目的:评价肿瘤坏死因子α诱导蛋白家族8样蛋白2(TIPE2)在小鼠脓毒症心肌损伤中的作用及其与丝氨酸苏氨酸蛋白激酶(AKT)/糖原合酶激酶3β(GSK-3β)/β-连环蛋白(β-catenin)信号通路的关系。方法:选择16只雄性野生型C57BL/6N小鼠和16只雄性TIPE2基因敲除C57BL/6N小鼠，6~8周龄，体质量20~25 g，按照随机数字表法分为野生型假手术组(WT-Sham组)、野生型CLP组(WT-CLP组)、TIPE2基因敲除型假手术组(WT-Sham组)和TIPE2基因敲除CLP组(KO-CLP组)，每组8只。采用盲肠结扎穿孔法制备脓毒症小鼠急性心肌损伤模型。术后24 h时采集下腔静脉血标本，采用ELISA法检测血清心肌cTnI浓度，然后处死小鼠，取心肌组织，HE染色观察病理学结果，采用q-PCR法检测TNF-α、IL-1β及IL-6的mRNA表达，Western blot法检测TIPE2、磷酸化AKT(p-AKT)、磷酸化(p-GSK-3β)及β-catenin表达。结果:与相应Sham组比较，相应CLP组血清cTnI浓度升高，心肌组织TNF-α、IL-1β、IL-6的mRNA表达、p-AKT、p-GSK-3β和β-catenin表达上调，TIPE2表达下调( P<0.05)，发生心肌病理学损伤；与WT-CLP组比较，KO-CLP组血清cTnI浓度升高，心肌组织TNF-α、IL-1β、IL-6的mRNA表达、p-AKT、p-GSK-3β和β-catenin表达上调，TIPE2表达下调( P<0.05)，心肌病理学损伤加重。 结论:TIPE2可能通过抑制AKT/GSK-3β/β-catenin信号通路减轻脓毒症小鼠心肌损伤。

目的:评价小鼠围术期神经认知障碍(PND)时海马miR-3065-5p与胰岛素样生长因子-1/磷脂酰肌醇3-激酶/丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶(IGF-1/PI3K/Akt)信号通路的关系。方法:清洁级健康雄性C75BL/6小鼠80只，12~14周龄，体质量20~30 g，采用随机数字表法分为4组( n＝20):对照组(C组)、PND组、miR-3065-5p激动剂组(Ag组)和miR-3065-5p激动剂阴性对照组(Ag-NC组)。采用吸入1.5%异氟烷麻醉下胫骨骨折髓内固定术制备小鼠PND模型。于术前2 d，Ag组侧脑室注射miR-3065-5p agomir 2 μl，Ag-NC组注射miR-3065-5p agomir阴性对照2 μl。于术后7 d时行Morris水迷宫实验和旷场实验，测试结束后麻醉处死取海马组织，采用qRT-PCR法检测miR-3065-5p、IGF-1 mRNA和Bcl-2 mRNA的表达水平，采用Western blot法检测IGF-1、磷酸化Akt(p-Akt)、磷酸化糖原合成酶激酶3β(p-GSK3β)和Bcl-2的表达水平。 结果:4组旷场实验各指标比较差异无统计学意义( P>0.05)。与C组比较，其余3组术后逃避潜伏期延长，目标象限停留时间百分比降低，穿越原平台位置次数减少，海马组织miR-3065-5p表达上调，IGF-1 mRNA、Bcl-2 mRNA、IGF-1、p-Akt、p-GSK3β和Bcl-2表达下调( P<0.05)；与PND组和Ag-NC组比较，Ag组术后逃避潜伏期延长，目标象限停留时间百分比降低，穿越原平台位置次数减少，miR-3065-5p表达上调，IGF-1 mRNA和Bcl-2 mRNA、IGF-1、p-Akt、p-GSK3β和Bcl-2表达下调( P<0.05)。 结论:海马miR-3065-5p表达上调可抑制IGF-1/PI3K/Akt信号通路激活，可能是小鼠PND发生机制之一。

