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肿瘤坏死因子α诱导蛋白6基因在脑胶质瘤中的表达及其临床意义
编辑人员丨6天前
目的:研究肿瘤坏死因子α诱导蛋白6(TNFAIP6)基因在脑胶质瘤中的表达及其临床意义,从而探讨其在脑胶质瘤进展中的生物学功能。方法:回顾性分析中国脑胶质瘤基因组图谱计划(CGGA)数据库中309例脑胶质瘤样本的转录组数据及其临床资料,并应用癌症基因组图谱计划(TCGA)数据库的脑胶质瘤患者(550例)进行验证。应用R软件分析 TNFAIP6在不同级别、不同分子分型脑胶质瘤中的表达情况,并应用免疫组织化学检测方法验证TNFAIP6蛋白在不同级别脑胶质瘤中的表达情况。通过Kaplan-Meier生存曲线分析 TNFAIP6不同表达水平的脑胶质瘤患者的生存差异。采用单因素和多因素Cox回归分析判断 TNFAIP6的表达水平对不同级别脑胶质瘤患者预后的影响。通过Pearson相关性检验分析 TNFAIP6与其他基因表达的相关性。通过基因本体分析(GO)和京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路富集分析方法评估 TNFAIP6表达相关基因的生物学功能。 结果:在CGGA和TCGA数据库中, TNFAIP6在世界卫生组织(WHO)分级Ⅱ级、Ⅲ级及Ⅳ级胶质瘤中的表达水平逐渐升高(均 P<0.01);通过免疫组织化学染色验证的结果与上述结果一致( P<0.01)。 TNFAIP6在WHO不同级别的异柠檬酸脱氢酶( IDH)野生型胶质瘤患者中的表达水平均高于 IDH突变型(均 P<0.01); TNFAIP6在经典型和间质型胶质瘤患者中的表达水平均高于前神经元型和神经元型(均 P<0.01); TNFAIP6在O 6-甲基鸟嘌呤甲基转移酶启动子甲基化胶质瘤患者中的表达水平显著高于非甲基化者(均 P<0.01)。在CGGA和TCGA数据库中, TNFAIP6高表达组患者的总生存期均短于低表达组(均 P<0.001);多因素Cox回归分析结果显示,病理级别( HR=2.371,95% CI:1.686~3.335)、放疗( HR=0.431,95% CI:0.286~0.651)及 TNFAIP6的表达水平( HR=1.305,95% CI:1.041~1.636)均为脑胶质瘤患者预后的独立影响因素(均 P<0.05)。CGGA和TCGA数据库中,与 TNFAIP6表达呈正相关的基因分别为1 064个和1 954个( r≥0.5, P<0.01)。生物信息学分析结果显示,基因功能主要富集在血管外基质组成、血管生成、细胞黏附及炎症应答等。 结论:随着脑胶质瘤病理级别的升高, TNFAIP6的表达水平逐渐升高; TNFAIP6主要参与血管外基质组成、血管生成、细胞黏附及炎症应答等生物学过程,其可作为脑胶质瘤患者预后的预测因素及潜在的研究和治疗靶点。
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编辑人员丨6天前
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新疆出血热病毒糖蛋白多表位嵌合肽基因的免疫原性研究
编辑人员丨6天前
目的:探讨新疆出血热病毒(XHFV)糖蛋白的2个抗原优势区(GcⅠ和GcⅡ)以不同嵌合策略以及不同免疫方式诱导小鼠免疫应答的效果。方法:以在5'端加入或不加鼠白细胞介素-2(IL-2)信号肽与通用型辅助性T细胞(Th)表位为不同设计策略,将GcⅠ、GcⅡ及GcⅠ上已鉴定出来的表位(Gc 233~248、Gc 241~256和Gc 281~296)分别进行融合并构建至真核表达载体pVAX1与原核表达载体pET-28a上。采用间接免疫荧光法检测重组真核质粒的体外表达效果后进行大量提取,将重组原核质粒转化大肠杆菌BL21进行诱导表达及纯化。