目的 探讨长链非编码RNA(lncRNA)GHRLOS2在结直肠癌组织和细胞中的表达及作用机制.方法 采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测结直肠癌组织或细胞中GHRLOS2、微小RNA-33b-5p(miR-33b-5p)表达水平.构建过表达GHRLOS2的结直肠癌细胞系HCT116、SW480,通过划痕实验、Transwell实验检测过表达GHRLOS2对HCT116、SW480细胞迁移和侵袭能力的影响;使用葡萄糖检测试剂盒检测过表达GHRLOS2细胞及对照细胞内的葡萄糖含量;采用蛋白质印迹法(Western blot)检测细胞中PCK1蛋白表达水平;基于生物信息学方法预测miR-33b-5p与PCK1的靶向结合关系.结果 qRT-PCR检测结果显示,结直肠癌组织样本中的GHRLOS2表达水平低于癌旁组织,结直肠癌细胞中的GHRLOS2表达水平低于正常结肠上皮细胞,差异有统计学意义(P＜0.05);GHRL0S2表达与Grade分级、Stage分期、淋巴结转移均相关(P＜0.05).结直肠癌组织的miR-33b-5p表达水平高于对应癌旁组织,差异有统计学意义(P＜0.001).划痕实验、Transwell实验、葡萄糖含量检测结果显示,过表达GHRLOS2可显著抑制结直肠癌细胞的侵袭、迁移和葡萄糖代谢.过表达GHRLOS2可抑制miR-33b-5p表达水平;GHRLOS2是miR-33b-5p的分子海绵,PCK1是miR-33b-5p的靶标;过表达GHRLOS2可竞争性结合miR-33b-5p,促进PCK1表达增加.结论 GHRLOS2在结直肠癌组织和细胞中表达下调,其可能通过miR-33b-5p/PCK1途径调节结直肠癌细胞的侵袭、迁移及葡萄糖代谢能力,GHRLOS2有望成为结直肠癌靶向治疗的潜在生物靶点.

基于现代分析技术和功能性消化不良(functional dyspepsia,FD)大鼠模型系统评价鸡内金不同入药形式化学成分和药效的差异性,为鸡内金消食功效物质基础提供依据.分别测定鸡内金散剂和汤剂蛋白质、酶、多糖、氨基酸及黄酮类成分,散剂和汤剂总蛋白分别为0.06%、0.65%;散剂胃蛋白酶和淀粉酶活力效价分别为27.03、44.05 U·mg-1;汤剂多糖为0.03%,散剂中未检出多糖;散剂和汤剂中L型氨基酸总量分别为279.81、8.27 mg·g-1;总黄酮质量分数为 59.51 μg·g-1,汤剂未能检测出酶和黄酮类成分.散剂可明显降低体外营养糊黏度,而汤剂与空白组对营养糊黏度降低无明显作用.采用碘乙酰胺灌胃结合不规则饮食法制备FD大鼠模型,结果显示,散剂和汤剂均可显著提高大鼠胃排空作用、小肠推进率、消化酶活力、血清胃泌素(gastrin,GAS)、胃动素(motilin,MTL)、饥饿素(ghrelin,GHRL)水平,显著降低血管活性肠肽(vasoactive intestinal peptide、VIP)、5-羟色胺[3-(2-ammonioethyl)-5-hydroxy-1H-indolium maleate,5-HT]、生长激素抑制素(somatostatin,SST)水平(P<0.05,P<0.01).散剂和汤剂给药在同等剂量级别组之间比较,散剂组大鼠胃肠推进作用、血清GAS、GHRL、VIP和SST水平明显优于汤剂组,散剂组在胃肠推进作用、血清MTL、GAS、GHRL水平稍高于其2倍生药量的汤剂组,散剂组血清SST、5-HT、VIP水平稍低于其 2 倍生药量的汤剂组.综上,鸡内金汤剂与散剂对功能性消化不良均有治疗作用,但两者作用有较明显差异;同等剂量下,散剂消食药效明显优于汤剂,汤剂需增加剂量以补偿药效.推测鸡内金消食药效具有二元性,散剂的消食活性成分可能包括酶和L型氨基酸,汤剂主要依靠L型氨基酸发挥药效,该研究为探究鸡内金消食活性物质、提高临床用药效果提供了新证据.

