αB-晶状体蛋白(CRYAB)具有分子伴侣的作用，可以维持血管内皮生长因子水平，促进肿瘤新生血管的形成。近年来研究发现CRYAB在乳腺癌、肺癌、结直肠癌、膀胱癌等多种肿瘤中异常表达，其可通过促进肿瘤细胞失巢凋亡抵抗，调节基质金属蛋白酶和上皮钙黏着蛋白的分泌以及参与上皮间质转化过程，促进肿瘤的迁移和侵袭。CRYAB在肿瘤细胞中的异常表达与肿瘤分期、淋巴结转移、总生存期以及不良预后显著相关，可作为一种新的肿瘤标志物。

目的:探讨细胞外囊泡(EV)介导的微小RNA(miR)-491递送抑制骨肉瘤肺转移。方法:细胞水平检测miR-491靶向降解胫骨来源的骨肉瘤细胞中αB-晶状体蛋白(CRYAB)的信使RNA(mRNA)和蛋白，分为6组，miR-NC组、miR-491组、Vector＋miR-NC组、Vector＋miR-491组、CRYAB＋miR-NC组、CRYAB＋miR-491组。收集我院接受骨折治疗手术的男性患者皮下脂肪组织并分离脂肪组织来源的间充质间质细胞(AD-MSC)，在AD-MSC中过表达miR-491或阴性对照(NC)后收集细胞外囊泡miR-491-EV和NC-EV。随后建立小鼠骨肉瘤肺转移模型并分为两组：NC-EV组和miR-491-EV组，检测肺转移结节数和肺重量。通过 t检验和方差分析检测不同组间差异。 结果:miR-491组的CRYAB的mRNA和蛋白水平低于miR-NC组(1.00±0.03比0.19±0.02， t＝38.912， P<0.01)。Vector＋miR-491组的侵袭能力和迁移能力低于Vector＋miR-NC组(1.00±0.08比0.31±0.03， t＝31.284， P<0.01；1.00±0.08比0.28±0.03， t＝32.641， P<0.01)；CRYAB＋miR-NC组的侵袭能力和迁移能力高于Vector＋miR-NC组(1.00±0.08比3.22±0.18， t＝43.650， P<0.01；1.00±0.08比1.88±0.23， t＝14.000， P<0.01)。miR-491-EV组的鼠骨肉瘤转移性肺结节的数量(6.03±1.21比1.02±0.23， F＝154.412， P<0.05)和肺重量(0.68±0.09比0.47±0.04， F＝43.254， P<0.05)低于NC-EV组。 结论:miR-491能够通过下调CRYAB在骨肉瘤中的表达作为肿瘤抑制因子。

患者，男，23岁，2018年10月14日因双眼视物模糊3年于外院就诊，双眼裸眼视力0.5，最佳矫正视力右眼－0.25 DS/－0.50 DC×5＝0.6，左眼矫正无助；眼压右眼13 mmHg(1 mmHg＝0.133 kPa)，左眼12 mmHg；考虑诊断为"双眼视神经病变"。图形视觉诱发电位(pattern visual evoked potential，P-VEP)检查示右眼正常，左眼异常。头颅MRI检查示左侧额叶少许脑缺血灶，双眼眼眶未见异常。未检测到线粒体DNA(mitochondrial DNA，mtDNA)3个原发突变位点mtDNA11778、mtDNA14484和mtDNA3460，初步排除Leber遗传性视神经病变及压迫性视神经病变。2019年6月29日患者于广东省人民医院眼科就诊，眼前节照相示双眼晶状体前圆锥样改变(图1A，B)；眼前节光相干断层扫描(optical coherence tomography，OCT)检查证实双眼晶状体前圆锥(图1C，D)。角膜地形图检查示双眼角膜偏薄，右眼瞳孔中心、顶点和最薄点厚度分别为471、470和466 μm，左眼分别为471、471和466 μm，最薄点均在颞下方，角膜前表面和后表面较规则，两子午线曲率差异在正常范围(图1E，F)。右眼角膜内皮细胞计数和六边形细胞比例分别为2 683.7个/mm 2和61%，左眼分别为2 552.7个/mm 2和70%。