通过基因免疫、蛋白免疫和DNA初免-蛋白加强免疫(联合免疫)3种方式免疫BALB/c小鼠,酶联免疫吸附测定法检测小鼠体内IgG抗体水平以及小鼠脾细胞培养上清中IL-4和干扰素-γ(IFN-γ)的含量,噻唑蓝比色法检测小鼠脾T淋巴细胞的增殖情况。 结果:双酶切及测序结果表明8种重组质粒构建成功。荧光显微镜下可见构建的重组真核质粒在体外细胞均能成功表达。3次免疫小鼠后,各实验组的小鼠血清IgG抗体水平和刺激指数均明显高于对照组(均 P<0.01)。Th2型细胞因子IL-4与Th1型细胞因子IFN-γ的质量浓度检测结果表明,联合免疫组引起的免疫应答偏向Th1型。 结论:成功构建了XHFV糖蛋白的多表位嵌合疫苗且靶抗原在小鼠体内可有效表达,各免疫组与对照组相比均激发了较强的体液免疫及细胞免疫应答,其中pVAX1-ST(GcⅠe+GcⅡ)联合重组蛋白r(GcⅠe+GcⅡ)的免疫效果最好,有望作为XHFV的新型候选疫苗。
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编辑人员丨6天前
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大电导钙依赖性钾通道参与脓毒症炎症应答的机制研究
编辑人员丨6天前
目的:探讨大电导钙依赖性钾通道(BKCa)参与脓毒症发病的机制。方法:收集脓毒症患者(28例)、普通感染者(25例)和健康体检者(25例)血清,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)测定BKCa水平;并分析脓毒症患者血清BKCa水平与急性生理学与慢性健康状况评分Ⅱ(APACHEⅡ)的相关性。培养RAW 264.7细胞,用脂多糖(LPS)刺激,部分实验以尼日尼亚菌素(Nigericin)作为第二刺激信号构建脓毒症细胞模型;采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)、蛋白质免疫印迹试验(Western blotting)测定不同浓度LPS(0、50、100、1 000 μg/L)刺激后细胞BKCa的mRNA和蛋白表达。RAW 264.7细胞转染BKCa的小干扰RNA(siRNA-BKCa),用Western blotting测定细胞天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶1前体(pro-caspase-1)、白细胞介素-1β前体(pro-IL-1β),细胞培养液中caspase-1 p20、IL-1β p17,以及NOD样受体蛋白3(NLRP3)、核转录因子-κB(NF-κB)水平。碘化丙啶(PI)染色后荧光显微镜下观察凋亡情况,测定乳酸脱氢酶(LDH)释放率,Western blotting测定细胞凋亡蛋白Gasdermin D(GSDMD)表达以评估沉默BKCa对细胞焦亡的影响。结果:脓毒症患者血清BKCa明显高于普通感染者和健康体检者(ng/L:165.2±25.9比102.5±25.9、98.8±20.0,均 P<0.05),且脓毒症患者血清BKCa水平与APACHEⅡ评分呈显著正相关( r=0.453, P=0.013)。用LPS构建脓毒症细胞模型,显示LPS呈浓度依赖地促进BKCα的mRNA和蛋白表达,1 000 μg/L刺激后细胞BKCa的mRNA和蛋白表达水平均较空白组(0 μg/L)明显增加〔BKCa mRNA(2 -ΔΔCt):3.00±0.36比1.00±0.16,BKCa/β-actin:1.30±0.16比0.37±0.09,均 P<0.05〕。与对照组比较,模型组细胞caspase-1 p20/pro-caspase-1比值、IL-1βp17/pro-IL-1β比值均明显升高(caspase-1 p20/pro-caspase-1比值:0.83±0.12比0.27±0.05,IL-1βp17/pro-IL-1β比值:0.77±0.12比0.23±0.12,均 P<0.05);但转染siRNA-BKCa后二者均较模型组明显下降(caspase-1 p20/pro-caspase-1比值:0.23±0.12比0.83±0.12,IL-1βp17/pro-IL-1β比值:0.13±0.05比0.77±0.12,均 P<0.05)。