目的:探讨细胞外囊泡(EV)介导的微小RNA(miR)-491递送抑制骨肉瘤肺转移。方法:细胞水平检测miR-491靶向降解胫骨来源的骨肉瘤细胞中αB-晶状体蛋白(CRYAB)的信使RNA(mRNA)和蛋白，分为6组，miR-NC组、miR-491组、Vector＋miR-NC组、Vector＋miR-491组、CRYAB＋miR-NC组、CRYAB＋miR-491组。收集我院接受骨折治疗手术的男性患者皮下脂肪组织并分离脂肪组织来源的间充质间质细胞(AD-MSC)，在AD-MSC中过表达miR-491或阴性对照(NC)后收集细胞外囊泡miR-491-EV和NC-EV。随后建立小鼠骨肉瘤肺转移模型并分为两组：NC-EV组和miR-491-EV组，检测肺转移结节数和肺重量。通过 t检验和方差分析检测不同组间差异。 结果:miR-491组的CRYAB的mRNA和蛋白水平低于miR-NC组(1.00±0.03比0.19±0.02， t＝38.912， P<0.01)。Vector＋miR-491组的侵袭能力和迁移能力低于Vector＋miR-NC组(1.00±0.08比0.31±0.03， t＝31.284， P<0.01；1.00±0.08比0.28±0.03， t＝32.641， P<0.01)；CRYAB＋miR-NC组的侵袭能力和迁移能力高于Vector＋miR-NC组(1.00±0.08比3.22±0.18， t＝43.650， P<0.01；1.00±0.08比1.88±0.23， t＝14.000， P<0.01)。miR-491-EV组的鼠骨肉瘤转移性肺结节的数量(6.03±1.21比1.02±0.23， F＝154.412， P<0.05)和肺重量(0.68±0.09比0.47±0.04， F＝43.254， P<0.05)低于NC-EV组。 结论:miR-491能够通过下调CRYAB在骨肉瘤中的表达作为肿瘤抑制因子。

目的:探讨长链非编码RNA((lncRNA)LBX2-AS1靶向调控微小RNA(miRNA，miR)-491-5p影响骨肉瘤细胞增殖及凋亡的分子机制。方法:采用实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)检测2017年10月至2018年12月郑州大学第一附属医院收集的骨肉瘤组织与瘤旁组织中LBX2-AS1、miR-491-5p的表达量。选取人骨肉瘤细胞U2OS为研究对象，按照数字表法随机分为4组：si-NC组(转染si-NC)、si-LBX2-AS1组(转染si-LBX2-AS1)、si-LBX2-AS1＋anti-miR-NC组(共转染si-LBX2-AS1与anti-miR-NC)、si-LBX2-AS1＋anti-miR-491-5p组(共转染si-LBX2-AS1与anti-miR-491-5p)，分别将si-NC、si-LBX2-AS1、si-LBX2-AS1与anti-miR-NC、si-LBX2-AS1与anti-miR-491-5p转染至U2OS细胞。噻唑蓝(MTT)检测细胞存活率；应用流式细胞仪检测细胞周期；流式细胞术检测细胞凋亡率；双荧光素酶报告实验验证LBX2-AS1与miR-491-5p的靶向关系；蛋白质印迹法(Western blot)检测细胞周期蛋白1(Cyclin D1)、p21、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Caspase-3)蛋白表达量。两组间比较采用 t检验，多组间比较采用单因素方差分析。 