彩色眼底照相可见双眼黄斑周围点状色素改变(图2A，B)；OCT血流成像(OCT angiography，OCTA)示双眼黄斑无血管区(foveal avascular zone，FAZ)不规则；右眼黄斑旁鼻侧、颞侧、上方和下方视网膜浅层毛细血管密度分别为51.5%、46.3%、46.0%和44.1%，左眼分别为53.9%、51.3%、51.2%和50.6%；右眼鼻侧、颞侧、上方和下方黄斑旁视网膜厚度分别为321、242、275和253 μm，左眼分别为291、238、268和247 μm。双眼黄斑颞侧视网膜明显变薄，主要累及内层(图2C，D)。听力检测：右耳音平均听阈54 dB，骨导纯音平均听阈52 dB，左耳音平均听阈56 dB，骨导纯音平均听阈54 dB，提示双侧感音神经性耳聋。结合患者病史经查阅文献后初步考虑为Alport综合征。2019年7月11日尿常规检测显示红细胞148个/μl、血尿(++)、蛋白尿(+)；尿渗透压+尿位相结果示尿红细胞总数明显升高，为49 500个/ml；尿蛋白定量为0.8 g/24 h。2019年7月25日于肾内科行右侧肾脏穿刺活检术，苏木精－伊红染色和特殊染色三项(PAS、PASM和Masson染色)显示部分肾小球球性硬化，肾小球系膜细胞和基质轻度增生伴局灶内皮细胞增生，基底膜略增厚，毛细血管襻基底膜染色不均一，少数肾小球球囊周纤维化，其内毛细血管襻缺血皱缩，肾小管上皮细胞空泡及颗粒变性，多灶状及片状萎缩，肾间质可见较多泡沫样细胞，多灶状及片状炎症细胞浸润伴纤维化，小动脉管壁增厚，管腔狭窄；刚果红、氧化刚果红、油红O染色均呈阴性(图3A~D)；免疫荧光未见免疫复合物沉积；α1阳性对照正常；α3肾小球基底膜、肾小管基底膜表达缺失；α5肾小球包曼氏囊表达节段性缺失，肾小球基底膜、肾小管基底膜表达缺失(图3E~G)；电子显微镜检查结果示，肾小球基底膜厚薄不一，基底膜致密层增厚，部分呈撕裂状和蛛网状，足突弥漫融合，未见电子致密物沉积(图3H~J)。明确诊断：Alport综合征。患者尿蛋白/肌酐比明显上升，尿白蛋白增加，经过控制血压(苯磺酸氨氯地平片10 mg，每天1片)和护肾治疗(复方α-酮酸片，每次4片和尿毒清颗粒，每次5 g，均为每天3次)后尿蛋白/肌酐比和尿白蛋白均有下降。目前继续控制血压和护肾治疗，定期门诊复诊。

目的:研究吲哚菁绿(ICG)对人晶状体上皮细胞(HLECs)生物学行为和转分化的抑制作用及其机制。方法:将HLECs细胞系分为空白对照组、5%葡萄糖溶液(GS)组和0.5%、1.5%、2.5% ICG组，分别用平衡盐溶液、5% GS以及0.5%、1.5%和2.5%的ICG溶液处理3 min，然后在新鲜培养基中孵育24 h。采用流式细胞术检测HLECs凋亡水平；采用Western blot法检测HLECs凋亡相关蛋白Bcl-2相关X蛋白(Bax)、B细胞淋巴瘤因子2(Bcl-2)、半胱氨酸蛋白酶3(caspase-3)和caspase-9表达水平；采用细胞计数试剂盒8(CCK-8)和5-溴-2-脱氧尿嘧啶(EdU)法检测HLECs增生过程；采用细胞划痕实验检测HLECs迁移能力；采用Transwell法检测HLECs迁移和侵袭过程。采用Western blot法检测HLECs转分化相关蛋白α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)、纤维连接蛋白(FN)和波形纤维蛋白(vimentin)表达水平。结果:空白对照组、5% GS组、0.5% ICG组、1.5% ICG组和2.5% ICG组细胞凋亡率分别为(4.35±0.60)%、(4.63±0.19)%、(8.17±0.69)%、(13.90±0.33)%和(23.08±1.12)%，总体比较差异有统计学意义( F＝412.74， P<0.05)，其中0.5% ICG组、1.5% ICG组和2.5% ICG组细胞凋亡率明显高于空白对照组和5% GS组，差异均有统计学意义(均 P<0.05)。