与对照组比较,镜下观察模型组凋亡细胞明显增多,LDH释放率、GSDMD表达明显增加〔LDH释放率:(30.60±8.40)%比(15.20±7.10)%,GSDMD-N/GSDMD-FL:2.10±0.16比1.00±0.16,均 P<0.05〕;但转染siRNA-BKCa后上述指标均较模型组明显下降〔LDH释放率:(15.60±7.30)%比(30.60±8.40)%,GSDMD-N/GSDMD-FL:1.13±0.17比2.10±0.16,均 P<0.05〕。脓毒症细胞NLRP3的mRNA和蛋白表达水平均较对照组明显增加〔NLRP3 mRNA(2 -ΔΔCt):2.06±0.17比1.00±0.24,NLRP3/GAPDH:0.46±0.05比0.15±0.04,均 P<0.05〕;但转染siRNA-BKCa后NLRP3表达较模型组明显下降〔NLRP3 mRNA(2 -ΔΔCt):1.57±0.09比2.06±0.17,NLRP3/GAPDH:0.19±0.02比0.46±0.05,均 P<0.05〕。与对照组比较,脓毒症细胞NF-κB p65核转移明显增加(NF-κB p65/Histone:0.73±0.12比0.23±0.09, P<0.05);而转染siRNA-BKCa后细胞核中NF-κB p65表达明显下降(NF-κB p65/Histone:0.20±0.03比0.73±0.12, P<0.05)。 结论:BKCa参与脓毒症发病,其可能机制是激活NF-κB/NLRP3/caspase-1信号通路诱导炎症因子生成和细胞焦亡。
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编辑人员丨6天前
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DNA损伤修复蛋白NBS1在BPD新生大鼠模型中表达及其作用的研究
编辑人员丨6天前
目的:研究DNA损伤修复蛋白奈梅亨断裂综合征蛋白1(Nijmegen breakage syndrome protein 1,NBS1)在新生大鼠支气管肺发育不良(bronchopulmonary dysplasia ,BPD)模型中的动态表达规律,探讨其对BPD疾病发生、发展的影响。方法:新生大鼠在生后12 h内随机分为BPD模型组50只和对照组50只,模型组吸入氧浓度为80%~85%,对照组吸入空气,两组分别于1 d、3 d、7 d、10 d、14 d收集肺组织标本,分离并培养肺泡Ⅱ型上皮细胞(alveolar type Ⅱ epithelial cell,AECⅡ)。光镜下观察肺组织形态学、辐射状肺泡计数(radial alveolar count,RAC)评价肺泡发育,免疫组织化学法及细胞免疫荧光观察NBS1的定位及表达,蛋白质免疫印迹、实时荧光定量PCR方法检测NBS1的表达水平。结果:与对照组相比,模型组RAC值从生后7 d开始显著降低(对照组7.58±1.24,模型组5.42±1.24, P<0.01)。免疫组织化学法可见NBS1蛋白主要定位在肺泡上皮细胞的细胞核内,模型组1 d时主要在细胞核内表达,随暴露时间延长,胞质染色细胞数量增多,核内表达减弱。细胞免疫荧光可见NBS1蛋白在AECⅡ中主要定位于细胞核内,与对照组相比,模型组3 d开始细胞质染色增强,细胞核染色逐渐减弱,14 d时主要定位于细胞质。蛋白质免疫印迹结果显示,与对照组相比,模型组NBS1的蛋白表达于生后1d达高峰(对照组0.72±0.29,模型组1.28±0.22, P<0.01),随后逐渐下降,14 d表达低于对照组(对照组0.73±0.19,模型组0.49±0.11, P<0.05)。同样与对照组相比,模型组NBS1的mRNA表达水平于生后1 d达高峰(对照组1.00±0.00,模型组1.18±0.06, P<0.01),随后逐渐下降,14 d表达低于对照组(对照组1.07±0.13,模型组0.76±0.11, P<0.05)。 结论:在新生大鼠BPD模型中,NBS1蛋白的表达下调及核富集障碍可能影响了DNA损伤应答,这可能是介导BPD氧化应激损伤发生的机制之一。