结果:瘤旁组织与骨肉瘤组织组织中LBX2-AS1的表达量分别为(1.01±0.10)、(3.56±0.35)，miR-491-5p的表达量分别为(1.02±0.10)、(0.16±0.02)，与瘤旁组织比较，骨肉瘤组织中LBX2-AS1的表达水平显著升高( t＝35.027， P<0.05)，miR-491-5p的表达水平显著降低( t＝42.165， P<0.05)，差异均有统计学意义；si-NC组与si-LBX2-AS1组细胞存活率分别为(100.02±10.00)%、(55.67±5.54)%，G 1期比例分别为(38.51±2.55)%、(52.27±4.68)%，S期比例分别为(30.10±2.14)%、(15.36±1.26)%，细胞凋亡率分别为(8.28±0.92)%、(24.11±2.37)%，与si-NC组比较，si-LBX2-AS1组细胞存活率显著降低( t＝11.638， P<0.05)，细胞周期G 1期比例明显升高( t＝7.745， P<0.05)，S期比例明显降低( t＝17.806， P<0.05)，细胞凋亡率显著升高( t＝18.680， P<0.05)，Cyclin D1表达量显著降低( t＝20.871， P<0.05)，p21、Caspase-3表达量显著升高( t＝22.687， P<0.05； t＝20.871， P<0.05)，差异均有统计学意义；双荧光素酶报告实验证实LBX2-AS1能够靶向结合miR-491-5p；抑制miR-491-5p表达能减弱抑制LBX2-AS1表达对U2OS细胞增殖的抑制作用，还能减弱抑制LBX2-AS1表达对U2OS细胞凋亡的促进作用。 结论:lncRNA LBX2-AS1通过调控miR-491-5p从而促进骨肉瘤细胞增殖，抑制细胞凋亡。

目的:探讨长链非编码RNA(lncRNA)SUCLG2-AS1对非小细胞肺癌细胞增殖和免疫逃逸的影响及对微小RNA-491-5p(miR-491-5p)的调节作用.方法:通过Cancer LncRNA Census数据库分析SUCLG2-AS1在非小细胞肺癌组织中的表达及SUCLG2-AS1表达量与非小细胞肺癌患者生存期的关系.通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测SUCLG2-AS1在非小细胞肺癌株A549、PG49、H1975、H2170和人正常肺支气管上皮细胞BEAS-2B中表达量的变化.培养H1975细胞并分为si-NC组和si-SUCLG2-AS1组.集落实验和流式细胞术检测H1975细胞的增殖能力和细胞周期.蛋白质印迹(Western blot)检测H1975细胞免疫相关蛋白细胞程序性死亡-配体1(PD-L1)、维甲酸相关孤儿受体γt(RORγt)和细胞周期相关蛋白细胞周期依赖性蛋白激酶3(Cdk3)、细胞周期蛋白C(Cyclin C)、细胞周期依赖性蛋白激酶2(Cdk2)的表达.LncRMap生物信息学软件预测SUCLG2-AS1可结合的微小 RNA.RNA pull-down 实验验证 SUCLG2-AS1 与 miR-491-5p 的直接结合.通过 qRT-PCR 检测 SUCLG2-AS1对miR-491-5p表达的调节作用.结果:与正常肺组织比较,非小细胞肺癌组织中SUCLG2-AS1表达升高(P＜0.01).SUCLG2-AS1高表达的非小细胞肺癌患者生存期短于SUCLG2-AS1低表达患者(P＜0.01).与BEAS-2B细胞比较,非小细胞肺癌株中SUCLG2-AS1表达升高,H1975细胞中SUCLG2-AS1表达升高最明显(均P＜0.05).与si-NC组比较,si-SUCLG2-AS1组H1975细胞增殖能力降低,G0/G1期细胞比例上升,S期细胞比例减少,G2/M期细胞比例减少(均P＜0.01).与si-NC组比较,si-SUCLG2-AS1组H1975细胞中免疫相关蛋白PD-L1、RORγt表达减少,细胞周期相关蛋白Cdk3、Cyclin C、Cdk2表达减少(均P＜0.01).SUCLG2-AS1靶向直接结合miR-491-5p(均 P＜0.01).与 si-NC 组比较,si-SUCLG2-AS1 组 H1975 细胞中 miR-491-5p 表达上升(P＜0.01).结论:沉默SUCLG2-AS1可能通过上调miR-491-5p表达抑制非小细胞肺癌细胞的增殖和免疫逃逸.