目的 探讨雷公藤甲素通过丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶/糖原合成酶激酶-3β(AKT/GSK-3β)通路对MGC803 细胞增殖、侵袭与迁移的影响.方法 体外培养MGC803 细胞,确定雷公藤甲素的干预剂量和干预时间.将细胞分为阴性对照组(A组,不进行处理),阳性对照组(B组,10μmol/L顺铂),雷公藤甲素高、中、低剂量组(C组、D组、E组).干预 48 h,采用Transwell法检测细胞侵袭能力,采用划痕试验法检测迁移能力,采用免疫印迹(Western blot)法检测检测相关蛋白的表达.结果 随着雷公藤甲素浓度的增加,MGC803 细胞增殖率降低(P<0.05);48h时半数抑制浓度(IC50)最小,选择干预时间为 48 h,C组、D组、E组的干预剂量分别为 80,40,20 nmol/L.与B组比较,C组、D组、E组侵袭细胞数、细胞迁移距离及波形蛋白(vimentin),snail,p-AKT/AKT,p-GSK-3β/GSK-3β表达水平均显著升高(P<0.05),上皮钙黏素(E-cadherin)、β-联蛋白(β-catenin)表达水平均显著降低(P<0.05),且呈剂量依赖关系.结论 雷公藤甲素可通过抑制AKT/GSK-3β信号通路而抑制MGC803 细胞增殖、侵袭与迁移.

目的 基于磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/丝苏氨酸蛋白激酶(Akt)信号通路探讨归肾育宫汤对早发性卵巢功能不全(POI)大鼠调控卵巢颗粒细胞自噬的机制.方法 取清洁级成年健康雌性SD大鼠32只,随机选择8只大鼠作为空白组,其余大鼠给予皮下注射透明带多肽3(pZP3)建立POI模型.将造模成功大鼠随机分为模型组、戊酸雌二醇组、归肾育宫汤组,每组8只.戊酸雌二醇组给予戊酸雌二醇0.09 mg/kg灌胃,归肾育宫汤组给予归肾育宫汤35 g/kg灌胃,模型组和空白组给予等体积生理盐水灌胃,均1次/d.连续灌胃4周后,腹主动脉取血,ELISA法检测血清促卵泡激素(FSH)、雌二醇(E2)水平;取双侧卵巢称重,计算卵巢指数;取卵巢组织,West-ern blot法检测卵巢组织中PI3K/Akt信号通路相关蛋白表达情况,免疫组化法观察卵巢颗粒细胞中糖原合酶激酶3(GSK-3)和B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)阳性表达情况.结果 与空白组比较,模型组大鼠血清E2水平、卵巢指数及卵巢组织中Akt、PI3K、3-磷酸肌醇依赖性蛋白激酶1(PDK1)蛋白相对表达量和卵巢颗粒细胞中GSK-3、Bcl-2平均光密度值均明显降低(P均＜0.05),血清FSH水平明显升高(P＜0.05);与模型组比较,戊酸雌二醇组和归肾育宫汤组大鼠血清E2水平、卵巢指数及卵巢组织中Akt、PI3K、PDK1蛋白相对表达量和卵巢颗粒细胞中GSK-3、Bcl-2平均光密度值均明显升高(P均＜0.05),血清FSH水平均明显降低(P均＜0.05),戊酸雌二醇组和归肾育宫汤组各指标比较差异均无统计学意义(P均＞0.05).结论 归肾育宫汤可通过调控PI3K/Akt信号通路及其下游相关因子GSK-3、Bcl-2表达,促进卵巢颗粒细胞增殖分化,抑制颗粒细胞过度自噬,调节性激素释放,调控卵泡发育,对POI大鼠卵巢功能起到一定保护作用.