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编辑人员丨6天前
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结核分枝杆菌抗原Rv0446c人T细胞抗原表位鉴定及其免疫特征的分析
编辑人员丨6天前
目的:研究结核分枝杆菌Rv0446c的抗原表位及其免疫原性,为结核病的免疫诊断技术及疫苗研发提供候选抗原及表位。方法:利用生物信息学软件TE-predict和IEDB的T细胞表位预测软件对结核分枝杆菌抗原Rv0446c进行T细胞表位预测,用ELISPOT实验检测表位在2019年1月到2020年12月期间来自佛山市第四人民医院和福州肺科医院的结核病患者(50例)、肺部疾病患者(39例)及健康志愿者(55例)中的免疫反应性。将60只6周龄BALB/c小鼠随机分成10组,每组6只,分别采用PBS、血蓝蛋白(KLH)、高剂量结核分枝杆菌抗原Ag85B(50 μg/只)、低剂量Ag85B(20 μg/只)、高计量P120、低剂量P120、高计量P121、低剂量P121、高剂量P123、低剂量P123(P120、P121、P123高剂量为100 μg/只、低剂量为50 μg/只)多肽对其皮下免疫,每只小鼠免疫3次,每次间隔2周,末次免疫后4周,应用ELISA方法检测各组小鼠脾细胞产生的IFN-γ、IL-2、IL-4、IL-10细胞因子水平。结果:预测的7条表位多肽中,ELISPOT试验筛选出4条阳性T细胞表位多肽P120、P121、P122、P123,在结核病患者中检测灵敏度和特异度分别为30.0%、18.0%、6.0%、22.0%和96.8%、98.9%、100%、96.8%。与对照PBS组和KLH组比较,P120多肽能刺激小鼠产生较高水平的IFN-γ、IL-4、IL-10,P121多肽刺激小鼠产生较高水平的IFN-γ和IL-4(均 P<0.05),P123多肽刺激小鼠产生较高水平的IFN-γ(均 P<0.05)。P120、P121、P123多肽刺激小鼠产生的IL-2的水平高于PBS组低于Ag85B-L组和Ag85B-H组(均 P<0.05),但与KLH组差异无统计学意义(均 P>0.05)。 结论:Rv0446c蛋白及其T细胞表位具有较好的免疫原性及免疫反应性,能刺激机体产生强烈的细胞免疫应答,可用于结核病的临床诊断技术研究和新型结核亚单位疫苗的构建。
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编辑人员丨6天前
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新型冠状病毒感染所致急性肺损伤的机制及防治
编辑人员丨6天前
2019新型冠状病毒(2019 novel coronavirus,2019-nCoV)的主要靶器官是肺,严重者发生急性呼吸窘迫综合征而危及生命。2019-nCoV的人类病毒受体主要为血管紧张素转换酶2(ACE2),其他已报道的受体还有CD147蛋白、酪氨酸蛋白激酶受体UFO、神经纤毛蛋白1、肾损伤因子1等。2019-nCoV可通过与ACE2结合,下调ACE2表达,导致血管紧张素水平增高,通过下游信号引起肺损伤。2019-nCoV还可引起炎症因子风暴、凝血功能紊乱、触发肺上皮细胞凋亡等机制导致肺损伤。儿童感染2019-nCoV后临床症状较轻,系由于儿童的固有免疫应答优势而适应性免疫应答水平低下所致。防治肺损伤的根本措施在于抑制2019-nCoV病毒的增殖和复制,但目前尚没有找到抗病毒的特效药物。重组人可溶性ACE2蛋白、针对S蛋白的中和抗体、抑制血管紧张素2、拮抗炎症因子、干细胞输注等措施可能有助于减轻肺损伤。
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编辑人员丨6天前
