目的 建立加速溶剂萃取(ASE)结合亲水液相色谱(HILIC)柱分离测定坚果中8种生育酚异构体的方法.方法 2 g坚果样品经ASE提取富集后,用BEH Amide色谱柱(150 mm×3.0 mm,1.7 μm)分离,以90％正己烷,10％叔丁基甲基醚-四氢呋喃-甲醇(20∶ 1∶0.1,V/V)作为流动相等度洗脱,荧光检测器激发波长294 nm,发射波长328 nm检测,外标法定量.结果 4种生育酚在0.5～ 80.0 μg/ml、4种生育三烯酚在0.5～ 30.0 μg/ml之间具有良好的线性(r2 ＞0.998),方法检出限在0.032～0.070 mg/kg之间,方法定量限范围0.096 ～ 0.210 mg/kg,三个水平加标回收率在87.5％ ～ 114.2％之间,6次重复测定相对标准偏差(RSD)均≤12％.结论 本方法具有良好的灵敏度、回收率和重复性,适用于坚果中8种生育酚异构体的含量分布的测定.

目的 探究δ-三烯生育酚对HeLa宫颈癌细胞增殖的影响以及microRNA-34a(miR-34a)是否介导这一过程.方法 用荧光定量PCR方法检测miR-34a和细胞增殖关键基因表达的变化,CCK-8检测细胞活力变化,Western blot检测细胞增殖关键基因蛋白水平的变化,流式细胞术检测细胞周期变化;并利用miR-34a模拟剂和抑制剂,探究其对细胞增殖的影响.结果 δ-三烯生育酚处理HeLa宫颈癌细胞36 h显著降低细胞活力并呈剂量依赖效应.用20 μmol/L δ-三烯生育酚处理细胞36 h显著上调miR-34a表达,显著下调细胞周期关键基因CCND1,同时S细胞比例显著下降.细胞转染miR-34a模拟剂后,CCND1表达和细胞活力都下降;而转染miR-34a抑制剂则显著减弱δ-三烯生育酚的增殖抑制作用.结论 δ-三烯生育酚通过上调miR-34a抑制宫颈癌细胞增殖.

目的 研究多花山竹子Garcinia multiflora果实化学成分.方法 采用正、反相硅胶柱色谱及高效液相色谱等多种技术进行分离纯化,并通过谱学数据鉴定化合物结构.结果 从多花山竹子果实乙醇提取物中分离得到了6个化合物,分别鉴定为多花山竹子酮素甲(1)、sargaol (2)、δ-生育三烯酚(3)、木犀草素(4)、1,3,6,7-四羟基(山)酮(5)、对苯二甲酸二(2-乙基)己酯(6).结论 化合物1为新的类金刚烷型间苯三酚类化合物,化合物2、3、6均为首次从该植物中分离得到.

目的 探讨δ-生育三烯酚(δ-T3H)诱导小鼠体内粒细胞集落刺激因子(G-CSF)生成的作用,评价δ-T3H促健康小鼠造血活性作用.方法 雄性C57BL/6J小鼠分别单次sc给予δ-T3H 12.5,25,50,100和200 mg·kg-1,于药后24 h采血,酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清中G-CSF水平,分析δ-T3H诱导小鼠体内生成G-CSF的剂量效应.小鼠单次sc给予δ-T3H 100 mg·kg-1,于给药后3,6,12,24,36,48,72和96 h采血,ELISA检测血清中G-CSF水平和细胞趋化因子1(CXCL1)、粒巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF),白细胞介素6(IL-6),IL-10,IL-12和肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平.雄性小鼠单次sc给予δ-T3H 100 mg·kg-1,于给药后24 h取材分析组织匀浆中G-CSF水平.雄性小鼠连续sc给予δ-T3H 100 mg·kg-15 d,于给药后利用ELISA检测血清中G-CSF、红细胞生成素(EPO)、血小板生成素(TPO)和基质细胞衍生因子1β(SDF-1β)的含量,利用血细胞分析仪检测外周血常规参数.δ-T3H按照100 mg·kg-1分为单次sc给药组和连续2 d sc给药组,于给药24 h后利用流式细胞术分析外周血造血干细胞数量.结果 δ-T3H单次给药升高G-CSF的作用呈给药剂量效应,最低有效剂量≤12.5 mg·kg-1,100 mg·kg-1给药后升高G-CSF的作用达到饱和;δ-T3H单次给药后48 h内以及连续给药期间小鼠血清G-CSF浓度均可维持在较高水平(36±12)μg·L-1;细胞因子检测发现,δ-T3H对CXCL1生成有显著促进作用(P<0.05),不影响血清中其他炎症细胞因子(GM-CSF,IL-6,IL-10,IL-12和TNF-α)的生成;δ-T3H显著升高小鼠淋巴-造血组织如胸腺、脾、淋巴结和骨髓组织液中G-CSF水平(P<0.05),对其他组织器官匀浆中G-CSF含量无显著影响;δ-T3H诱导小鼠血清中TPO和EPO略有升高;血常规检测发现,δ-T3H连续给药可显著增加小鼠外周血白细胞数量(主要为中性粒细胞和单核细胞的升高),血小板小幅升高,而淋巴细胞和红细胞则有一过性降低(P<0.05,P<0.01);流式细胞术分析发现,δ-T3H连续2 d sc给药组小鼠外周血造血干细胞数量显著升高(P<0.01).结论 δ-T3H促进小鼠体内G-CSF生成具有专一性以及组织特异性,同时δ-T3H通过刺激体内G-CSF的生成升高小鼠外周血粒细胞数,并促进外周血造血干细胞数量的增加,具有一定的促造血活性.

