目的:探讨高级别卵巢浆液性癌（HGSOC）组织中内皮素A受体（ETAR）表达的临床意义；设计ETAR羧基末端（ETAR-C）氨基酸序列来源的ETAR-C融合多肽，研究其对卵巢上皮性癌（卵巢癌）细胞的体外抑癌作用。方法:（1）选择2007年1月1日至2017年12月31日在徐州市中心医院接受手术治疗、术后病理检查确诊为HGSOC且有完整临床病理资料及随访资料的患者共126例，收集其癌组织标本，采用逆转录-PCR技术检测HGSOC组织中ETAR mRNA的表达，并分析其临床意义。（2）以ETAR-C氨基酸序列为基础设计ETAR-C融合多肽，通过体外表达、纯化ETAR-C融合多肽，采用划痕实验、侵袭实验分别检测ETAR-C融合多肽处理后卵巢癌SKOV3和CAOV3细胞的迁移、侵袭能力，四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法检测ETAR-C融合多肽处理后顺铂耐药卵巢癌SKOV3/cDDP和CAOV3/cDDP细胞的化疗敏感性，蛋白印迹（western blot）法检测ETAR-C融合多肽处理后卵巢癌SKOV3和CAOV3细胞中β抑制蛋白1（β-arrestin-1）的表达。结果:（1）HGSOC组织中ETAR mRNA的相对表达水平为18.6±5.1，X-Tile软件分析显示最佳截断值为61.7%，据此将HGSOC患者分为ETAR mRNA高表达（76例）和低表达（50例）。ETAR mRNA高表达与HGSOC患者的腹水量、铂类药物耐药和血清癌抗原125（CA 125）水平均显著有关（ P均<0.05），而与HGSOC患者的年龄、术后残留灶大小无关（ P均>0.05）；ETAR mRNA高表达和低表达患者的5年无进展生存率分别为18.4%、28.0%，5年总生存率分别为38.2%、52.0%，两者分别比较，差异均有统计学意义（ P=0.046， P=0.034）。（2）划痕实验和侵袭实验结果均显示，内皮素1（ET-1）、ET-1+ETAR-C分别处理后SKOV3和CAOV3细胞的划痕愈合率和细胞侵袭率分别比较，差异均有统计学意义（ P均<0.05）。MTT比色法检测显示，加入不同浓度（4、6、8、10、12、24 μg/ml）顺铂后，ETAR-C融合多肽处理后的SKOV3/cDDP和CAOV3/cDDP细胞的抑制率均显著高于对照细胞（ P均<0.05）。western blot法检测显示，ET-1、ET-1+ETAR-C分别处理后SKOV3细胞（分别为1.85±0.09、1.13±0.09）和CAOV3细胞（2.14±0.15、1.66±0.12）中β-arrestin-1蛋白的表达水平分别比较，差异均有统计学意义（ P均<0.05）。 结论:ETAR mRNA高表达HGSOC患者的预后显著差于ETAR mRNA低表达者，ETAR可能成为HGSOC治疗的新靶点。干扰ETAR与β-arrestin-1相互作用的ETAR-C融合多肽具有良好的体外抑制卵巢癌细胞的效果，具有临床应用潜力。

目的:观察Elabela(Ela)对糖尿病肾病(DKD)保护作用及可能机制。方法:db/db小鼠随机分为糖尿病组和Ela干预组，db/m小鼠为正常对照组。Ela干预组小鼠腹腔注射Ela-21 5 mg·kg －1·d －1，持续8周。实验结束测尿白蛋白/肌酐比值(UACR)等代谢指标，HE染色和PAS染色观察肾脏病理学改变，免疫组化观察水通道蛋白2(AQP2)表达，Western blot分析肾脏Ⅳ型胶原蛋白(Col-Ⅳ)和AQP2水平。Ela处理高糖诱导人肾小管上皮细胞(HK-2)，Western blot观察HK2细胞外基质主要成分Col-Ⅳ及AQP2的表达；进一步敲除HK2细胞apelin受体(APJ)，观察Ela的干预效应。最后，利用NanoBit ?技术，研究Ela诱导的APJ激活与抗利尿激素(AVP)诱导的抗利尿激素2型受体(AVPR2)活化间的相互作用，以明确Ela调节AQP2的可能机制。 结果:(1)在不影响血糖、体重等代谢指标的情况下，Ela干预明显降低了db/db小鼠的UACR水平，且肾脏病理损害显著改善，肾组织Col-Ⅳ水平下降，AQP2表达明显降低。(2)Ela干预可明显抑制高糖诱导的Col-Ⅳ表达和AQP2水平，进一步干扰APJ后，Ela对Col-Ⅳ和AQP2调节作用被逆转。(3)Ela激活APJ可明显拮抗AVP诱导的AVPR2下游信号β-Arrestin-2 (ARRB2)传递，进一步提示Ela对AQP2的抑制作用可能与拮抗AVP/AVPR2信号有关。结论:Ela可能通过APJ介导作用，抑制AQP2水平，发挥DKD保护作用。