目的:探讨槐耳多糖(HP)调节丝苏氨酸蛋白激酶B(AKT)/糖原合酶激酶-3β(GSK3β)/锌指转录因子(Snail)信号通路对胰腺癌(PC)细胞增殖、凋亡和上皮间质转化(EMT)的影响.方法:将人胰腺癌SW1990细胞分为:Control组(正常培养)、HP低浓度组(1 μg/mL)、HP中浓度组(5 μg/mL)、HP高浓度组(10 μg/mL)、激活剂组(10 μg/mL HP+10 μmol/L AKT/GSK3β/Snail 通路激活剂 SC79);四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测细胞增殖;流式细胞仪检测细胞凋亡;黏附实验检测细胞黏附能力;划痕实验检测细胞迁移;Transwell小室检测细胞侵袭;蛋白免疫印迹法(Western blot)方法检测增殖细胞核抗原(PCNA)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、细胞抗凋亡因子B淋巴细胞瘤-2(Bel-2)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、波形蛋白(Vimentin)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)、E-钙黏蛋白(E-cadherin)及 AKT/GSK3β/Snail 通路蛋白的表达.结果:与control组比较,HP低、中、高浓度组SW1990细胞OD490值、黏附细胞数、划痕愈合率、侵袭数、PCNA、Bcl-2、MMP-2、Vimentin、N-cadherin、p-AKT/AKT、p-GSK3β/GSK3β、Snail 蛋白表达水平降低,细胞凋亡率及Bax、E-cadherin蛋白表达水平升高(P＜0.05);与HP高浓度组比较,激活剂组SW1990细胞 OD490 值、黏附细胞数、划痕愈合率、侵袭数、PCNA、Bcl-2、MMP-2、Vimentin、N-cadherin、p-AKT/AKT、p-GSK3 β/GSK3 β、Snail蛋白表达水平升高,细胞凋亡率及Bax、E-cadherin蛋白表达水平降低(P＜0.05).结论:HP可能通过抑制AKT/GSK3β/Snail信号通路,抑制SW1990细胞增殖、迁移、侵袭和EMT,促进凋亡.

目的 利用MIN6 细胞损伤模型探讨肾气丸加减方通过调控磷脂酰肌醇3-激酶/丝氨酸—苏氨酸激酶/糖原合成激酶 3β(phosphoinositide3-kinase/threonine-protein kinase/glycogen synthase kinase-3β,PI3K/AKT/GSK-3β)信号通路保护胰岛β细胞功能的机制.方法 将MIN6 细胞分为空白组,模型组,肾气丸加减方低、中、高剂量组以及PI3K阻滞剂组(LY294002).用CCK-8 法检测各组细胞活性,胰岛素放射免疫分析试剂盒检测各组MIN6 细胞上清液胰岛素含量,流式细胞术检测各组细胞凋亡率,免疫蛋白印迹法检测各组细胞中PI3K、磷酸化(phosphorylated,p)-PI3K、AKT、p-AKT、GSK-3β、p-GSK-3β 及胰腺十二指肠同源盒-1(pancreatic duodenal homeobox-1,PDX-1)和肌腱膜纤维肉瘤癌基因同源物 A(v-maf musculoaponeurotic fibrosarcoma oncogene homologue A,MafA)蛋白的表达.结果 与空白组比较,模型组MIN6 细胞活性明显下降,胰岛素分泌水平下降,细胞凋亡率明显升高(P<0.01);与模型组比较,肾气丸加减方低、中、高剂量组细胞活力升高,胰岛素分泌水平升高,细胞凋亡率均降低(P<0.05 或 P<0.01);各干预组间比较差异无统计学意义(P>0.05).与空白组比较,模型组PI3K/p-PI3K、AKT/p-AKT、p-GSK-3β蛋白表达明显下调,GSK-3β蛋白表达上调(P<0.05),PDX-1 和MafA蛋白表达明显下调(P<0.01);与模型组比较,肾气丸加减方中、高剂量组PI3K/p-PI3K、AKT/p-AKT、p-GSK-3β蛋白表达均明显上调(P<0.05 或P<0.01),GSK-3β蛋白表达明显下调(P<0.01);PDX-1 和MafA蛋白表达明显上调(P<0.01);加入通路阻滞剂LY294002 后肾气丸加减方上述作用被抵消(P<0.05 或P<0.01).结论 肾气丸加减方可提高糖脂毒性作用下MIN6 细胞活力,减轻细胞凋亡,促进胰岛素分泌,以中、高剂量效果较佳,其机制可能与激活PI3K/AKT/GSK-3β 信号通路、抑制GSK-3β的表达有关,进而升高PDX-1 和MafA的蛋白表达,恢复胰岛β细胞功能.