目的 探讨秋水仙碱对胶质瘤细胞系化疗敏感性的影响及其机制.方法 采用不同浓度的替莫唑胺(TMZ)处理人脑胶质瘤细胞系U87和A172细胞,构建TMZ耐药细胞系U87/TR和A172/TR,再使用秋水仙碱(10、30 ng/ml)干预1、2、3 d,采用细胞计数法、BrdU法和流式细胞术检测细胞活力、细胞增殖和细胞周期.生物信息学方法分析胶质瘤组织差异表达的微小RNA(miRNAs),并预测其靶基因;然后,采用qRT-PCR检测U-87/TR和A172/TR细胞中这些miRNAs的表达情况,调控miRNAs的表达以观察秋水仙碱效应的变化.结果 秋水仙碱显著抑制U87/TR和A172/TR细胞的增殖活力(P<0.05),呈时间依赖性和剂量依赖性(P<0.05),而且显著阻滞U87/TR和A172/TR的有丝分裂,使细胞阻滞在G0/G1期.30 ng/ml秋水仙碱显著增加TMZ对U87/TR和A172/TR细胞增殖的抑制效果(P<0.05),明显降低TMZ的IC50值(P<0.05).生信分析显示,胶质瘤组织miR-330-3p、miR-491-5p、miR-6782-5p、miR-31-5p、miR-330-5p、miR-137和miR-433-3p呈差异表达,秋水仙碱明显上调U87/TR和A172/TR细胞miR-330-3p的表达(P<0.05)、明显抑制miR-330-3p靶基因ErbB的表达(P<0.05).抑制miR-330-3p表达明显逆转秋水仙碱的生物学效应(P<0.05).结论 秋水仙碱可以抑制TMZ耐药的胶质瘤细胞的增殖,其机制可能涉及到miR-330-3p/ErbB信号通路的调节.

目的:观察浮针联合新伤续断汤对老年髋部骨折术后凝血功能、肿胀程度、应激状态的影响.方法:选取93例拟行手术治疗的老年髋部骨折患者,按随机数字表法分为方剂组47例及联合组46例.其中方剂组脱落2例,最终纳入45例;联合组脱落1例,最终纳入45例.方剂组给予新伤续断汤治疗,联合组给予浮针联合新伤续断汤治疗.比较2组临床疗效,比较2组术前、术后中医证候评分及肿胀程度、谵妄评定量表-98评分(DRS-R-98)、血浆活化部分凝血活酶时间(APTT)、血浆纤维蛋白原、血浆凝血酶原时间(PT)、丙二醛(MDA)、醛固酮(ALD)、皮质醇(Cor)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-8(IL-8)、微小RNA-491-5p(miR-491-5p)表达水平的变化.结果:联合组临床疗效总有效率为97.78%,方剂组为82.22%,2组比较,差异有统计学意义(P＜0.05).术后10 d,2组中医证候各项评分均较术前下降(P＜0.05),联合组中医证候各项评分均低于方剂组(P＜0.05).2组不同时间点肿胀程度在时间因素、组间因素和时点交互因素方面比较,差异有统计学意义(P＜0.05).术后1 d,2组肿胀程度比较,差异无统计学意义(P＞0.05);术后3 d,2组肿胀程度较术后1 d增加(P＜0.05),术后5、10 d,2组肿胀程度较术后1、3 d降低(P＜0.05),术后10 d 2组肿胀程度较术后5 d降低,联合组肿胀程度较方剂组低(P＜0.05).术后10 d,2组DRS-R-98评分均较术后1 d下降(P＜0.05),联合组DRS-R-98评分低于方剂组(P＜0.05).术后10 d,2组APTT、纤维蛋白原、PT水平均较术后1 d下降(P＜0.05),联合组上述3项水平均低于方剂组(P＜0.05).术后10 d,2组MDA、ALD、Cor水平均较术后1 d下降(P＜0.05),联合组上述3项水平均低于方剂组(P＜0.05).术后10 d,2组TNF-α、IL-8水平均较术后1 d下降(P＜0.05),miR-491-5p均较术后1 d上升(P＜0.05);联合组TNF-α、IL-8水平均低于方剂组(P＜0.05),miR-491-5p水平高于方剂组(P＜0.05).结论:浮针联合新伤续断汤治疗老年髋部骨折术后患者,可抑制机体炎症,减少应激反应,改善凝血功能,改善患者术后谵妄状态、肿胀程度及临床症状,提高临床疗效.