0.5% ICG组、1.5% ICG组、2.5% ICG组caspase-3、caspase-9和Bax蛋白相对表达量明显高于空白对照组和5% GS组，1.5% ICG组、2.5% ICG组Bcl-2蛋白相对表达量较空白对照组和5% GS组降低，差异均有统计学意义(均 P<0.05)。0.5% ICG组、1.5% ICG组和2.5% ICG组EdU阳性细胞率明显低于空白对照组和5% GS组，差异均有统计学意义(均 P<0.05)。0.5% ICG组、1.5% ICG组、2.5% ICG组细胞生存率明显低于空白对照组和5% GS组，差异均有统计学意义(均 P<0.05)。细胞划痕实验结果显示，0.5% ICG组、1.5% ICG组、2.5% ICG组细胞迁移率明显低于空白对照组和5% GS组，差异均有统计学意义(均 P<0.05)。Transwell实验结果显示，0.5% ICG组、1.5% ICG组、2.5% ICG组细胞迁移数和侵袭细胞数明显少于空白对照组和5% GS组，差异均有统计学意义(均 P<0.05)。0.5% ICG组、1.5% ICG组和2.5% ICG组α-SMA、N-cadherin和FN蛋白相对表达量明显低于空白对照组和5% GS组，1.5% ICG组和2.5% ICG组vimentin蛋白相对表达量较空白对照组和5% GS组降低，差异均有统计学意义(均 P<0.05)。 结论:ICG可促进HLECs凋亡，抑制其增生、迁移、侵袭和转分化，并呈浓度依赖性。

目的：:探究早期生长反应基因1（ EGR1）对小鼠白内障术后晶状体上皮细胞（LECs）炎症反应以及上皮-间质转化（EMT）的早期调控作用。 方法：:实验研究。选取10～16周龄EGR1敲除小鼠（ EGR1-/-）和野生型小鼠（WT）行白内障手术造模，于造模后0 h，3 h，24 h，48 h，72 h，4 d和5 d处死相应小鼠并取眼球做冰冻切片。免疫荧光染色观察晶状体囊袋中EGR1蛋白、CD11b、LCN2、CXCL1和αSMA的表达情况，Image J定量荧光强度。 EGR1-/-小鼠和WT小鼠组间比较采用配对 t检验，组内不同时间点比较采用单因素方差分析。 结果：:WT小鼠白内障术后LECs中EGR1蛋白表达上调、炎症反应指标CD11b、LCN2、CXCL1表达升高。 EGR1-/-小鼠白内障术后LECs中EGR1蛋白表达无变化，CD11b、LCN2、CXCL1表达量明显小于WT小鼠（均 P<0.01）。此外， EGR1-/-小鼠白内障术后EMT特征性标记物αSMA的表达量、囊袋内有形细胞数量亦明显小于WT小鼠（72 h、4 d和5 d，均 P<0.05）。 结论：:白内障手术可早期激活LECs中的 EGR1，激活的 EGR1参与调控LECs的炎症反应和EMT，敲除 EGR1可以减轻上述炎症反应和EMT。

目的:探讨沉默人类同源配对盒基因6(Pax6)对人晶状体上皮细胞(LECs)的生物学行为和上皮-间质转化(EMT)的作用。方法:将SRA01/04人LECs分为小干扰RNA-Pax6(siRNA-Pax6)组和siRNA阴性对照(siRNA-NC)组，siRNA-Pax6组细胞转染siRNA-Pax6，siRNA-NC组细胞转染无序siRNA。转染后24、48、72 h采用细胞计数试剂盒8法检测细胞存活率；转染后48 h，采用流式细胞术检测细胞凋亡比例和不同细胞周期细胞比例；转染后24 h，采用细胞划痕实验检测细胞迁移率；转染后48 h，采用实时荧光定量PCR检测细胞内Pax6、α-晶状体蛋白A(CRYAA)、α-晶状体蛋白B(CRYAB)、转录因子Sox2及EMT相关分子平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、钙黏附蛋白E(E-cadherin)mRNA相对表达量，采用Western blot法检测各组细胞中Pax6蛋白相对表达量。