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新型肠炎沙门菌菌影候选疫苗在小鼠免疫应答和保护功效的评估
编辑人员丨6天前
目的:比较肠炎沙门菌制备的菌影(SE-ghost)通过肌肉注射(肌注)和口服不同免疫途径接种雌性BALB/c小鼠诱导体液和细胞免疫应答的功效。方法:用SE-ghost接种BALB/c小鼠,间接ELISA检测小鼠血清中IgG抗体水平和阴道灌洗液IgA抗体水平;流式细胞仪检测小鼠脾脏CD3 +CD4 +T、CD3 +CD8 +T细胞百分比变化和脾脏内细胞因子IL-4、IFN-γ分泌;三次免疫后所有小鼠口服半数致死量肠炎沙门菌进行强毒攻击。用SE-ghost刺激小鼠骨髓来源树突状细胞(BMDCs),流式细胞仪检测表面分子抗体APC-CD11c、FITC- MHC ClassⅡ、PE-CD40、FITC- CD86、PE-CD80表达量;双抗体夹心ELISA测定BMDCs上清液IL-1β、IL-6、IL-10和IL-12p70的产量。 结果:与PBS组相比,SE-ghost(口服)和SE-ghost(肌注)免疫组小鼠体内肠炎沙门菌特异性抗体IgG和IgA水平明显增高;脾脏CD3 +CD4 +T细胞百分比上调、高分泌细胞因子IL-4 、IFN-γ。肌肉注射SE-ghost比口服可诱导更强的体液和细胞免疫应答。致病菌肠炎沙门菌强毒攻击后,SE-ghost(口服)和SE-ghost(肌注)免疫组生存率高达80%。与对照组相比,BMDCs经SE-ghost刺激后高表达表面成熟分子抗体CD86、CD80、CD40、MHCⅡ,高分泌细胞因子IL-1β、IL-6、IL-10、IL-12p70。 结论:通过肌肉注射SE-ghost进行免疫,可在小鼠中引发更强大的抗原特异性免疫应答,以防止沙门菌感染。SE-ghost是一种有用的沙门菌候选疫苗。
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编辑人员丨6天前
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食管癌组织驻留CD8 +T细胞分布特征及其对患者预后的影响
编辑人员丨6天前
目的:探讨组织驻留CD8 +T(CD103 +CD8 +T)细胞在食管癌组织中的浸润分布特征及其临床意义。 方法:检索癌症基因组图谱数据库数据,分析食管癌组织中CD103 +CD8 +T细胞与经典1型树突状细胞(cDC1)、经典2型树突状细胞(cDC2)、3型树突状细胞(DC3)浸润程度的关系。通过上海芯超生物芯片有限公司收集于2006年1月至2008年12月手术治疗的78例食管癌患者的78份食管癌组织和75份癌旁组织的组织标本,通过电话随访患者临床资料,随访时间截至2015年7月。采用多标记免疫荧光染色和多光谱组织成像检测癌组织和癌旁组织中的CD8 +T细胞、CD103 +CD8 +T细胞的浸润分布。比较食管癌组织与癌旁组织中CD8 +T细胞、CD103 +CD8 +T细胞浸润数量,以及CD103 +CD8 +T细胞与CD8 +T细胞比值百分数(以下简称为CD103 +CD8 +T/CD8 +T)的差异。通过R语言"survminer"程序包绘制CD8 +T细胞、CD103 +CD8 +T细胞不同程度组织浸润患者的Kaplan-Meier生存曲线,获得最佳临界值。分别比较CD8 +T细胞、CD103 +CD8 +T细胞高度浸润与低度浸润患者的TNM分期、病理分期等临床参数。应用Wilcoxon秩和检验、卡方检验、log-rank检验和Cox比例风险回归模型评估上述指标的预后价值,相关性分析采用Spearman等级相关分析。 结果:食管癌患者肿瘤组织中CD103 +CD8 +T细胞浸润程度与cDC1、cDC2、DC3浸润程度均呈正相关( r=0.67、0.53、0.47,均 P<0.001)。