目的:探讨α-突触核蛋白(α-syn)对帕金森(PD)小鼠β-arrestin 2表达水平的影响及意义。方法:选取运动能力相近的C57BL/6J小鼠28只，随机分为模型组和对照组，每组各14只。采用脑纹状体注射α-syn预成型纤维法建立PD模型，造模4周后观察行为学改变。蛋白免疫印迹法测定中脑星形胶质细胞α-syn、多巴胺受体(DR)、酪氨酸羟化酶(TH)、炎性因子、β-arrestin 2以及核转录因子-κB(NF-κB)信号通路相关蛋白表达水平。荧光共振能量转移(FRET)检测α-syn与β-arrestin 2的相互作用，双荧光素酶报告实验检测α-syn对β-arrestin 2转录激活活性的调节作用。结果:造模4周后，与对照组比较，模型组小鼠平均运动速度显著减小( t＝9.415， P<0.001)，运动轨迹集中在旷场四周且明显稀疏，通过爬杆所需时间显著延长( t＝16.412， P<0.001)；与对照组比较，模型组中脑星形胶质细胞α-syn相对表达量显著升高(1.14±0.18比0.53±0.16)，D1DR(0.67±0.13比1.15±0.11)和TH(0.46±0.05比0.81±0.06)相对表达量显著降低( t＝9.810、10.917、17.356，均 P<0.001)，肿瘤坏死因子-α、白细胞介素-1β和白细胞介素-6以及NF-κB信号通路相关蛋白相对表达量均显著上调( t＝3.583、4.284、5.396、11.747、16.375、18.294，均 P<0.001)，中脑星形胶质细胞β-arrestin 2蛋白的相对表达量均显著降低(0.42±0.11比1.33±0.14)( t＝19.795， P<0.001)；FRET结果显示，α-syn与β-arrestin 2可能存在直接的相互作用；双荧光素酶报告实验结果显示，α-syn基因敲除后，β-arrestin 2转录活性显著上调。 结论:α-syn可能通过激活NF-κB信号通路、诱导星形胶质细胞炎性反应，并通过减少多巴胺的生物合成及其生理功能参与PD的发病过程，且该作用依赖于负性调控β-arrestin 2。

目的:观察β-抑制蛋白1/2(β-arrestin1/2)在帕金森病(PD)小鼠脑组织中的表达情况，分析其参与PD病理过程的可能机制。方法:采用1-甲基-4-苯基-1，2，3，6-四氢吡啶盐酸盐(MPTP)制备PD模型，末次给药后3 d处死小鼠，取脑组织。观察小鼠行为学和脑组织病理学变化，Western bolt法检测脑组织β-arrestin1/2表达，免疫荧光双标记法检测β-arrestin1/2与小胶质细胞共定位情况，分别运用限速酶酪氨酸羟化酶(TH)、Iba-1标记细胞，采用免疫组化染色观察脑片多巴胺能神经元丢失和小胶质细胞活化情况。结果:与空白对照组比较，PD小鼠脑组织中β-arrestin1蛋白相对表达水平升高，β-arrestin2蛋白相对表达水平降低( t＝11.535、9.948，均 P＝0.000)，且β-arrestin1/2与小胶质细胞均存在共同细胞定位。MPTP诱导PD后，β-arrestin1 +/+组和β-arrestin1 -/-组小鼠中脑SNc区Th +神经元数量均减少( t＝4.098、3.571， P＝0.000、0.001)，中脑SNc区Iba-1 +细胞数量均增加( t＝10.097、6.448，均 P＝0.000)。MPTP诱导PD后，β-arrestin2 +/+组和β-arrestin2 -/-组小鼠中脑SNc区Th +神经元数量均减少( t＝3.512、5.237， P＝0.001、0.000)，中脑SNc区Iba-1 +细胞数量均增加( t＝5.816、8.402，均 P＝0.000)。与β-arrestin1 +/+组比较，β-arrestin1 -/-组小鼠小胶质细胞TRAF6、NF-κB及COX-2表达上调( t＝5.324、5.837、9.350，均 P＝0.000)。与β-arrestin2 +/+组比较，β-arrestin2 -/-组小鼠小胶质细胞TRAF6、NF-κB及COX-2表达下调( t＝5.094、6.318、9.466，均 P＝0.000)。 结论:PD小鼠脑组织β-arrestin1表达上调、β-arrestin2表达下调，β-arrestin1/2可能通过TRAF6/NF-κB/COX-2通路影响小胶质细胞增殖活化以及多巴胺能神经元丢失参与PD的病理过程。