目的 探讨敲减长链非编码RNA(lncRNA)BAIAP2反义RNA 1(BAIAP2-AS1)对胶质瘤细胞增殖、迁移和凋亡的影响及其机制.方法 体外传代培养胶质瘤细胞系A172、LN229、U251及正常人星形胶质细胞系NHA.取传3代、对数生长期细胞,采用RT-qPCR法检测各细胞中微小RNA-491-5p(miR-491-5p)、BAIAP2-AS1、O6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶(MGMT)mRNA表达,选择lncRNA BAIAP2-AS1、miR-491-5p、MGMT mRNA相对表达量变化较显著的胶质瘤细胞进行后续实验.取上述胶质瘤细胞,随机分为空白对照组、BAIAP2-AS1 shRNA组、NC shRNA组、BAIAP2-AS1 shRNA + miR-491-5p inhibitor组、BAIAP2-AS1 shRNA + NC inhibitor组,BAIAP2-AS1 shRNA组、NC shRNA组分别转染BAIAP2-AS1 shRNA、NC shRNA,BAIAP2-AS1 shRNA + miR-491-5p inhibitor组、BAIAP2-AS1 shRNA + NC inhibitor组分别转染BAIAP2-AS1 shRNA与miR-491-5p inhibitor、BAIAP2-AS1 shRNA与NC inhibitor,空白对照组不予转染.转染48 h,收集细胞,采用MTT法检测细胞活性,采用流式细胞术检测细胞凋亡率,采用细胞划痕实验检测细胞迁移率,采用RT-qPCR法检测BAIAP2-AS1、miR-491-5p、MGMT mRNA表达.采用StarBase在线数据库预测miR-491-5p与BAIAP2-AS1、MGMT的互补位点,并采用双荧光素酶报告基因实验验证其靶向调控关系.结果 与NHA细胞比较,A172、LN229、U251细胞lncRNA BAIAP2-AS1、MGMT mRNA相对表达量较高,miR-491-5p相对表达量较低(P均<0.05).以U251细胞lncRNA BAIAP2-AS1、MGMT mRNA相对表达量较高,miR-491-5p相对表达量较低,故以U251细胞进行后续实验.与空白组、NC shRNA组比较,BAIAP2-AS1 shRNA组细胞活性、细胞迁移率、BAIAP2-AS1、MGMT表达显著降低(P均<0.05),细胞凋亡率及miR-491-5p表达显著升高(P均<0.05);与BAIAP2-AS1 shRNA组、BAIAP2-AS1 shRNA + inhibitor NC组比较,BAIAP2-AS1 shRNA + miR-491-5p inhibitor组细胞活性、细胞迁移率、MGMT表达显著增加(P均<0.05),细胞凋亡率及miR-491-5p表达显著降低(P均<0.05).经StarBase在线数据库预测和双荧光素酶报告基因实验验证,BAIAP2-AS1可靶向调控miR-491-5p表达、miR-491-5p可靶向调控MGMT表达.结论 敲减BAIAP2-AS1可通过调节miR-491-5p/MGMT轴抑制胶质瘤细胞增殖、迁移并促进其凋亡.