目的 分析浙江省鱼、虾、蟹等44种水产品中α-、β-、γ-、δ-生育酚(tocopherol,T)和α-、β-、γ-、δ-三烯生育酚(tocotrienol,T3)8种维生素E异构体的含量.方法 采用碱液加热皂化,液液萃取净化富集,反相高效液相色谱-荧光检测器检测,外标法定量分析维生素E,开展各异构体的含量分析与比较.结果 19种河鱼和14种海鱼中α-生育酚当量(α-tocopherol equivalent,α-TE)范围为0.10 ～4.01mg/100 g可食部,所含维生素E异构体的种类有明显区别.河鱼中α-T、α-T3检出率为100％,γ-T、γ-T3检出率分别为31.58％和68.42％,而14种海鱼中α-T检出率为100％,α-T3、γ-T、γ-T3检出率分别为28.57％、28.57％、35.71％.在野生和养殖生长环境下,鳙鱼、白鲢鱼、汪刺鱼和大黄鱼中各异构体种类有差异,但含量差异无统计学意义.4种河虾蟹和7种海虾蟹中α-TE范围为0.31～14.27 mg/100 g可食部,均以α-T为主.母蟹中α-T含量略高于公蟹中,但差异无统计学意义,其他异构体种类及含量水平基本相同.海鱼中γ-T和α-T3有强相关性,河鱼中维生素E各异构体相关性较弱,虾蟹中维生素E各异构体有一定的相关性.结论 不同淡水和海产品食物中维生素E含量水平差异较大,食用不同的水产品对机体的维生素E异构体和活性总量摄入有不同的影响.

目的 建立HPLC-FLD测定食用大米中8种维生素E(α、β、γ、δ生育酚和α、β、γ、δ三烯生育酚)的方法.方法 食用大米直接用乙醇/二甲亚砜(15/5)超声提取离心后,取上清液测定.实验采用Dikma Inspire PFP(5 μm,250×4.6 mm)色谱柱,以甲醇/水作为流动相梯度洗脱,使用FLD检测器检测(λex=296 nm,λem=325 nm).结果 方法的线性范围:δ生育酚0.0488～4.88 μg/ml、β生育酚0.0387～3.87 μg/ml、γ生育酚0.0528 ～ 5.28 μg/ml、α生育酚0.0553～5.53 μg/ml和δ三烯生育酚0.0472～4.72 μg/ml、β三烯生育酚0.0484～4.84 μg/ml、γ三烯生育酚0.0445～4.45 μg/ml、α三烯生育酚0.044～ 4.40 μg/ml,相关系数R均大于0.9997.方法 定性检出限(s/n=3)δ三烯生育酚、β三烯生育酚、γ三烯生育酚、α三烯生育酚、δ生育酚、β生育酚、γ生育酚和α生育酚分别为:0.0213、0.0255、0.0261、0.0198、0.0216、0.0180、0.0252和0.0306μg/g;定量检出限(s/n=10):0.071、0.085、0.087、0.066、0.072、0.060、0.084和0.102 μg/g;8种组分按高、中、低3个浓度水平加标,平均回收率为94％～104.9％,相对标准偏差RSD(n=6)均＜3％.结论 本方法简便稳定,准确灵敏,适用于食用大米中8种维生素E的同时测定.