结果:2个组转染后不同时间点细胞存活率总体比较差异均有统计学意义( F分组＝4.776， P<0.05； F时间＝13.535， P<0.05)，其中转染后48 h和72 h，siRNA-Pax6组细胞存活率均明显低于siRNA-NC组，差异均有统计学意义(均 P<0.05)。与siRNA-NC组比较，siRNA-Pax6组G 0/G 1期细胞比例明显增加，S期细胞比例明显减少，差异均有统计学意义( t＝9.971、-5.063，均 P<0.05)。siRNA-Pax6组细胞迁移率为(19.73±6.07)%，低于siRNA-NC组的(70.56±2.97)%，差异有统计学意义( t＝-7.245， P<0.05)。siRNA-Pax6组细胞中Sox2和α-SMA mRNA相对表达量低于siRNA-NC组，E-cadherin mRNA相对表达量高于siRNA-NC组，差异均有统计学意义( t＝-23.254、-5.294、6.062，均 P<0.01)。siRNA-Pax6组细胞中CRYAA和CRYAB mRNA相对表达量明显高于siRNA-NC组，差异均有统计学意义( t＝5.521、8.270，均 P<0.01)。siRNA-Pax6组细胞中Pax6 mRNA相对表达量为0.27±0.01，低于siRNA-NC组的1.00±0.05，差异有统计学意义( t＝-14.456， P<0.001)；siRNA-Pax6组细胞中Pax6蛋白相对表达量为0.24±0.05，低于siRNA-NC组的1.14±0.10，差异有统计学意义( t＝-4.458， P<0.001)。 结论:沉默Pax6可抑制人LECs的增生及EMT过程，维持人LECs内正常晶状体蛋白的表达。

目的:探究甘草甜素(GL)调节多巴胺D2受体(Drd2)/α-B晶状体蛋白(Cryab)/核转录因子-κB(NF-κB)信号通路对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤(HIBD)的治疗作用.方法:从60只产后第7d的新生大鼠中选取12只为假手术组,其余新生大鼠均采用Rice-Vannucci法建立HIBD新生大鼠模型.将造模成功的36只新生大鼠采用随机数字表法分为HIBD组、GL组、氟哌啶醇组(Drd2抑制剂),每组12只.对各组新生大鼠进行神经功能缺损评分及脑含水量测定;苏木素-伊红染色法(HE)及尼氏(Nissl)染色观察海马组织病理改变;脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法(TUNEL)染色检测神经细胞凋亡;酶联免疫吸附法(ELISA)法检测血清中肿瘤坏死因子(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)水平;免疫印记法(Western blot)检测海马组织中Drd2/Cryab/NF-κB通路蛋白表达.结果:与假手术组比较,HIBD组海马CA1结构模糊不清,神经元排列无序,尼氏小体数量减少,神经功能缺损评分、脑含水量、神经元凋亡率、TNF-α、IL-6、p-NF-κB/NF-κB蛋白表达升高,Drd2、Cryab蛋白表达降低(P＜0.05);与HIBD组比较,GL组神经元排列相对整齐,尼氏小体数量增多,神经功能缺损评分及脑含水量、神经元凋亡率、TNF-α、IL-6、p-NF-κB/NF-κB蛋白表达降低,Drd2、Cryab蛋白表达升高(P＜0.05);与GL组比较,氟哌啶醇组上述指标均显著逆转(P＜0.05).结论:GL可抑制HIBD新生大鼠炎症反应和神经细胞凋亡,减轻HIBD新生大鼠神经损伤,其作用机制可能与激活Drd2/Cryab/NF-κB信号通路有关.