目的 探讨生长激素释放相关肽GHRL-12在免疫检查点抑制剂相关心肌炎中的作用与机制,为其临床应用提供理论依据.方法 6～8周龄BALB/c小鼠,采用随机数生成器,随机分为对照组、心肌炎组、GHRL-12组和GHRL-12+心肌炎组.GHRL-12组和GHRL-12+心肌炎组小鼠尾静脉注射10 mg/kg GHRL-12连续1周,同时对照组和心肌炎组小鼠尾静脉注射同等体积的无功能scramble肽.在第7天和第14天分别给予心肌炎组和GHRL-12+心肌炎组小鼠250 μg心肌肌钙蛋白I(cTnI),从第14天开始,每间隔1天给予小鼠腹腔注射5mg/kganti-PD-1,共5次.每7天称量小鼠体重,测量小鼠心体比和心胫比.超声心动图检测心功能指标.HE染色检测心肌组织炎症细胞浸润程度,Masson染色检测心肌组织纤维化程度,并用ImageJ对炎症细胞浸润和纤维化程度进行量化.取小鼠眼球血,检测血清中肌酸激酶(CK)、CK同工酶(CK-MB)和乳酸脱氢酶1(LDH-1)变化.酶联免疫吸附试验(ELISA)检测小鼠血清中炎症因子cTnI、cTnT、白细胞介素1β(IL-1β)、白细胞介素6(IL-6)和肿瘤坏死因子a(TNF-a)释放情况.蛋白质印迹技术测定小鼠心肌组织中自噬相关蛋白高迁移率族蛋白B1(HMGB1)、酵母Atg6同源物(Beclin-1)、自噬基因-相关蛋白5(ATG5)和微管相关蛋白轻链3B(LC3B)的表达,同时测定小鼠心肌组织中凋亡相关蛋白半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(Caspase-3)和多聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(PARP)的表达.对心肌细胞核用DAPI染成蓝色,凋亡细胞被TUNEL染成绿色,检测小鼠心肌组织发生凋亡的情况.结果 (1)与对照组相比,GHRL-12组小鼠体重无显著差异,心肌炎组小鼠体重增长不明显;与心肌炎组比较,给药第19天起GHRL-12+心肌炎组小鼠体重增长较为明显.与对照组和GHRL-12组相比,心肌炎组小鼠心体比、心胫比显著增加,而与心肌炎组小鼠相比,GHRL-12+心肌炎组小鼠心体比、心胫比下降.(2)超声心动图显示,单纯给予GHRL-12干预对小鼠心功能无显著影响,与对照组相比,心肌炎组小鼠左心室射血分数(LVEF)、缩短分数(FS)显著下降,左心室收缩末期内径(LVEDs)、左心室舒张末期内径(LVEDd)显著增加;而与心肌炎组小鼠相比,GHRL-12+心肌炎组小鼠LVEF、FS升高,LVEDs、LVEDd减少.(3)HE染色结果显示,与对照组小鼠相比,心肌炎组小鼠炎症细胞浸润显著增加,而与心肌炎组小鼠相比,GHRL-12+心肌炎组小鼠炎症细胞浸润减少.(4)Masson染色结果表明,与对照组小鼠相比,心肌炎组小鼠心肌组织纤维化程度增加,而与心肌炎组小鼠相比,GHRL-12+心肌炎组小鼠心肌组织纤维化程度降低.(5)与对照组小鼠相比,心肌炎组小鼠血清中CK、CK-MB、LDH-1、cTnI和cTnT均显著上升,而与心肌炎组小鼠相比,GHRL-12+心肌炎组均显著下降.(6)蛋白质印迹结果显示,与对照组小鼠相比,心肌炎组小鼠心肌组织HMGB1、Beclin-1、ATG5和LC3B蛋白表达均显著增加,而与心肌炎组小鼠相比,GHRL-12+心肌炎组均显著下降;同时,心肌炎组Caspase-3和PARP蛋白表达均显著增加,GHRL-12+心肌炎组均显著减少.(7)TUNEL结果显示,与对照组小鼠相比,心肌炎组小鼠心肌组织凋亡显著增加,与心肌炎组小鼠相比,GHRL-12+心肌炎组小鼠心肌组织凋亡显著下降.结论 多肽GHRL-12能够改善免疫检查点抑制剂诱导的心功能损伤,减少心肌组织中炎症细胞浸润和纤维化,抑制心肌组织凋亡和自噬,为未来免疫检查点抑制剂相关心肌炎的治疗提供潜在可能.

