特拉唑嗪组的31.43%(11/35)、34.29%(12/35)、11.43%(4/35)( P<0.05)。 结论:坦索罗辛用于输尿管结石体外冲击波碎石后石街的保守排石疗效显著优于特拉唑嗪，同时具有较低的心血管系统不良反应发生风险，值得临床推广应用。