目的 研究红木生育三烯酚(annatto-tocotrienol,Annatio-T3,A-T3)对炎症相关性结肠癌小鼠MyD88/NF-κB信号通路的影响.方法 选用5 w龄CD1-ICR小鼠100只,按体重随机分为空白对照(Con)、模型对照(model,M)、annatio-T3高(A-T3-H 100mg/kg·bw)、中、(moderate,M,A-T3-M 75mg/kg·bw)、低(L,A-T3-L 50mg/kg·bw)剂量共5组,每组20只,饲养于SPF级动物房内.除Con组外,其余组别小鼠腹腔注射氧化偶氮甲烷(Azoxymethane,AOM)10mg/kg,正常饮用蒸馏水1w后,然后饮水中给予3％葡聚糖硫酸钠(dextran sodium sulfate,DSS)持续1w,每2d更换新鲜配置的DSS,然后恢复正常饮水2w,此3w为一个DSS周期,总共3个周期的DSS循环.同时,Con组小鼠腹腔注射与AOM同体积的生理盐水,连续饮用蒸馏水.A-T3组小鼠每日分别对应经口给予50、75、100mg/kg·bwδ-生育三烯酚,Con组和M组给予大豆油溶剂处理,实验周期自腹腔注射AOM开始共持续20w.解剖后,称量脾脏及结肠,计算其脏器系数,观察小鼠脾脏及结肠组织病理学改变情况,ELISA检测各组小鼠结肠组织中MyD88和NF-κB的表达,Western blot检测各组小鼠结肠组织中COX-2、IL-6和IKK蛋白的表达水平.结果 与Con组相比,M组结肠、脾脏器系数显著增高,结肠组织中MyD88、NF-κB、COX-2、IL-6和IKK的表达水平显著增高,P<0.05,差异有统计学意义;与M组相比,A-T3-L组、A-T3-M组、A-T3-H组脾脏系数均显著降低,A-T3-H组结肠系数显著降低,A-T3-M组和A-T3-H组MyD88、NF-κB、COX-2的表达水平均显著降低,P<0.05,差异有统计学意义.结论 红木生育三烯酚具有抑制炎症相关性结肠癌小鼠MyD88/NF-κB信号通路的作用.

人体血液维生素E主要有8种形式,即α-生育酚、β-生育酚、γ-生育酚、δ-生育酚、α-三烯生育酚、β-三烯生育酚、γ-三烯生育酚和δ-三烯生育酚.α-生育酚是人体分布最广泛、含量最丰富、活性最高的形式,是国内外公认判定人体维生素E营养状况的指标.不同形式的维生素E具有不同的生物活性,实现人体血液维生素E不同形式之间的分离检测有利于进一步探索维生素E与疾病的关系.本文从样本前处理技术和分离检测技术2个方面介绍人体血液维生素E检测技术的研究进展,样本前处理技术包括固相萃取、液液萃取、分散液相微萃取、固相支撑液液萃取和直接蛋白沉淀法,分离检测技术包括自动生化分析法、酶联免疫吸附法、气相色谱法、液相色谱法和超高效超临界流体色谱法.本文对上述检测方法的特点和适用范围进行综述,为检验技术人员选择合适的方法提供参考.

目的 建立二维高效液相色谱法同时测定菜肴中维生素A、D、E的方法.方法 试样在抗氧化剂保护下,经过皂化,乙酸乙酯-正己烷混合液(3∶ 2,V/V)提取,二维高效液相色谱仪测定.以华谱Alphasil五氟苯基柱(150 mm×4.6 mm,5 μm)为一维色谱柱,用水和甲醇为流动相进行梯度洗脱,实现视黄醇、α-生育酚、β-生育酚、γ-生育酚、δ-生育酚、α-生育三烯酚的基线分离,荧光检测器检测;以华谱Alphasil VC-C18柱(4.6 mm×150 mm,3.5μm)为二维色谱柱,用含2％甲醇的乙腈溶液为流动相进行梯度洗脱,实现维生素D2、D3与其他杂质的分离,紫外检测器检测.结果 本研究实现视黄醇、维生素D2和维生素D3、5种生育酚的基线分离检测,在预设的浓度范围内各目标化合物呈线性相关,相关系数＞0.999;样品中三水平加标回收率为85.4％～106.4％,相对标准偏差＜8％.对干炸带鱼、油焖香菇、酱油蒸蛋、红烧肉、糖醋排骨等常见成品菜肴进行6次重复测定,相对标准偏差均小于10％.视黄醇的检出限为0.7 μg/100 g,定量限为2.4 μg/100 g,5种生育酚的检出限为1.1～2.5 μg/100g,定量限为 3.6～8.3 μg/100 g;维生素 D2、D3 的检出限为 0.3 μg/100g,定量限为1.0μg/100g.应用本方法检测了 41份成品菜肴中维生素A、D、E含量,发现在动物源性菜肴中可检出维生素A和D3,在所有菜肴中均可检出α-生育酚和γ-生育酚,在使用了植物油的菜肴中可检出5种生育酚.带鱼采用清蒸、红烧、干炸3种不同的烹饪方式,维生素A和D3的含量依次降低.结论 本方法具有操作简单、重复性好、准确性高,对操作人员和生态环境友好等特点,可实现成品菜肴中维生素A、D、E的同时分型检测.