目的 探讨帕金森病(PD)患者神经内分泌水平与认知障碍相关性,为PD中晚期患者的评估和治疗提供新靶标.方法 以2020年12月到2021年10月就诊于河北省医科大学第二医院老年病科的PD患者32例作为研究对象.根据是否并发认知障碍将其分为帕金森痴呆组(PDD组)15例和PD组17例;同期选取20例健康志愿者作为健康对照组(N组).收集所有受试者临床资料如性别、年龄及受教育程度等,PD患者同时记录其病程、Hoehn-Yahr分期(H-Y分期)和简易精神量表(MMSE)测评得分.检测各组游离三碘甲状腺素原氨酸(FT3)、游离甲状腺素(FT4)、促甲状腺素(TSH)、饥饿素(GHRL)及褪黑素(MT)水平并统计分析.采用多因素Logistic回归分析PD认知障碍发生和神经内分泌水平变化的相关性.结果 PDD组FT4显著高于PD组和N组(P＜0.05).PD组FT4水平显著高于N组(P＜0.05).PDD组MMSE评分明显低于PD组(P＜0.01),且H-Y分期显著高于PD组(P＜0.05).纳入性别_男、FT4、FT3 和 GHRL 构建多因素 Logistic回归方程(x2=10.383,P=0.062),FT4(x2=14.615,P=0.001)、FT3(x2=7.117,P=0.028)和GHRL(x2=7.205,P=0.027)水平变化与PD认知障碍有相关性.结论 PD患者FT4升高,并发认知障碍时水平进一步升高.FT4是PD认知障碍发生的危险因素.FT3、GHRL可能是PD认知障碍发生的保护因素.

为探究GHRL基因多态性对中华鳖(Pelodiscus sinensis)生长性状的影响, 采用直接测序法在GHRL基因上检测到14个单核苷酸多态性位点C289T、G501T、T738C、G776T、A841G、T885C、T2960C、A2987T、G3390A、A3857C、G4718A、T4820C、A4850C、T4979C.随机选取同批繁殖的120只中华鳖用飞行时间质谱法进行SNPs位点的分型, 并分析与生长性状的相关性.检测结果显示, 所有SNP位点均符合Hardy-Weinberg平衡状态(P>0.05).方差分析结果显示, C289T位点CT、CC基因型的5项生长数据均显著高于TT基因型(P<0.05).S2位点AB基因型的体重、背甲长、背甲宽和裙边宽4项数据均显著高于AA基因型(P<0.05).G3390A位点AG基因型的背甲长、背甲宽2项数据显著高于AA基因型(P<0.05).G4718A位点AG基因型的背甲长、背甲宽、裙边宽3项数据显著高于AA基因型(P<0.05).在GHRL基因上获得的SNP位点可能影响着中华鳖的生长性状或与之紧密连锁, 可为中华鳖分子辅助育种提供助力与参考.

目的 探讨GRHL3在胃癌组织中的表达及其临床意义.方法 采用免疫组化EnVision两步法检测100例胃癌组织及40例癌旁组织中GRHL3蛋白的表达,分析其与胃癌临床病理特征及预后的关系.结果 GHRL3在胃癌组织中的高表达率为64.0％(64/100),在癌旁组织中高表达率为25.0％ (10/40);GRHL3蛋白阳性与患者性别(x2 =0.794,P=0.373)、年龄(x2=1.500,P=0.211)、肿瘤位置(x2=0.568,P=0.451)、肿瘤大小(x2 =1.145,P=0.285)、分化程度(x2=1.382,P=0.240)均无关;与肿瘤临床TNM分期(x2=7.545,P=0.006)显著相关.GRHL3表达水平与胃癌患者预后有相关性.结论 GHRL3在胃癌中的高表达率高于癌旁组织,GRHL3的表达与临床分期有相关性,且GRHL3高表达影响患者预后,检测胃癌组织中GRHL3基因的表达水平有助于分辨肿瘤的恶性程度,并对患者术后治疗和预后分析有一定的指导意义.

目的 探讨参苓白术散加减治疗老年慢性功能性腹泻(CFD)的疗效及对脑肠轴的调控机制.方法 将老年CFD患者116例随机分为对照组与观察组,各58例.对照组给予常规治疗,观察组给予常规治疗联合参苓白术散加减治疗.比较两组临床疗效及症状改善情况,测定血清炎症因子、氧化应激指标、脑肠轴相关激素水平.结果 观察组临床治愈率高于对照组而复发率显著低于对照组(P<0.05).治疗后,观察组的中医证候积分、周排便次数及Bristol大便性状分型值均低于对照组(P<0.05);观察组的血清干扰素γ(IFN-γ)、白介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、二胺氧化酶(DAO)、丙二醛(MDA)、5-羟色胺(5-HT)、生长激素释放肽(GHRL)均低于对照组,白介素-4(IL-4)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、胃泌素(GAS)、胃动素(MLT)、胆缩素(CCK)、血管活性肠肽(VIP)均高于对照组(P<0.05).结论 参苓白术散加减可提高老年CFD的近期疗效并降低远期复发率,调节脑肠轴功能及脑肠肽.