目的 观察荷芪散对多囊卵巢综合征大鼠内分泌代谢的影响和对PI3K/AKT信号通路的调控作用,探讨荷芪散防治多囊卵巢综合征的可能作用机制.方法 从60只健康雌性SD中随机选取15只作为正常组,其余大鼠均采用颈背部皮下注射脱氢表雄酮(DHEA)的方法建立多囊卵巢综合征模型,将造模成功大鼠随机分为模型组、荷芪散组、二甲双胍组,每组15只.荷芪散组和二甲双胍组分别给予相应药物灌胃,正常组和模型组均给予生理盐水灌胃.灌胃8周后,检测各组大鼠血糖指标[空腹血糖(FPG)、空腹胰岛素(FINS)、胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)]、血脂指标及性激素[黄体生成素(LH)、卵泡刺激素(FSH)、睾酮(T)]水平,同时用HE染色法观察各组大鼠卵巢组织形态,采用RT-PCR方法检测胰岛素受体底物-1(IRS-1)、丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶AKT-2(AKT-2)、糖原合成激酶-3β(GSK-3β)、葡萄糖转运蛋白因子-4(GLUT-4)、人第10号染色体缺失的磷酸酶(PTEN)mRNA表达水平.结果 荷芪散组、二甲双胍组FPG、FINS、HOMA-IR、TC、TG、LDL-C、LH、LH/FSH、T均明显低于模型组(P均<0.05),而HDL-C变化不明显(P>0.05);荷芪散组FPG、FINS、HOMA-IR与二甲双胍组比较差异均无统计学意义(P均>0.05),TG、LDL-C、LH、LH/FSH、T均明显低于二甲双胍组(P均<0.05),而TC、FSH明显高于二甲双胍组(P均<0.05).荷芪散组、二甲双胍组大鼠卵巢组织接近正常.荷芪散组、二甲双胍组大鼠卵巢组织中IRS-1、AKT、GSK-3β、GLUT-4mRNA相对表达量均明显高于模型组(P均<0.05),PTENmRNA相对表达量均明显低于模型组(P均<0.05);荷芪散组大鼠卵巢组织中IRS-1、AKT、GSK-3β、GLUT-4mRNA相对表达量均明显高于二甲双胍组(P均<0.05),PTENmRNA相对表达量明显低于二甲双胍组(P<0.05).结论 荷芪散可通过上调局部卵巢组织PI3K/AKT信号通路中相关重要信号传导分子的基因表达,下调拮抗因子的基因表达,改善多囊卵巢综合征模型大鼠的糖脂代谢、胰岛素抵抗及卵巢组织形态.

目的 探讨绿原酸对结肠癌细胞增殖和凋亡的调控机制.方法 流式细胞术检测不同浓度的绿原酸对人结肠癌细胞株HT-29细胞凋亡的影响,噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖,Transwell检测细胞迁移.建立HT-29细胞的裸鼠荷瘤模型,实验组在肿瘤区域注射100μl绿原酸溶液(100 mg/L),对照组在肿瘤区注射100μl生理盐水.跟踪测量肿瘤体积与质量,用免疫印迹法检测AKT/GSK-3β信号通路相关因子的蛋白表达水平.结果 绿原酸能显著促进HT-29细胞凋亡(P<0.01),抑制细胞增殖(P<0.01),抑制细胞迁移(P<0.05),且均呈现剂量依赖趋势.绿原酸处理的HT-29荷瘤模型小鼠无转移瘤出现.在各时间点,实验组裸鼠肿瘤体积和质量均明显小于对照组(均P<0.05).2组裸鼠肿瘤组织中丝氨酸/苏氨酸激酶(AKT)和糖原合成酶激酶-3β(GSK-3β)表达差异无统计学意义(均P>0.05),但实验组相关磷酸化蛋白p-AKT、p-GSK-3β、β-catenin明显低于对照组(均P<0.01).结论 绿原酸可抑制结肠癌细胞的增殖和转移、促进细胞凋亡,其机制可能是通过AKT/GSK-3β信号通路实现.