食管癌组织中CD8 +T细胞浸润率高于癌旁组织[63.09%(42.14%,76.21%)比2.56%(1.68%,5.38%)],食管癌组织中CD103 +CD8 +T细胞浸润率高于癌旁组织[7.92%(1.60%,20.61%)比0.04%(0.01%,0.10%)],差异均有统计学意义( U=41.00、857.50,均 P<0.001)。病理分期为Ⅰ+Ⅱ期的食管癌患者肿瘤组织中CD8 +T细胞高度浸润者占比低于Ⅲ+Ⅳ期患者[57.9%(33/57)比85.7%(18/21)],TNM分期Ⅰ+Ⅱ期食管癌患者肿瘤组织中CD103 +CD8 +T/CD8 +T高值患者占比低于Ⅲ+Ⅳ期患者[21.6%(8/37)比48.8%(20/41)],差异均有统计学意义( χ2=5.25、6.23, P=0.022、0.013)。Kaplan-Meier生存曲线和单因素Cox比例风险回归模型分析结果显示,食管癌组织中CD8 +T细胞高度浸润患者总生存期长于低度浸润患者( HR=0.57, 95%置信区间0.34~0.96, P=0.034),CD103 +CD8 +T细胞高度浸润与低度浸润患者的总生存期比较,差异无统计学意义( HR=0.66,95%置信区间0.40~1.08, P>0.05)。 结论:食管癌组织中高度浸润的CD103 +CD8 +T细胞有望用于食管癌患者预后的预测,是构成食管癌肿瘤微环境抗肿瘤免疫应答的重要组成部分。
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编辑人员丨6天前
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簇细胞的信号传导机制及生物学作用
编辑人员丨6天前
簇细胞(tuft cell)是一类高度分化的具有特殊表达谱及生物学功能的上皮细胞。近期研究发现簇细胞广泛分布于消化道、呼吸道、结膜、尿道以及牙周组织等组织器官中,介导宿主-微生物相互作用、Ⅱ型免疫应答等,在调控微生态及抗病原微生物感染中发挥重要作用。簇细胞在形态、分化调控、转录物组特征上有一定的保守性,但在不同组织间甚至同一组织内存在异质性,不同的表面受体表达类型及下游效应分子决定其在不同组织中的功能多样性。几乎所有的簇细胞均可表达多种味觉受体及其下游信号传导通路,通过识别组织微环境中的代谢物,包括微生物代谢产物,发挥下游功能作用。本文就簇细胞特征及其在不同组织中的信号传导机制和生物学作用进行综述。
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编辑人员丨6天前
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血小板受体FcγRⅡA免疫学功能研究
编辑人员丨6天前
血小板是来源于巨噬细胞的无核片段,广泛分布于人体血液循环中,其在生理性止血与病理性血栓形成中均发挥着重要作用 [1]。近年来的研究表明,血小板在免疫应答及炎症反应中同样有着极其重要的作用 [2]。血小板在免疫方面的作用包括病原体的识别、影响内皮屏障功能和改变血管通透性、释放储存的炎症因子、与白细胞相互作用并进行信号传导以及通过表面受体进行免疫调节 [3,4]。近年来,针对血小板表面受体调节免疫信号的研究取得了明显进展,相关受体包括Toll样受体(TLR)、血小板糖蛋白Ⅵ(GPⅥ)、血小板Fc受体FcγRⅡA、钙离子依赖型凝集素样受体-2(CLEC-2)、血小板内皮黏附分子-1(PECAM-1)、癌胚抗原相关黏附分子-1(CEACAM-1)和髓样细胞触发受体样转录因子-1(TLT-1)等 [5]。其中血小板表面受体FcγRⅡA是一种对单体免疫球蛋白(Ig)G具有低亲和力而对含IgG免疫复合物具有高亲和力的受体,无论是IgG单体还是免疫复合物中的IgG都通过Fc片段与FcγRⅡA结合。此外,FcγRⅡA也广泛分布在于巨噬细胞、中性粒细胞、部分树突细胞及其他细胞 [6],在血小板介导的各类免疫反应中发挥着重要作用。
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编辑人员丨6天前