目的:探讨微小RNA-491-5p(miR-491-5p)过表达对人鼻咽癌HONE-1细胞增殖和迁移的影响,为研究鼻咽癌的发病机制和靶向治疗提供依据.方法:将人鼻咽癌HONE-1细胞分为对照组(转染对照质粒)和miR-491-5p组(转染miR-491-5p质粒).采用荧光显微镜观察2组鼻咽癌HONE-1细胞转染效率,CCK-8法检测2组鼻咽癌HONE-1细胞增殖活性,Transwell小室实验检测2组鼻咽癌HONE-1细胞的迁移细胞数,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测2组鼻咽癌HONE-1细胞中波形蛋白和上皮钙黏素mRNA表达水平,Western blotting法检测2组鼻咽癌HONE-1细胞中波形蛋白和上皮钙黏素蛋白表达水平.结果:与对照组比较,作用24、48和72 h时miR-491-5p组鼻咽癌HONE-1细胞增殖活性(t=2.832,P=0.0473;t=4.522,P=0.0014;t=9.308,P<0.01)和迁移细胞数(t=9.639,P<0.01)明显降低;与对照组比较,miR-491-5p组鼻咽癌HONE-1 细胞中波形蛋白mRNA(t=7.535,P=0.0017)和蛋白(t=7.219,P=0.0187)表达水平明显降低,上皮钙黏素 mRNA(t=4.88,P=0.0395)和 蛋 白(t=5.754,P=0.0289)表 达 水 平 明 显 升 高.结论:MiR-491-5p过表达可以抑制人鼻咽癌细胞的增殖、迁移和上皮-间质转化(EMT).

目的 运用生物信息学和网络药理学方法挖掘黄芪-山药药对治疗 2 型糖尿病的微小RNA(miRNA)-mRNA转录网络,探讨其作用机制.方法 通过GEO数据库挖掘 2 型糖尿病miRNA和mRNA芯片集,并通过中药系统药理学数据库与分析平台(TCMSP)挖掘黄芪-山药药对活性成分及预测靶点,使用R语言及Perl软件筛选黄芪-山药药对治疗2 型糖尿病的关键miRNAs及mRNAs,借助 Cytoscape3.8.2 软件与 STRING数据库构建活性成分-靶点网络、miRNA-mRNA转录网络及蛋白互作(PPI)网络,并进行基因本体(GO)功能及京都基因和基因组百科全书(KEGG)通路富集分析,并借助cytoNCA完成PPI网络的拓扑分析.结果 2 型糖尿病中存在64 个差异miRNA和6 143 个差异mRNA构成的605 组miRNA-mRNA互作关系;黄芪-山药药对存在 56 个有效成分和 538 个药物靶点,如PGR、PTGS1、AR、SCN5A、NCOA2 等.2 型糖尿病-miRNA-mRNA-有效成分-中药调控网络图得到miR-1307-3p-PTPN1、miR-1307-3p-SCN5A、miR-1307-3p-BCL2、miR-1307-3p-CHEK2、miR-1307-3p-E2F2、miR-1307-3p-IL10RB、miR-1307-3p-IRF1、miR-1307-3p-MAPK1、miR-491-5p-PTGS 1 共 9 条 miRNA-mRNA相互关系.PTPN1、SCN5A、BCL2、CHEK2、E2F2、IL10RB、IRF1、MAPK1、PTGS1 共 9 个靶点作为miRNA调控黄芪-山药药对治疗 2 型糖尿病的重要桥梁.GO结果富集在对类固醇激素的反应、对金属离子的反应、对药物的反应、内在凋亡信号通路、RNA聚合酶Ⅱ启动子的转录起始等,KEGG结果富集在脂质和动脉粥样硬化、IL-17 信号通路、糖尿病并发症中的AGE-RAGE信号通路、TNF信号通路、p53 信号通路等.结论 2 型糖尿病中存在多个miRNA-mRNA调控网络,黄芪-山药药对以多组分、多功能、多途径的形式,介导IL-17、TNF、p53、HIF-1等信号通路,miRNA-mRNA网络在黄芪-山药药对治疗 2 型糖尿病中发挥重要作用.