目的 探讨白内障的发病机制是否与人晶状体上皮细胞系B3(HLE-B3)的病理性上皮间充质转化(EMT)有关,并评价柚皮素基于转化生长因子-β2(TGF-β2)介导对白内障晶状体病理性EMT的作用及机制.方法 常规培养HLE-B3细胞,筛选TGF-β2和柚皮素的最佳浓度后,TGF-β2处理HLE-B3细胞诱导EMT,建立白内障体外模型.随机将细胞分为对照组(CG)、TGF-β2组(TGF-β2)、柚皮素组(Nar)、柚皮素+TGF-β2组(Nar+TGF-β2)培养48 h,采用跨孔迁移实验检测细胞侵袭能力,伤口愈合实验测定HLE-B3的迁移能力,细胞计数法检测细胞活性,流式细胞术检测细胞凋亡情况,5-乙炔基-2'-脱氧尿苷(EdU)法测定细胞增殖能力.Western Blot和实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测EMT相关标志物α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、E-钙粘蛋白(E-cadherin)和胞质紧密粘连蛋白1(ZO-1)的表达水平.结果 (1)细胞活性与增殖:与CG组比较,Nar组和Nar+TGF-β2组细胞活性较低(tNar= 16.404,tNar+TGF-β2=16.119,均P=0.000),EdU阳性细胞数较少(tNar=13.918,tNar+TGF-β2=13.473,均P= 0.000),差异有统计学意义.(2)细胞侵袭和迁移:与CG组比较,TGF-β2组细胞侵袭个数较多(t=26.198,P=0.000),细胞迁移率较高(t=11.703,P=0.000);而Nar组细胞侵袭个数较少(t= 23.975,P=0.000),细胞迁移率较低(t=7.198,P=0.000),差异均有统计学意义.(3)细胞凋亡:与CG组比较,TGF-β2组细胞凋亡率较高(t=5.806,P=0.000),Nar组细胞凋亡率较低(t= 3.838,P=0.005),差异均有统计学意义.(4)EMT相关蛋白和mRNA:与CG组比较,TGF-β2组HLE-B3细胞α-SMA蛋白表达较高(t=4.847,P=0.001)、mRNA表达较高(t=8.684,P=0.000),E-cadherin和ZO-1蛋白表达较低(tE-cadherin=5.584,tZO-1=5.251,均P=0.001)、mRNA表达较低(tE-cadherin=5.379,P=0.001;tZO-1=2.365,P=0.045);Nar组α-SMA蛋白表达较低(t=5.144,P= 0.001)、mRNA表达较低(t=3.961,P=0.004),E-cadherin和ZO-1蛋白表达较高(tE-cadherin=6.175,tZO-1=8.383,均P=0.000)、mRNA表达较高(tE-cadherin=5.379,tZO-1=5.125,均P=0.001),差异均有统计学意义.结论 柚皮素能抑制TGF-β2诱导的HLE-B3细胞的增殖、侵袭、迁移、凋亡能力及EMT.