糖原合成酶激酶-3β是一种普遍存在于真核细胞中的较保守的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶,其活性受多种激酶和信号通路的调节.糖原合成酶激酶-3β的生物学作用与肿瘤细胞的生长、增殖、凋亡、迁移和转移过程密切相关,是肿瘤治疗的关键靶点之一.研究发现,在不同类型的肿瘤中,糖原合成酶激酶-3β有抑癌和促癌两种截然不同的作用.该文通过查阅国内外相关文献,研究分析糖原合成酶激酶-3β在不同类型肿瘤中的作用及其分子机制,以期为靶向糖原合成酶激酶-3β的肿瘤治疗策略提供参考.

目的 评价海马磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白质丝氨酸苏氨酸激酶/糖原合成酶激酶-3β(PI3K/Akt/GSK-3β)信号通路在右美托咪定减轻异丙酚致新生大鼠远期认知功能减退中的作用.方法 清洁级健康雄性SD大鼠110只,7日龄,体重10～15 g,采用随机数字表法分为11组(n=10):生理盐水组(NS组)、脂肪乳剂组(F组)、10％二甲基亚砜(DMSO)2组(D2组)、右美托咪定组(DEX组)和TDZD-8组(TDZD组)分别腹腔注射生理盐水、脂肪乳剂、10％DMSO 100μl、右美托咪定75μg/kg和TDZD-8 1 mg/kg;10％DMSO1组(D1组)和LY294002组(LY组)分别经侧脑室注射10％DM-SO 5μl和LY294002 25 μg/5 μl;异丙酚组(P组)腹腔注射异丙酚50 mg/kg,待翻正反射恢复后追加50 mg/kg;右美托咪定+异丙酚组(PD组)腹腔注射右美托咪定75 μg/kg,30 min后注射异丙酚;LY294002+右美托咪定+异丙酚组(LYPD组)注射LY294002,30 min后注射右美托咪定,30 min后注射异丙酚;TDZD-8+右美托咪定+异丙酚组(TDPD组)注射TDZD-8,余处理同LYPD组.苏醒后继续饲养至9周龄.采用Morris水迷宫实验评价认知功能;随后处死大鼠取海马,采用RT-PCR法检测PI3K、Akt、GSK-3β、PSD95的mRNA表达;采用Western blot法检测Akt、pAkt(ser473)、GSK-3β、pG-SK-3β (ser9)、PSD95的表达.结果 与NS组比较,P组逃避潜伏期延长,穿越原平台次数减少,PI3K、Akt和PSD95的mRNA表达下调,GSK-3β mRNA表达上调,p-Akt(ser473)/Akt比值降低,PSD95表达下调,pGSK-3β (ser9)/GSK-3β比值升高(P＜0.05);与P组比较,PD组、LYPD组和TDPD组逃避潜伏期缩短,穿越原平台次数增加,PD组PI3K、Akt和PSD95的mRNA表达上调,GSK-3βmRNA表达下调,PD组和TDPD组pAkt(ser473)/Akt比值升高,PSD95表达上调,pGSK-3β(ser9)/GSK-3β比值降低(P＜0.05);与PD组比较,LYPD组逃避潜伏期延长,穿越原平台次数减少,GSK-3βmRNA表达上调,PSD95 mRNA表达下调,pAkt(ser473)/Akt比值降低,PSD95表达下调,pGSK-3β(ser9)/GSK-3β比值升高,TDPD组逃避潜伏期缩短,穿越原平台次数增加,GSK-3β mRNA表达下调、PSD95 mRNA表达上调,pGSK-3β (ser9)/GSK-3β比值降低,PSD95表达上调(P＜0.05).结论 海马PI3K/Akt/GSK-3β信号通路参与了右美托咪定减轻异丙酚致新生大鼠远期认知功能减退的过程.