目的:通过研究雌激素受体β(ERβ)激动剂二芳基丙腈(DNP)对肝硬化门静脉高压症(PHT)大鼠肠系膜动脉(MA)反应性和Rho激酶信号通路的影响，阐述DNP在肝硬化门静脉高压症大鼠内脏高动力循环中的作用机制。方法:雌性大鼠行双侧卵巢切除术，并采用四氯化碳注射创建肝硬化PHT模型。分组干预后检测各组血流动力学参数、MA血管反应性，并检测各组大鼠MA中ERβ、Rho激酶信号通路相关蛋白和受体脱敏相关蛋白的表达。结果:DNP能明显改善去势肝硬化大鼠的血流动力学参数，提高MA对去甲肾上腺素的反应性，提高受抑制的ROCK蛋白的激活作用，并下调β-arrestin-2的表达和ERK1/2的磷酸化水平。结论:DNP能提高MA对缩血管物质的反应性，明显改善去势肝硬化大鼠的高动力循环状态。该效应可能与DNP改善MA对缩血管物质的受体脱敏现象，从而激活Rho激酶通路有关。

目的:探讨参茸复方对自身免疫性脑脊髓炎(EAE)小鼠DOR-β-arrestin1-Bcl-2 信号通路的影响.方法:将 60 只C57 BL/6 雌性小鼠分为正常对照组、模型组、醋酸泼尼松(3.9 mg/kg)组及参茸复方高(54.6 g/kg)、中(27.3 g/kg)、低(13.65 g/kg)剂量组,除正常对照组外,剩余 5 组均制备EAE模型,免疫 7 d后灌胃给药,正常对照组和模型组均灌胃相应体积生理盐水,给药体积均为 10 mL/kg,连续给药 14 d.自免疫当天起,每日对小鼠进行神经功能评分;HE染色检测各组小鼠脑和脊髓组织的细胞形态及炎性反应;免疫组化和Western Blotting检测各组小鼠脑和脊髓中DOR、β-arrestin1、Bcl-2 蛋白表达.结果:与模型组比较,各给药组大鼠神经功能评分显著降低(P<0.05).组织病理学检查结果显示,模型组脑和脊髓组织有大量炎性细胞聚集,核固缩明显,各给药组脑和脊髓组织病理改变均有不同程度改善.免疫组化及Western Blotting结果显示,与模型组比较,除参茸复方低剂量组外各给药组脑和脊髓组织DOR蛋白表达显著升高,β-arrestin1、Bcl-2 蛋白表达显著降低(P<0.01).结论:参茸复方具有缓解EAE进展的作用,其机制与DOR-β-arrestin1-Bcl-2信号通路有关.

心血管疾病(CVD)是全球人类死亡和致残的主要原因.肾素-血管紧张素系统的过度激活是CVD发病及病情恶化的重要因素之一,其中血管紧张素Ⅱ1型受体(AT1R)介导血管紧张素Ⅱ发挥了主要作用.AT1R发挥心血管作用不仅通过介导G蛋白偶联受体信号通路,还可以激活β-arrestin信号通路.本文就靶向AT1R及β-arrestin信号通路在CVD中的研究进展作一综述.