目的 探讨夹竹桃麻素(APO)对糖尿病白内障大鼠的改善作用并分析其可能机制.方法 实验研究.SPF级SD大鼠60 只,随机分为对照组、模型组、APO低剂量组(10 mg/kg)、APO中剂量组(20 mg/kg)、APO高剂量组(40 mg/kg)和阳性组(100 mg/kg二甲双胍).用一次性注射链脲菌素(STZ)法构建糖尿病白内障大鼠模型,建模成功后按组别给予不同药物处理.检测大鼠血糖值并测评晶状体混浊程度;HE染色观察晶状体病理学变化;酶联免疫吸附测定(ELISA)检测白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-1 β(IL-1 β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平;试剂盒检测丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)指标;Western Blot检测高迁移率族蛋白 1(HMGB1)、Toll样受体4(TLR4)和核转录因子-κB(NF-κB)蛋白表达水平.结果 模型组大鼠晶状体混浊,细胞肿胀、破裂、出现空泡,血糖值、MDA、IL-6、IL-1 β、TNF-α、HGMB1、TLR4、NF-κB蛋白表达水平升高,SOD和GSH-Px水平降低;与模型组相比,APO各组及阳性组大鼠晶状体混浊程度降低,晶状体病理症状改善,血糖值、MDA、IL-6、IL-1 β、TNF-α、HGMB1、TLR4、NF-κB蛋白表达水平有所下降,而SOD和GSH-Px水平则上升.结论 APO可能通过抑制HMGB1/TLR4/NF-κB信号通路的激活,改善糖尿病白内障大鼠氧化应激损伤和炎症水平.

目的 探究虎杖苷在白内障大鼠晶状体上皮细胞(LEC)损伤中的作用机制.方法 将50只新生大鼠随机分为对照组、模型组、虎杖苷低剂量组、虎杖苷高剂量组、激活剂组,每组10只,除对照组外,其余各组大鼠通过皮下注射亚硒酸钠建立白内障大鼠模型.第2天虎杖苷低、高剂量组大鼠分别使用1.3 g·L-1和5.0 g·L-1虎杖苷滴眼液滴眼,激活剂组大鼠使用5.0 g·L-1虎杖苷滴眼液滴眼外还需每天灌胃10 mg·kg-1 SRI-011381 盐酸盐,对照组和模型组大鼠使用生理盐水滴眼.裂隙灯生物显微镜检查大鼠晶状体混浊度;HE染色观察大鼠晶状体病理变化;检测大鼠LEC中总超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)水平;流式细胞术检测大鼠LEC凋亡情况;Western blot检测大鼠LEC中转化生长因子-β(TGF-β)、Smad2、Smad3、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)蛋白及其相关蛋白Bax的表达.结果 对照组大鼠晶状体前囊区域结构清晰,LEC与晶状体纤维细胞排列紧密.与对照组相比,模型组大鼠晶状体前囊区域结构紊乱,晶状体纤维细胞变性、肿胀,LEC排列稀疏,晶状体后囊附近发生空泡化,大鼠晶状体混浊度分级、LEC中MDA水平、细胞凋亡率以及TGF-β、Smad2、Smad3、α-SMA、Bax蛋白表达均明显升高(均为P＜0.05),LEC中SOD水平以及Bcl-2蛋白表达均明显降低(均为P＜0.05).与模型组相比,虎杖苷低、高剂量组大鼠晶状体结构明显改善,晶状体混浊度分级、LEC中MDA水平、细胞凋亡率以及TGF-β、Smad2、Smad3、α-SMA、Bax蛋白表达均明显降低(均为P＜0.05),LEC中SOD水平以及Bcl-2蛋白表达均明显升高(均为P＜0.05).与虎杖苷高剂量组相比,激活剂组大鼠晶状体结构损伤明显加重,晶状体混浊度分级、LEC中MDA水平、细胞凋亡率以及TGF-β、Smad2、Smad3、α-SMA、Bax蛋白表达均明显升高(均为P＜0.05),LEC中SOD水平以及Bcl-2蛋白表达均明显降低(均为P＜0.05).结论 虎杖苷可通过抑制TGF-β/Smads信号通路抑制白内障大鼠LEC凋亡和氧化应激,缓解白内障大鼠LEC损伤.