目的 通过生物信息学分析观察40例甲状腺髓样癌患者的癌组织与癌旁组织的微小RNA(miRNAs,miR)表达谱变化,从而寻找疾病相关的重点miRNAs及其靶基因.方法 从GeneExpression Omnibus (GEO)中下载甲状腺髓样癌患者的基因表达数据表达芯片原始数据GSE40807.首先比较了两种样本的差异表达miRNA,利用数据库预测出差异表达miRNA的靶基因,随后分析了这些靶基因的功能及参与的代谢通路,并构建了靶基因之间的互作网络及靶基因与转录因子的调控网络.结果 与正常甲状腺比较,在甲状腺髓样癌中,有21个miRNAs表达发生了显著变化,其中18个miRNAs表达上调和3个miRNAs下调.利用11个预测靶基因数据库得到336个miRNA-靶基因关系对,对这些靶基因进行STRING蛋白互作网络分析,得到230个节点和491个关系对.此外对这些靶基因进行TF预测和调控网络构建,得到7个转录因子、156个节点和300个关系树.结论 通过生物信息方法系统分析了甲状腺髓样癌相关miRNA表达谱及相关靶基因,筛选到miR-124、miR-7和miR-129-5作为甲状腺髓样癌的相关调节因子.

目的 分析血清miR-27与老年2 型糖尿病下肢血管病变及25(OH) D3 水平的关系.方法 选取2017年10月—2019年5月河北省沧州市人民医院内分泌科确诊老年2型糖尿病患者86例为T2DM组,并以有无下肢血管病变分为下肢血管病变 (LLPAD)亚组44例和非下肢血管病变( Non-LLPAD) 亚组42例;选择同期医院门诊健康体检者76例为对照组,测定比较各组血清miR-27 mRNA表达及TC、TG、HDL-C、LDL-C、HbA1c、FPG、25(OH)D3 、hs-CRP、Fib水平.结果 T2DM组miR-27 mRNA、TC、TG、LDL-C、Fib、HbA1c、hs-CRP、FPG水平高于对照组,25( OH) D3 、HDL-C水平低于对照组( t =13. 371、13. 036、25. 364、19. 698、29. 326、38. 489、95. 524、66. 547,66. 241、8. 698, P均=0. 000);LLPAD 亚组 miR-27 mRNA、TC、TG、LDL-C、Fib、 HbA1c、 hs-CRP、 FPG 水平高于 Non-LLPAD 亚组,25 (OH)D3 、HDL-C水平低于Non-LLPAD亚组(t=5. 275、13. 541、26. 541、8. 965、20. 146、14. 548、14. 369、23. 654、7. 711、9. 491,P均=0. 000);miR-27 mRNA与25(OH)D3 、HDL-C呈负相关(r= -0. 486、-0. 483,P=0. 039、0. 039),与TC、TG、LDL-C、Fib、HbA1c、hs-CRP、FPG呈正相关(r=0. 651、0. 572、0. 494、0. 747、0. 438、0. 523、0. 591,P均＜0. 05);高水平的miR-27 mRNA、TC及低水平的25(OH)D3 均为老年2型糖尿病合并下肢血管病变发生的危险因素(OR=2. 437、4. 268、13. 625,P＜0. 05);miR-27 mRNA、25(OH)D3 两者的AUC相近,均小于TC;miR-27 mRNA、25( OH) D3 诊断老年2型糖尿病下肢血管病变的敏感度、特异度相近(P＞0. 05),均小于TC(P＜0. 05).结论 老年2型糖尿病下肢血管病变患者血清miR-27 mRNA水平升高,与25(OH)D3 呈负相关;miR-27、25(OH)D3 诊断2型糖尿病下肢血管病变具有较高的敏感度、特异度,可作为判定2型糖尿病下肢血管病变的生物学标志物.