目的:分析系统性硬化症(systemic sclerosis,SSc)合并肺间质病变(interstitial lung disease,ILD)患者外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMCs)全基因组DNA甲基化和转录组表达谱,并进一步探讨DNA甲基化对Wnt/β-catenin信号通路和趋化因子信号通路的影响.方法:收集19例SSc患者(SSc组)及18例健康人(对照组)外周血PBMCs.SSc患者中有10例合并ILD(SSc合并ILD亚组)、9例未合并ILD(SSc未合并ILD亚组).采用Illumina 450K甲基化芯片和Illumina HT-12 v4.0基因表达谱芯片分析全基因组DNA甲基化和基因表达水平,研究DNA甲基化对Wnt/β-catenin和趋化因子信号通路的影响.结果:全基因组DNA甲基化分析发现:与SSc未合并ILD亚组比较,SSc合并ILD亚组存在71个高甲基化位点,98个低甲基化位点.转录组分析发现:与SSc未合并ILD亚组相比,SSc合并ILD亚组有164个基因表达上调,191个基因表达下调.SSc组患者PBMCs中Wnt/β-catenin信号通路中有35个低甲基化基因,其中卷曲同源物1(frizzled-1,FZD1)、丝裂原活化蛋白激酶9(mitogen-activated protein kinase 9,MAPK9)、母亲DPP同源物2(mothers against DPP homolog 2,SMAD2)、转录因子7类似物2(transcription factor 7-like 2,TCF7L2)和无翅型MMTV整合位点家族成员5B(wingless-type MMTV integration site family,member 5B,WNT5B)mRNA在SSc组中的表达显著高于对照组,差异均有统计学意义(均P<0.05).与SSc未合并ILD亚组比较,SSc合并ILD亚组中Dickkopf相关蛋白2(dickkopf homolog 2,DKK2)、FZD1、MAPK9等多个基因的mRNA表达虽上调,但差异均无统计学意义(均P>0.05).趋化因子信号通路中有38个低甲基化基因,其中β-抑制蛋白1(β-arrestin 1,ARRB1)、C-X-C基序趋化因子配体10(C-X-C motif chemokine ligand 10,CXCL10)、C-X-C基序趋化因子配体16(C-X-C motif chemokine ligand 16,CXCL16)、FGR、中性粒细胞胞浆因子1C(neutrophil cytosolic factor 1C,NCF1C)mRNA在SSc组中的表达显著高于对照组,差异均有统计学意义(均P<0.05).与SSc未合并ILD亚组比较,SSc合并ILD亚组中ARRB1、CXCL10、CXCL16等多个基因的mRNA表达上调,但差异均无统计学意义(均P>0.05).结论:SSc合并ILD与SSc无ILD患者存在DNA甲基化和转录组表达谱的差异,且SSc患者PBMCs中存在Wnt/β-catenin和趋化因子信号通路多个基因表达上调,这可能与SSc的发病机制有关.

目的:探讨腺苷A3受体(adenosine A3 receptor,ADORA3)在牙周炎中的表达模式及调控作用.方法:构建牙周炎动物模型,micro-CT和HE染色观察各组小鼠牙槽骨丧失和牙周组织病理形态,并对结扎侧和对照侧牙龈组织进行转录组测序分析Adora3表达差异,RT-qPCR法检测ADORA3在人和小鼠牙龈组织及巨噬细胞中表达情况,转录组测序分析ADORA3与下游靶基因相关性并通过RT-qPCR法验证.结果:小鼠牙周炎模型构建成功,结扎侧牙龈组织中Adora3表达上调.牙周炎患者牙龈组织中ADORA3表达上调,炎症微环境下Adora3表达降低.转录组测序分析显示Adora3表达与下游靶基因抑制蛋白β-2(arrestin beta-2,ARRB2)呈正相关,且Arrb2基因敲除后Adora3表达下调.结论:基于转录组学分析及体外实验验证,ADORA3在不同来源牙龈组织及巨噬细胞中差异表达,且ADORA3表达水平与ARRB2呈正相关.

目的 构建β-arrestin 2的shRNA慢病毒载体,获得稳定低表达β-arrestin2的人非小细胞肺癌A549细胞并验证敲低效果.方法 查询4对可信的β-arrestin2敲低序列,将载体质粒pSicoR-GFP线性化,构建目的质粒,转化感受态细胞,对长出的克隆应用菌落PCR鉴定,再对阳性结果进行测序和比对分析.重组病毒质粒与另外三种辅助包装原件载体质粒通过Lipofectamine 2000共转染293T细胞,培养48 h后,收集细胞培养上清液,导入人非小细胞肺癌细胞A549中,用qRT-PCR检测转染效率.结果 成功构建β-arrestin2的shRNA慢病毒载体质粒,测序比对结果一致.qRT-PCR检测发现一组β-arrestin2的mRNA表达只有对照组的56％.结论 成功构建β-arrestin2的shRNA慢病毒载体,并验证其在人非小细胞肺癌细胞A549中敲低效果显著.