目的 探讨Ghrelin在急性冠状动脉综合征(ACS)中的意义.方法 选取90例ACS患者作为ACS组,包括ST段抬高型心肌梗死(STEMI,30例)组、非ST段抬高型心肌梗死(NSTEMI,30例)组和不稳定型心绞痛(UAP,30例)组,另收集无冠心病病史的体检者30名作为Control组.采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测各组血清Ghrelin含量,分别进行比较.并结合美国国立生物技术信息中心(NCBI)的高通量基因表达(GEO)数据库下载并分析基因表达数据集GSE29532和GSE61145,探究Ghrelin编码基因(GHRL)在ACS患者中的表达水平.结果 ACS不同类型患者血清Ghrelin含量差别很大,STEMI组和NSTEMI组血清Ghrelin含量明显低于UAP组和Control组(P<0.05).UAP组和Control组比较无显著性差异(P>0.05).STEMI组和NSTEMI组再血管化治疗后Ghrelin含量显著增加(P<0.05).GEO芯片分析显示UAP组中GHRL的表达量略高于STEMI组和NSTEMI组,然而3组的GHRL表达量与Control组相比均没有显著差异(P>0.05).STEMI患者治疗后,GHRL表达量有一定程度的上调,但差异无统计学意义(P>0.05).结论 血清Ghrelin含量降低可能与心肌梗死相关.Ghrelin含量的变化与其编码基因(GHRL)表达关系不大,可能还有其他机制如转录后修饰参与调控.Ghrelin含量检测对于ACS具有一定的临床诊疗意义.

目的 评估睡眠和昼夜节律基因多态性及其联合作用与阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征(OSAHS)的相关性.方法 利用公共数据库和已有文献收集与睡眠和昼夜节律相关基因,采用生物信息学分析方法探讨候选基因参与OSAHS的潜在机制,并在新疆维吾尔自治区人民医院选取的50例重度OSAHS和50例非OSAHS患者中进行目标区域二代测序,筛选出OSAHS的易感位点,建立加权遗传风险评分(GRS),分析GRS与OSAHS的关联,探讨GRS与传统因素的交互作用对OSAHS的预测能力.结果 本研究共纳入44个候选基因,进行生物信息学分析表明44个候选基因参与了睡眠与昼夜节律相关生物学过程和信号通路;对不同遗传模型下的变异进行logistic回归分析,调整了潜在的混杂因素后得到KSR2、NPAS2、OXTR、GHRL等4个基因与OSAHS仍有明显的相关性,对上述 4 个基因的 6 个位点(KSR2-rs2592290,rs1992750,rs66837180,NPAS2-rs2278727,OXTR-rs3806675,GHRL-rs10490816)进行GRS,结果显示,高GRS组人群比低GRS组人群有更高的OSAHS风险(OR=2.901,95％CI:1.288-6.534,P=0.010),此外将GRS加入到OSAHS传统风险因素(年龄、性别及BMI)组成的回归模型后,其曲线下面积(AUC)值从0.877增加到0.902.结论 KSR2、NPAS2、OXTR、GHR等睡眠与昼夜节律相关基因可能是OSAHS的遗传易感基因;基于上述4个基因的6个位点建立的GRS与传统因素的联合作用,更能提高OSAHS的预测效能.

目的:研究静宁颗粒对注意缺陷多动障碍(attention deficit hyperactive disorder,ADHD)大鼠的胃肠功能和脑肠肽的影响.方法:将50只SPF级4周龄雄性SHR大鼠按照随机数字表法分为模型组、盐酸托莫西汀组(5.36 mg·kg-1)及静宁颗粒高(30 g·kg-1)、中(15 g·kg-1)、低(7.5 g·kg-1)剂量组,每组10只,并以10只同周龄雄性Wistar大鼠作为空白组,各组大鼠给予相应药物灌胃,空白组及模型组给予去离子水灌胃,每日1次,给药6周.旷场实验评估大鼠行为学变化;灌胃炭末混悬液评价大鼠的胃内容物残留率和小肠推进率;ELISA检测大鼠血清胃泌素(gastrin,Gas)、胃动素(mo-tilin,MTL)、饥饿素(ghrelin,GHRL)、血管活性肠肽(vasoactive intestinal peptide,VIP)、P 物质(substance P,SP)的水平.结果:与空白组比较,模型组大鼠运动总路程明显延长,静止时间明显缩短,中心区域运动时间明显延长,周围区域运动时间明显缩短,小肠推进率及血清GAS、MTL、Ghrelin、SP水平明显降低,胃内容物残留率、血清VIP水平明显升高;与模型组比较,各给药组大鼠运动总路程明显缩短,静止时间明显延长,中心区域运动时间明显缩短,周围区域运动时间明显延长,血清MTL、Ghrelin水平明显升高,VIP水平明显降低;静宁颗粒高、中剂量组大鼠小肠推进率及血清GAS、SP水平明显升高,胃内容物残留率明显降低,差异均具有统计学意义(P＜0.05).结论:静宁颗粒可以改善ADHD大鼠胃肠道功能,调节脑肠肽水平.